説明
Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit は、DNA 精製やサンプル前処理を行わずに全血サンプルを直接増幅できるキットで、新鮮な血液、冷蔵 (冷凍) 血液、および EDTA、ヘパリン、クエン酸などの従来の抗凝固剤を含む市販の乾燥血液染色液と互換性があります。キットには、PCR 阻害薬に対する耐性があり忠実度の高い遺伝子組み換え DNA ポリメラーゼの組み合わせ、強力な伸長因子、増幅増強因子、および迅速な伸長条件下で 8 kb のゲノム断片を効率的に増幅し、2 kb 未満の断片に対して 3-5 秒/kb の伸長時間を設定するように最適化されたバッファー システムが含まれています。これにより、血液サンプルの識別と検査にかかる時間が大幅に短縮されます。
仕様
| フィデリティ（対Taq） | 1 × |
| ホットスタート | はい |
| オーバーハング | 3'-A |
| ポリメラーゼ | Taq DNAポリメラーゼ（品番：10726） |
コンポーネント
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いいえ。 |
名前 |
10188ES20 |
10188ES60 |
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10188-A |
2× Hieff® Blood Advanced PCRバッファー |
500μL |
2.5mL |
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10188-B |
Hieff ®アドバンスド ハイフィデリティ DNA ポリメラーゼ ミックス |
20μL |
100μL |
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10188-C |
陽性対照プライマーミックス（各10μM） |
100μL |
200μL |
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10188-D |
10×DNAローディングバッファー |
1mL |
1mL |
説明書
推奨されるPCR反応システム。
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コンポーネント |
容量（μL） |
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ddH 2 O |
50μLまで |
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2× Hieff® Blood Advanced PCRバッファー |
25μL |
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フォワードプライマー（10 μM） |
2μL |
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リバースプライマー（10 μM） |
2μL |
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Hieff ®アドバンスド ハイフィデリティ DNA ポリメラーゼ ミックス |
1μL |
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血液サンプル |
X |
2. プライマーあたりの最終濃度は 0.4 μM が推奨されます。高すぎると非特異的増幅が発生します。
3. 全血テンプレートの最適な濃度は0.5%～20%ですが、初期試験条件としては10%の使用が推奨されます。つまり、50μLの反応系に全血5μLをテンプレートとして添加し、血栓の吸引に注意します。Whatman®フィルターカードに保存された乾燥した血痕の場合は、血痕が付着した円形の紙片約1mm²を採取し、前処理なしでPCR反応に直接増幅することができます。
反応プログラム
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サイクルステップ |
温度。 |
時間 |
サイクル |
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初期変性 |
95℃ |
5分 |
1 |
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変性 |
95℃ |
15秒 |
30～35歳 |
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アニーリング |
60℃ |
15秒 |
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拡大 |
72℃ |
3～10秒/kb |
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最終延長 |
72℃ |
5分 |
1 |
アニーリング温度は、一般的なTm値、またはプライマーのTm値より1～2℃低い温度です。増幅産物の特異性が低い場合は、最適なアニーリング条件を見つけるために、アニーリング温度勾配を設定することができます。
伸長時間を10秒/kbとすることで、8kb以下の標的断片のほとんどを増幅できます。また、3～5秒/kbとすることで、2kb以下の標的断片のほとんどを増幅できます。増幅効率が低い場合は、伸長時間を20～30秒/kbまで適切に延長できますが、60秒/kbを超えないようにしてください。
配送と保管
製品は-15℃～-25℃で1年間保管してください。
数字
注記
1. 血液テンプレートは総反応量の 10% として使用することをお勧めします。つまり、血栓を吸引しないように注意しながら、全血 5 μL をテンプレートとして 50 μL の反応システムに追加します。
2. 伸長時間を10秒/kbにすると、8KB以下の標的断片のほとんどを増幅できます。また、伸長時間を3～5秒/kbにすると、2KB以下の標的断片のほとんどを増幅できます。増幅効率が低い場合は、伸長時間を30秒/kbまで延長できます。
3. PCR反応後、反応産物を4000 rpm（1000× g）で1〜3分間遠心分離して血球断片を沈殿させ、上清を下流の分析に用いることをお勧めします。
4. 本製品は医療診断に直接使用することはできません。
5. 安全と健康のため、白衣と使い捨て手袋を着用してください。
支払いとセキュリティ
お支払い情報は安全に処理されます。 クレジットカードの詳細を保存したり、クレジットカード情報にアクセスすることはありません
問い合わせ
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よくある質問
この製品は研究目的のみに使用され、人間や動物の治療や診断に使用することを意図したものではありません。製品とコンテンツは、
特定のアプリケーションでは、追加のサードパーティの知的財産権が必要になる場合があります。