蛍光定量PCRは非常に感度の高い実験であり、実験者による操作には高い精度が求められます。そのため、qPCR実験の過程では、以下のような問題に必ず遭遇します。
I. 非実験的要因に関する問題
- 研究室には多数の qPCR 実験プロジェクトがあり、機器が占有されているため、慎重に準備された反応混合物を明確な廃棄方法がないまま残しています。
- 定量サンプル数が多く、サンプルを追加する作業が煩雑で、めまいなどによるサンプル追加ミスが発生し、実験結果が信頼できないというリスクがあります。
- 機械の稼働時間が長く、実験実行回数が限られており、実験タスクを計画どおりに定期的に完了することができません。
- 実験室の設備は新しい機器に置き換えられており、実験室には複数の定量機器があり、定量試薬は機器と互換性がありません。
II. 実験的要因によって制限される問題
低存在量遺伝子の定量化における課題。プライマー設計とスクリーニングプロセスの複雑さ、感度、そして反復ウェルの再現性など…
YEASENは、qPCR試薬の研究開発に長年携わってきた経験豊かなメーカーとして、高性能qPCRプレミックスソリューションであるHieff UNICON™ Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mixを綿密に開発しました。この製品は、前述の実験上の悩みを一挙に解決します。本製品に使用されているUniversal ROXは、従来のROXに代わるもので、様々な機器プラットフォーム間の光路差を補正し、あらゆるqPCR機器に適合します。さらに、本製品は抗体修飾法を採用し、遺伝子増幅を促進する添加剤を配合することで、製品の増幅性能を大幅に向上させています。科学界の研究者の高性能ニーズと産業界の高効率要件を完璧に両立しています。
製品の特徴
- 幅広い機器互換性: プレミックスには特定の種類の参照染料が含まれているため、ROX 濃度を調整する必要がありません。
- 簡単な追跡: 青いプレミックスにより、色を観察するだけでサンプルが追加されたかどうかを直接視覚的に判別できます。
- 高い安定性: システムは室温で調製され、混合システムはテスト結果に変化なく最大 24 時間 4°C で保管できます。
- 迅速なセットアップ: 標準プログラムと高速プログラムの両方と互換性があり、定量実験をわずか 46 分で完了できます。
- 優れた増幅性能: 増幅効率が高く、特異性が良好で、単一コピー数でも遺伝子を検出できます。
製品パフォーマンス
1.高感度：1コピーまで検出可能
図1. Hieff UNICON™ Universal Blueプレミックスは、7桁にわたるテンプレート量範囲を効果的に検出し、高い増幅効率と広い直線範囲における良好な直線関係を示します。使用したテンプレートは、10^6～10^0コピー濃度のプラスミド2µLで、ヒトIL23R遺伝子を増幅しました。
2.検出率と特異性は良好で、GC含有量が30～70%のアンプリマーに広く適用可能
図2. Hieff UNICON™ Universal Blueプレミックスは、GC含量30～70%のアンプリマーに広く適用でき、極めて高い特異性検出率を実現します。293T cDNA 2µLをテンプレートとして、Primer5ソフトウェアを用いて200bpアンプリマー（GC含量30～70%）用のプライマーペア1000組を設計し、そのうち27個のアンプリマーをランダムに増幅しました。
3.高解像度：2倍のテンプレート濃度の違いを正確に区別できる
図3. Hieff UNICON™ Universal Blueプレミックスは、 2倍のテンプレート濃度の違いを正確に識別できます。使用したテンプレートは、293T cDNAストック溶液2µLの2倍勾配希釈液で、GAPDH遺伝子を増幅しました。
4.重複ウェルの良好な再現性：90個の重複ウェル
図4. Hieff UNICON™ Universal Blueプレミックスは優れた再現性を示し、90ウェルの増幅曲線は高い一致を示し、Ct値の標準偏差は0.2未満でした。1µLの293T cDNAをテンプレートとして用い、GAPDH遺伝子を増幅しました。
5.優れた安定性：プレミックスは50回の凍結・解凍後も増幅性能に影響しません。
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凍結融解サイクル |
0回 |
10回 |
30回 |
50回 |
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平均CT値 |
23.11 |
23.17 |
23.18 |
23.25 |
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▲Ct |
- |
0.06 |
0.07 |
0.14 |
図5. Hieff UNICON™ Universal Blueプレミックスは、50回の凍結融解後も増幅性能に変化が見られませんでした。1µLの293T cDNAをテンプレートとして、異なる回数の凍結融解を経たプレミックスを用いてC2orf68遺伝子を増幅しました。
顧客フィードバック
1. サンプル源：マウス卵巣癌細胞株ID8、HM1
2. サンプル源：マウス精巣上体脂肪RNA
3. サンプルソース：シロイヌナズナ葉RNA
YEASEN qPCR Mixを使用して部分的に出版された高インパクトファクターの文献
[1] Li Y, Wang D, Ping X, et al. 局所温熱療法は白色脂肪の褐色化を誘導し、肥満を治療する. Cell. 2022;185(6):949-966.e19.doi:10.1016/j.cell.2022.02.004.( IF=66.850 )
[2] Seki T, Yang Y, Sun X, et al. 寒冷による全身代謝の変化と褐色脂肪を介した腫瘍抑制. Nature. 2022;608(7922):421-428. doi:10.1038/s41586-022-05030-3. ( IF=69.504 )
[3] Chen P, Wang W, Liu R, et al. 嗅覚感覚経験は神経細胞IGF1を介して神経膠腫の発生を制御する. Nature. 2022;606(7914):550-556. doi:10.1038/s41586-022-04719-9.( IF=69.504 )
[4] Dong W, Zhu Y, Chang H, et al. SHR-SCRモジュールがマメ科植物の皮層細胞の運命を決定し、根粒形成を可能にする. Nature. 2021;589(7843):586-590. doi:10.1038/s41586-020-3016-z.( IF=69.504 )
[5] Lu XY、Shi XJ、Hu A、et al. 摂食はmTORC1-USP20-HMGCR軸を介してコレステロール生合成を誘導する. Nature. 2020;588(7838):479-484. doi:10.1038/s41586-020-2928-y.( IF=69.504 )
[6] Bi X, Wang K, Yang L, et al. 非硬骨魚類条鰭類における脊椎動物の着地の遺伝的足跡の追跡. Cell. 2021;184(5):1377-1391.e14. doi:10.1016/j.cell.2021.01.046.( IF=66.850 )
[7] Liu S, Hua Y, Wang J, et al. RNAポリメラーゼIIIは相同組換えによるDNA二本鎖切断の修復に必要である. Cell. 2021;184(5):1314-1329.e10. doi:10.1016/j.cell.2021.01.048.( IF=66.850 )
[8] Liu CX、Li X、Nan F、et al. 環状RNAの構造と分解が自然免疫におけるPKR活性化を制御する. Cell. 2019;177(4):865-880.e21. doi:10.1016/j.cell.2019.03.046.( IF=66.850 )
[9] Han X, Wang R, Zhou Y, et al. Microwell-Seqによるマウス細胞アトラスのマッピング. Cell. 2018;172(5):1091-1107.e17. doi:10.1016/j.cell.2018.02.001.( IF=66.850 )
[10] Chai Q, Yu S, Zhong Y, et al. 細菌性リン脂質ホスファターゼはユビキチンをハイジャックすることで宿主のピロプトーシスを阻害する。Science. 2022;378(6616):eabq0132.doi:10.1126/science.abq0132.( IF=63.714 )
[11] Yu Q, Liu S, Yu L, et al. RNA脱メチル化は圃場試験においてイネとジャガイモの収量とバイオマスを増加させる。Nat Biotechnol. 2021;39(12):1581-1588. doi:10.1038/s41587-021-00982-9.( IF=68.164 )
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[13] Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. ロイシンtRNAシンターゼ2発現B細胞は大腸癌の免疫回避に寄与する. Immunity. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017.( IF=43.474 )
[14] Bi Q, Wang C, Cheng G, et al. ミクログリア由来PDGFBは神経細胞のカリウム電流を促進して基礎交感神経緊張を抑制し、高血圧を制限する。Immunity. 2022;55(8):1466-1482.e9. doi:10.1016/j.immuni.2022.06.018.( IF=43.474 )
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[16] Xiao J, Li W, Zheng X, et al. 7-デヒドロコレステロール還元酵素を標的とすることで、コレステロール代謝とIRF3活性化が統合され、感染が排除される。免疫. 2020;52(1):109-122.e6. doi:10.1016/j.immuni.2019.11.015.( IF=43.474 )
[17] Zhang X, Zhang C, Qiao M, et al. CAR-T細胞におけるBATFの枯渇は、疲弊に対する抵抗性と中心記憶細胞の形成を誘導することにより、抗腫瘍活性を増強する。Cancer Cell. 2022;40(11):1407-1422.e7. doi:10.1016/j.ccell.2022.09.013.( IF=38.585 )
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[19] Fan H, Hong B, Luo Y, et al. ホエイプロテインがSARS-CoV-2およびセンザンコウコロナウイルスのin vitro感染および複製に及ぼす影響. Signal Transduct Target Ther. 2020;5(1):275. 2020年11月24日発行. doi:10.1038/s41392-020-00408-z.( IF=38.104 )
[20]Ren Y, Wang A, Wu D, et al. ヒトサイトメガロウイルスタンパク質UL37x1による自然免疫とアポトーシスの二重阻害が効率的なウイルス複製を可能にする. Nat Microbiol. 2022;7(7):1041-1053. doi:10.1038/s41564-022-01136-6.( IF=30.964 )
注文情報
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製品の位置付け |
製品名 |
猫＃ |
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高感度ユニバーサル定量プレミックス |
11184ES |
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色追跡型高感度蛍光定量プレミックス |
11188ES |
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11189ES |
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11190ES |
拡張読書
RNA から cDNA まで、YEASEN Hifair™ 逆転写 5 分シリーズ製品が迅速なブレークスルーを実現します。