説明
このキットは、マウス組織（マウスの尾、マウスの耳、マウスのつま先、筋肉など）を直接かつ迅速にPCR増幅することができ、サンプル適合性も優れています。強力な溶解バッファーを搭載しており、サンプルを迅速に溶解し、ゲノムDNAを放出します。溶解液は精製することなくPCR反応系に直接添加できるため、操作が簡単です。また、サンプル投入量が少なく、5mgのマウス組織または1～5mmのマウスの尾で実験を行うことができます。
本キットに含まれる2×マウスダイレクトPCRミックスは、2倍濃度のホットスタートPCR反応液です。テンプレートとプライマーを除くPCR増幅に必要なすべての成分が含まれているため、操作プロセスが大幅に簡素化され、コンタミネーションのリスクが低減されます。本キットは、トランスジーン同定、マウスのジェノタイピングなどにご利用いただけます。
特徴
- 必要なサンプルは少量です: マウス組織 5 mg またはマウスの尾 1 ～ 5 mm 。
- 便利なテンプレート準備: 粉砕の必要がなく、DNAを精製および精製する必要がなく、フラックスが高く、時間とコストを節約できます。
- 最適化されたPCRシステム：より高い特異性とPCR反応阻害物質に対する強い耐性を備えています。
アプリケーション
- トランスジェニックマウスの識別
- マウスの遺伝子型解析
- マウス遺伝子ノックアウト解析
コンポーネント
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コンポーネント いいえ。 |
名前 |
10185ES50 （50T） |
10185ES70 （200T） |
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10185 -A |
バッファML |
5×1mL |
20×1mL |
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バッファMT |
0.6 mL |
2×1.25mL |
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10185 -C |
2×マウスダイレクトPCRミックス |
500μL |
2×1mL |
a) バッファー ML は強力なタンパク質変性剤を含む溶解バッファーですので、手袋を着用してください。
b) バッファー MT は、バッファー ML の溶解機能を停止するために使用される停止バッファーです。
c) 2× マウス ダイレクト PCR ミックス: ホットスタート Taq DNA ポリメラーゼ、dNTP ミックス、MgCl 2 、反応バッファー、PCR 反応エンハンサー、最適化剤、安定剤、電気泳動指示薬色素などが含まれています。
仕様
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製品仕様 |
キット |
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ホットスタート |
ホットスタート内蔵 |
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オーバーハング |
ブラント |
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輸送条件 |
アイスパック |
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製品タイプ |
ダイレクトPCRキット |
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申請先（アプリケーション） |
ネズミの尻尾、ネズミの耳、ネズミの足の指、内臓、皮膚など。 |
ストレージ
1. 成分A：2～8℃で1年間保管してください。長期間複数回使用する場合は、交差汚染にご注意ください。
2. 成分B/C：-25～-15℃で1年間保存してください。凍結融解の繰り返しは避けてください。
数字
1. 標的遺伝子（1 kb以内）の増幅結果
図1. 1 kb以内の標的遺伝子増幅に適しています。
2. 拡張速度のデモンストレーション
図2. 500 bp遺伝子の場合、伸長速度は1 秒/kb。
「TFPIは、超毒性系統2のC. difficile由来のTcdBの大腸陰窩受容体である。Cell . 2022年3月17日;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010」より引用
文書:
引用と参考文献:
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPIは、強毒性系統2のC. difficile由来のTcdBの大腸陰窩受容体である。Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. Bruton's Tyrosine KinaseはNLRP3インフラマソーム活性化を介して糖尿病腎におけるマクロファージ誘発性炎症を制御する. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
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よくある問題 |
考えられる理由 |
解決 |
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陽性対照および検査対象サンプルにはバンドがありませんでした。 |
PCR反応システムまたは反応条件が適切ではありませんでした。 |
グラジエント PCR を使用して、PCR に最適な反応条件を探ります。 |
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PCR 試薬を不適切に保管すると、活性が失われます。 |
2×マウスダイレクトPCRミックスは-20℃で保管し、使用中に凍結融解を繰り返さないようにしてください。頻繁に使用する場合は、短期間であれば4℃で保管できます。 |
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プライマー設計の問題。 |
プライマーを再設計して確認してください。 |
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陽性コントロールには対象のバンドがあり、テスト対象のサンプルにはバンドがないか、または弱いバンドがあります。 |
不適切な保管や長期間の保管は試薬の活性を失わせる原因となります。 |
新しい試薬を使用してください。 |
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組織溶解液を過剰に加えます。 |
反応システムを増やすか、溶解液の量を減らしてください。 |
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サンプル溶解混合物が不適切に保管されていたか、保管期間が長すぎたため、DNA ゲノムが劣化しています。 |
ライセート混合物は4℃で2～3日間保存できます。PCRには、できるだけ新鮮なライセート混合物を使用してください。 |
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追加されたテンプレートの量が適切ではありません。 |
添加するテンプレートの量は、反応系の1〜10％の範囲内で最適化されました。 |
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PCRサイクル数が不十分です。 |
PCRサイクル数を増やし、できれば35～40サイクルにしてください。テンプレートの複雑さを考慮し、精製DNAテンプレートを使用する場合よりも5～10サイクル多くPCR反応を行う必要があります。 |
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非特異的増幅 |
PCR アニーリング温度が低すぎる、サイクル数、プライマー濃度、またはテンプレート濃度が高すぎる。 |
PCR アニーリング温度を上げ、PCR サイクル数、プライマー濃度、またはテンプレート濃度を下げます。 |
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PCRプライマーの不一致。 |
PCRプライマーを再設計します。 |
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PCR 反応系を準備する際の温度が高すぎるか、準備が完了してからの時間が長すぎます。 |
PCR反応系の準備は低温で行われ、準備が完了したらできるだけ早くPCR増幅反応が行われます。 |
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ネガティブコントロールにターゲットバンドが現れる |
操作ツールまたは試薬の汚染。 |
実験に使用するすべての試薬および器具はオートクレーブ処理する必要があります。標的配列がサンプルガンに吸い込まれたり、遠心管からこぼれたりしないよう、取り扱いには十分注意し、丁寧に扱ってください。 |
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サンプル間の相互汚染。 |
各サンプラーは 1 つのサンプルのみに使用します。または、1 つのサンプルを採取した後、サンプラーの端を 2% 次亜塩素酸ナトリウム溶液に浸し、繰り返しすすいだ後、きれいなペーパータオルで残留物を乾燥させます。 |
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。