PCRを用いたジェノタイピングなどの実験では、サンプルからゲノムDNAを精製する必要があることがよくあります。検査対象となるサンプル数が多い場合、ゲノムDNAの精製プロセスは時間がかかり、反復的で、コストも高くなります。YEASEN Biologyは、Taq DNAポリメラーゼを改良し、PCR反応システムを最適化することで、ゲノムDNAの精製を不要にしたDirect PCR Kitシリーズを開発しました。
賢いPCR：ダイレクトPCR
YEASENのダイレクトPCRキットは、サンプルから直接PCRを開始します。少量の生サンプル（図1-A）またはそのライセート産物（図1-B）をゲノム精製せずにPCRベースのジェノタイピング（図1）のテンプレートとして使用します。従来のPCRベースのジェノタイピングと比較して、ダイレクトPCRキットは使用するサンプル量が少なく、操作が簡単で、実験コストが低く、ハイスループットのサンプル検出を可能にします。
図1 直接PCR増幅ワークフロー
A.直接法：少量のサンプルを採取し、PCR マスター ミックスに直接加えて PCR 識別を行います。技術的な利点
直接的:時間と費用がかかる DNA 精製は不要です。
高速:テンプレートの準備は 10 分で完了し、PCR 反応はわずか 30 分で完了します。
シンプル:サンプルは切断や粉砕を必要とせずに溶解でき、PCR ミックスは事前に混合された形式であるため、ピペッティングの手順数が削減されます。
節約:使用する材料の量が少ない。
ハイスループット:溶解反応は 96 ウェル プレート内で完了できます。
阻害耐性:さまざまな動物および植物サンプルに対して耐性があります。
ダイレクトPCRキットの実験プロセス
このシリーズの製品は、独自のプロテアーゼ溶解システムを用いてサンプルを溶解します。溶解液はそのままテンプレートとして使用でき、キットに同梱されているPCRマスターミックスと組み合わせて遺伝子増幅に使用できます。
図2 マウス組織の直接PCR実験プロセス
図3 植物組織への直接PCR実験のプロセス
ダイレクトPCR製品選択表
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製品シリーズ |
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製品番号 |
10185ES |
10188ES |
10187ES |
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仕様 |
50トン/200トン |
20T/50T/200T/500T |
50トン/200トン |
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特徴 |
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アンプリコン長 |
≤1 kb |
≤8 kb |
≤1 kb |
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伸長時間（秒/kb） |
30秒 |
≤2 kb: 3～5秒 ≤8 kb: 10秒 |
60秒 |
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適用可能な生物 |
マウス、ラット |
人間、ネズミ、ヤギ、ニワトリ、ブタなど。 |
米、トウモロコシ、タバコ、菜種、小麦、大豆など |
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適用可能な組織/材料の種類 |
マウスの尻尾、マウスの耳、足指（筋肉付き）、その他の臓器 |
EDTA、ヘパリン、クエン酸などの一般的な抗凝固剤を含む新鮮な血液、冷蔵（冷凍）血液、 Whatman903®やFTA®などの市販の乾燥血液スポット |
柔らかい葉、古い葉、苗、柔らかい茎 |
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使用例 |
組織: 5～10 mg マウスの尾: 1～5 mm |
全血: 0.5%-20% ワットマン®乾燥血液スポット: 1 mm2 |
葉：1～10 mm 種子：1～3 mm |
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ゲノムリリース時間 |
15分 |
0～3分 |
0～10分 |
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製品エンド構造 |
鈍端 |
鈍端 |
鈍端 |
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アニール温度 |
温度-(2~5)℃ |
温度-(1~2)℃ |
温度-(2~5)℃ |
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GCクリッピング範囲 |
30～70% |
30～75% |
40～65% |
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5'-3'エキソヌクレアーゼ活性 |
はい |
はい |
はい |
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アプリケーション |
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遺伝子型判定 |
はい |
はい |
はい |
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マルチプレックスPCR |
最大3～4倍 |
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直接サンプル増幅 |
はい |
はい |
はい |
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その他の機能 |
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電気泳動指示薬 |
青 |
無色 |
青 |
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ホットスタート |
はい |
はい |
はい |
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プレミックス/キット |
キット（ミックス付き） |
キット（ミックス+バッファー付き） |
キット（ミックス付き） |
製品パフォーマンス
改良された Taq DNA ポリメラーゼは、阻害剤に対する優れた耐性を備え、ダイレクト PCR を保証します。
精製されていないサンプルをテンプレートとして使用すると、PCR反応を阻害する成分が多数混入します。一般的なPCR反応システムとTaq DNAポリメラーゼでは、理想的な結果を得ることが困難であり、場合によってはPCR増幅が不可能になることもあります。本キットシリーズのPCRミックスは、改良型Taq DNAポリメラーゼを使用した、配合が最適化されたプレミックスです。この改良型Taq DNAポリメラーゼは、テンプレートDNAへの結合性を高め、一般的なPCR阻害物質に対する耐性を高めているため、幅広いテンプレートへの適応性を備えています。
図4：Direct PCR KitのPCR Mixは不純物に対する耐性が高くなっています。同量のテンプレートを用いて、異なるPCR MixでPCRを行い、様々な濃度のPCR反応阻害物質を添加した際のPCR産物量を比較しました。
Y EASEN は、さまざまなサンプルに対応する一連の製品を開発しました。
I. げっ歯類特異的タイプ：マウス組織直接PCRキットプラス（10189ES）
適用サンプル：マウス組織（マウスの尻尾、マウスの耳、マウスのつま先など）
- 高い増幅効率（長さ、速度、GC適合性）
図5：マウス組織ダイレクトPCRキットプラスは、様々な組織由来のライセートを増幅します。1：プラスミド、2：マウスの耳、3：マウスの尾、4：肝臓。溶解条件：70℃で10分間溶解、95℃で5分間不活化。標的断片は1 kb、2 kb、3 kb、6 kbで、伸長時間はそれぞれ3、5、10、20秒/kbに設定しました。M：10510ES60（YEASEN）。
- 幅広いテンプレートの互換性
図6. マウス組織ダイレクトPCRキットプラスを用いて、ヒト293細胞（1）、唾液（2）、頭皮組織（3）を直接溶解（70℃、10分間）し、増幅した。全てのサンプルで明確な標的バンド（M: 10510ES60 (YEASEN)）が検出された。
II. 多種血液ユニバーサルタイプ：血液アドバンスダイレクトPCRキット（10188ES）
- 増幅長は最大8kb
図7. Blood Advanced Direct PCR Kitを用いて、ヒト全血から様々な長さのDNA断片を直接増幅した。血液サンプルは抗凝固剤としてEDTAを添加し、-20℃で保存した。血液テンプレート濃度は10%、伸長時間は10秒/kbに設定した。M: 10510ES60 (YEASEN)。
- 高い耐性
図8 A：Blood Advanced Direct PCR Kitを用いて、ヒトEDTA抗凝固処理全血からGC含量71%の2 kb DNA断片を直接増幅します。血液テンプレート濃度は0.5～50%のグラジエント設定で、伸長時間は10秒/kbです。B：Blood Advanced Direct PCR Kitを用いて、マウスEDTA抗凝固処理全血からGC含量67%の2.2 kb DNA断片を直接増幅します。血液テンプレート濃度は0.5～50%のグラジエント設定で、伸長時間は10秒/kbです。M：10510ES60 (YEASEN)。
III. 植物特異的タイプ：植物組織直接PCRキット（10187ES）
- 複数の種類の植物サンプルで検証済み
図9：様々な植物種の葉組織からの直接増幅結果。M：100 bp DNAラダー。C：対応する植物から精製したゲノムDNAをテンプレートとして使用。1-2：葉組織ライセートをテンプレートとして使用。サイクル数：30サイクル。
顧客事例
- I. マウスの遺伝子型の同定
広州のバイオ企業：
図10. マウスダイレクトPCRキット（10189ES）を用いたマウス尾の増幅。標的遺伝子：500 bp、溶解時間：10分、PCR反応系：25 μL、伸長時間：5秒/kb。
- II. イネ遺伝子直接増幅
XX大学
図11 Plant Direct PCR Kit（10187ES）はイネ関連遺伝子の増幅に使用されます。
注文情報
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製品名 |
製品番号 |
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Hieff™ マウス組織ダイレクトPCRキットII（色素入り） |
10189ES |
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10185ES |
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10188ES |
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10187ES |
関連製品
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製品の位置付け |
製品名 |
製品番号 |
製品仕様 |
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高品質アガロース |
10208ES60/76 |
100グラム/500グラム |
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核酸染色（紫外線下） |
10202ES76 |
500μL |
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迅速なPCRアップグレード、コロニーPCRが可能で、複雑なテンプレート増幅に適しています |
10167ES03/08 |
1mL/5×1mL |
拡張読書
YEASEN Rapid PCR Mix: 3 kbコロニーPCRは1秒/kbまで高速！検出率は最大100%！