従来のqPCRとRT-qPCR試薬がなぜ妨げになっているのか
従来のqPCRおよびRT-qPCR試薬は、プライマー、プローブ、酵素、バッファーを個別に混合するなど、複数の手作業による調製手順を必要とすることがよくあります。これはセットアップ時間を長くするだけでなく、人為的ミスが発生する可能性も高めます。実際、研究によると、手作業による調製では、オペレーターの経験やピペッティングの精度にもよりますが、8～12%ものエラー率が発生する可能性があることが示されています。
- 従来の試薬には他にも次のような制限があります。
- 変動性が高い（CV ≥ 15%）ため、結果に一貫性がない
- 感度は低く、検出限界は通常1～10コピー程度
- ワークフローが長くなり、前処理を含めて2～4時間かかることが多い
- 訓練を受けた人員による管理された実験室環境に限定して適用
- 試薬の廃棄と人件費が高く、利用率は80%未満
オールインワンパワー：完全に事前混合され、完全に最適化された
---Yeasenの二重保証：最高級素材＋革新的なプロセス
YeasenのすべてのプレミックスqPCRおよびRT-qPCR試薬は、最高品質の原材料と最先端の製造技術という2つの柱の上に構築されています。当社の研究開発チームは、各成分を厳密に選定・試験し、純度、安定性、適合性を確保しています。また、高度な製造プロセスにより、バッチごとに一貫した高性能なミックスを保証しています。
この二重のアプローチにより、研究者や診断ラボは、ワークフローを簡素化し、エラーを削減し、信頼性と再現性の高い結果を提供する、すぐに使えるソリューションを活用できるようになります。Yeasen を使用すれば、時間を節約できるだけでなく、あらゆる検査において自信を高めることができます。
図1. オールインワン型と従来のqPCR/RT-qPCR試薬の比較
1.完全に混合されたDNAミックス
（あ） Hieff UniconTM Pro ユニバーサル TaqMan マルチプレックス qPCR ミックス（ワンチューブ、UDG Plus）（カタログ番号 16710）
1)製品の特性
2)超高感度増幅性能
図2 . オールインワンプレミックス試薬を用いたマルチプレックスqPCRにおける信頼性の高い低コピー検出
4 プレックス システムでは、Cat#16710ES は超低濃度サンプル (250 コピー/mL) を確実に検出し、少なくとも 250 コピー/mL の検出限界で優れた感度を実証しました。
3) オールインワンプレミックスの優れた安定性
図3. オールインワンプレミックス試薬の安定性評価
Yeasenのプレミックス（カタログ番号16710ES）を4℃、37℃（7日間）、および50回の凍結融解サイクルで試験しました。-20℃のコントロールと比較して、4つのマルチプレックスqPCRシステム（4重鎖3システム、3重鎖1システム）において、ΔCt値は±0.5以内、蛍光偏差は15%未満に留まり、高い安定性が確認されました。
(B).超クリーン、低DNA残留 - Hieff UniconTM Pure Pro U+ qPCRミックス（1本入り）（カタログ番号16713）
1)超クリーン生産管理
図4. ウルトラクリーン試薬製造および品質管理ワークフロー
2)ウルトラクリーン（残留汚染が少ない、宿主DNA残留が少ない）
図5残留細菌DNAとヒトDNA検査
Yeasenワンチューブプレミックス（カタログ番号16713ES）と従来の試薬を用いたNTC（テンプレートコントロールなし）qPCRを、大腸菌、緑膿菌、MecA、およびヒトDNAシステムで試験しました。Yeasenプレミックスを用いた48ウェルNTCでは増幅は検出されず、細菌およびヒトDNAのバックグラウンドコンタミネーションが極めて低いことが確認されました。
3)優れた完全プレミックス安定性
図6.熱加速安定性試験（37℃、14日間）
4)迅速プロトコルとの互換性
図7. Hieff Unicon™ Pure Pro U+ qPCR Mix（1チューブ、低DNA ） （カタログ番号16713 ）を使用した迅速プロトコル性能検証
7種類のグラジエントサンプル（1～10⁶コピー/μL）を、ABI Q5を用いて標準プロトコル（66分）と迅速プロトコル（30分）の両方で試験しました。迅速プロトコルでは、99%を超える効率、ΔCt±0.5以内、蛍光偏差±10%以内、そして典型的なS字型の増幅曲線を示しました。
2.完全にプレミックスされたRT-qPCRミックス
HifairTM Superpro Ⅱ ワンステップ RT-qPCR マスターミックス（品番11899）
1）優れた増幅性能
図 8. インフルエンザ A 型および B 型を 2000 および 200 コピー/mL で検出した場合の、Yeasen の完全混合型 RT-qPCR 試薬 (カタログ番号 11899)、従来の試薬 (カタログ番号 13650)、競合他社の T ブランドの比較。
Yeasen の試薬は従来の試薬と性能が一致し、T ブランドよりも 1 ～ 2 サイクル早く Ct 値を示し、低いターゲット レベルでの感度が優れていることを示しています。
2）高感度
図9 . HifairTMSuperpro Ⅱ One Step RT-qPCR Master Mix(Cat11899)を使用して、インフルエンザAおよびインフルエンザBを標的としたRT-qPCRを実施した。
この試薬は、低濃度のインフルエンザ A 型および B 型のテンプレートをすべて正常に検出し (8/8)、優れた感度を示しました。
3 ）高安定性ワンチューブプレミックスシステム
(A)4℃で7日間の安定性試験
（B）37℃で5日間の安定性試験
図 10: プライマーとプローブを添加した完全に混合された RT-qPCR 試薬 (Cat#11899) を 4 °C で 7 日間 (A)、および 37 °C で 5 日間 (B) 保存した場合の安定性評価。
（あ） 4 °C、7 日間の安定性: プライマー/プローブを含む Yeasen プレミックスでは、インフルエンザ A/B (2000 および 200 コピー/mL) に対して安定した Ct 値と蛍光値を示し、4 °C で 7 日間保存後も競合他社の T よりも優れた性能を示しました。
(B) 37 °C、5 日間の加速安定性: Yeasen プレミックスは 37 °C で 5 日間安定したままで、RBP (5000 コピー/mL) および RSV (500 コピー/mL) を検出したときに Ct シフトは見られませんでした。
製品リスト
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カテゴリ |
名前 |
猫。 いいえ。 |
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プローブqPCRキット |
「ワンチューブ」で完全に混合された試薬 |
Hieff UniconTM Pro ユニバーサル TaqMan マルチプレックス qPCR ミックス (ワンチューブ、UDG Plus) |
16710ES |
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「ワンチューブ」で完全に混合された試薬、超低DNA残留 |
16713ES |
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Lyo-Ready qPCR試薬 |
11893ES |
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プローブRT-qPCRキット |
ユニバーサルバージョン試薬 |
HifairTM V2 マルチプレックス ワンステップ RT-qPCR プローブキット (UDG Plus、GC エンハンサープラス) |
16630ES |
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「ワンチューブ」で完全に混合された試薬 |
HifairTM Superpro Ⅱ ワンステップ RT-qPCR マスターミックス |
11899ES |
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Lyo-Ready RT-qPCR試薬 |
16645ES |
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