定量PCR（qPCR）と逆転写qPCR（RT-qPCR）は、ライフサイエンス、診断、バイオテクノロジーのあらゆる分野において欠かせないツールです。しかし実際には、従来のワークフローはボトルネックとなることが多く、特にスピード、簡便性、再現性が重要となるPOCT（Point-of-Care Testing：ポイントオブケア検査）環境ではその傾向が顕著です。
幸いなことに、完全にプレミックスされたワンチューブ qPCR ソリューションは分子検出ワークフローを変革し、より高速で一貫性があり、分散環境で使用されるポータブルな自動 qPCR プラットフォームとの互換性を高めています。
図1. 標準ワークフローとYeasen Full Premixワークフローの比較
課題：従来のqPCRは面倒
従来のラボワークフローでは、qPCR のセットアップに時間がかかり、エラーが発生しやすくなります。
- 複数のピペッティングステップ（酵素、プライマー、プローブ、バッファー）
- 汚染リスクの上昇
- スループットの再現性が低い
- 処理に時間がかかる（セットアップだけで30～60分かかる）
現場監視、救急診療所、移動検査室といったPOCTの現場では、これらの問題はさらに深刻になります。人為的なミスはほとんど許されず、余分な手順が増えるごとに結果の伝達が遅れてしまいます。
ソリューション：POCT向けに構築された、高速で完全にプレミックスされたワンチューブqPCRシステム
ワンチューブ qPCR ミックスは、すべての反応コンポーネントを 1 つのマスター ミックスに統合します (マルチプレックス アプリケーション用のプライマーとプローブの事前混合をサポート)。ポイント オブ ケアで使用されるコンパクトな qPCR プラットフォームを含む、迅速なセットアップ、堅牢性、機器の互換性のために最適化されています。
主な利点:
- 超高速セットアップ - 大量バッチの場合でも、20 分以内に混合して実行できます。
- 優れたプレミックス安定性: 37°C で 7 日間、および 20 回の凍結融解サイクル後も安定しています。
- DNA 残留が少ない: 48 個のウェル全体で、大腸菌、緑膿菌、またはヒトゲノム DNA 由来の残留 DNA は検出されませんでした。
- エラーが少なくなり、トレーニングも少なくなります。プロトコルが簡素化されるため、熟練した人員の必要性が最小限に抑えられます。
製品特性
|
カテゴリ |
性能仕様 |
|
特異性 |
（１）時間T0では、複数の標的にわたる16ウェルで増幅が見られず、高い特異性を示しています。 （２）完全に混合された形式で37℃で7日間加速熟成させた後、増幅を示さず、特異性が向上したことを示す。 |
|
線形範囲 |
必要な範囲を満たしています：10～10⁷ コピー/μL、R² ≥ 0.98、増幅効率 100% ± 10%。 |
|
精度 |
高、中、低のテンプレート濃度（CT 値 21 ～ 37）にわたって、変動係数（CV）は 2% 未満です。 |
|
高速プロトコル互換性 |
SLAN-48Sの高速プログラム（20分）に対応しています。標準の50分プログラムと比較して、ターゲットのCT値の差は0.6以内で、検出感度の低下はありません。 |
|
安定性 |
（１）−20℃での保存と比較して、20回の凍結融解サイクル後も増幅性能に変化はない。 （２）37℃（試薬自体）で７日間後、および4℃で７日間後も安定した増幅性能を示す。 （３）プレミックスを37℃で7日間保存しても性能は変わりません。 |
|
感度 |
0.125 コピー/μL という低濃度でも検出します。これは、反応あたり 1 コピーの検出に相当します。 |
1. 線形範囲
図 2. 高速サイクリングプロトコルを使用した N. meningitidis および S. pneumoniae の増幅効率テスト。
(A) ABI 7500 高速モード: N. meningitidis (R² = 0.999, Eff = 99.864%)、S. pneumoniae (R² = 1.000, Eff = 98.952%)
(B) ABI Q5 高速モード: N. meningitidis (R² = 0.999, Eff = 99.14%), S. pneumoniae (R² = 1.000, Eff = 99.756%)
2. 精度
図3. 3種類の異なるテンプレート濃度を用いたqPCR精度分析。アッセイは、すべての濃度において一貫したCT値と低い変動係数（CV < 2%）を示し、高い精度を示しました。
3. 高速プロトコル互換性
|
楽器 |
スラン |
システム |
5 μL DNA（総量25 μL） |
|
テンプレート |
細菌プラスミドテンプレート（B チューブと P チューブ）。 |
テンプレート濃度 |
CT 30-35 |
|
プログラム |
従来プログラム（96S/48S）：95°C 5分；40サイクル（95°C 15秒；60°C 30秒）--50分 高速プログラム（48S高速）：95°C 15秒；40サイクル（95°C 2秒；60°C 8秒）--20分 |
||
表1. 高速プログラムと従来プログラムにおける16924の感度評価
|
16924 |
グループB |
グループP |
||||||
|
96S-従来型プログラム |
家族 |
ビクトリア州 |
ロックス |
家族 |
ビクトリア州 |
CY5 |
ロックス |
|
|
平均Ct値 |
36.16 |
36.13 |
33.23 |
35.61 |
38.81 |
該当なし |
36.03 |
|
|
検出率 |
100%(16/16) |
100%(16/16) |
100%(16/16) |
75%(12/16) |
81.25%(13/16) |
0 |
93.75%(15/16) |
|
|
48S-Fastプログラム |
家族 |
ビクトリア州 |
ロックス |
家族 |
ビクトリア州 |
CY5 |
ロックス |
|
|
平均Ct値 |
36.54 |
36.31 |
33.54 |
36.46 |
39.14 |
36.87 |
36.31 |
|
|
検出率 |
100%(16/16) |
100%(16/16) |
100%(16/16) |
87.5%(12/16) |
68.75%(11/16) |
12.5%(2/16) |
81.25%(13/16) |
|
|
48S-Fastプログラム |
家族 |
ビクトリア州 |
ロックス |
家族 |
ビクトリア州 |
CY5 |
ロックス |
|
|
平均Ct値 |
36.30 |
36.34 |
33.77 |
35.54 |
38.73 |
39.41 |
35.58 |
|
|
検出率 |
100%(16/16) |
100%(16/16) |
100%(16/16) |
87.5%(14/16) |
56.25%(9/16) |
6.25%(1/16) |
87.25%(14/16) |
|
図 4. 従来のプログラムと高速プログラムを使用した 16924 とサプライヤー A* のパフォーマンス比較。
4プレックスプラスミドテンプレート2セット（BチューブおよびPチューブ）を、16924とサプライヤーA*の両方を用いて、比較的高いテンプレート濃度（Ct値30～35）で試験しました。サプライヤーA*は、Pチューブテンプレートの高速プログラムにおいてCt値に1サイクル以上の遅延を示しましたが、16924ではプログラム間で有意差は見られませんでした。16924の一部のターゲットは、高速プロトコルでより早く増幅されました。
4. 強力な安定性
図5. 様々な条件下でのqPCRミックスの安定性評価。-20℃での長期保存、20回の凍結融解サイクル、および37℃で7日間の加速エージング後も、安定した増幅性能を示し、優れた安定性を示しました。
5. 高い阻害剤耐性
|
楽器 |
スラン96S |
システム |
5 μL DNA（総量25 μL） |
|
テンプレート |
細菌プラスミドテンプレート（異なる希釈度）。 |
テンプレート濃度 |
32-38ページ |
|
プログラム |
95℃ 5分；45サイクル（95℃ 15秒；60℃ 30秒） |
||
図 6. 異なるバッファーで希釈した 4 プレックスプラスミド テンプレートを使用した 16924 と市販製品 (サプライヤー A) のパフォーマンスの比較。
図7. 異なる希釈液を使用した16924とサプライヤーAのqPCR性能の比較
TE緩衝液や生理食塩水を含む様々な溶液で希釈したテンプレートを、16924とサプライヤーA*を用いて試験しました。その結果、16924は様々な希釈緩衝液、特に生理食塩水に対して優れた耐性を示し、緩衝液の制限がある環境や現場での検出において、より信頼性の高い検出が可能であることが示されました。
6. 感受性
図8. qPCRミックスの感度および安定性評価。プラスミドテンプレートを10コピー/μLから0.125コピー/μLまで段階希釈し、濃度ごとに8ウェルで試験した。ミックスは、-20℃での保存、20回の凍結融解サイクル、および37℃で7日間の加速エージング後も、一貫した検出性能を維持した。
関連製品
|
カテゴリ |
名前 |
カタログ番号 |
|
|
プローブqPCRキット |
高速、「ワンチューブ」の完全プレミックス試薬、低DNA残留、3G |
16924ESホット |
|
|
「ワンチューブ」完全混合試薬、低DNA残留物、2G |
16713ES |
||
|
「ワンチューブ」完全混合試薬、1G |
Hieff UniconTM Pro ユニバーサル TaqMan マルチプレックス qPCR ミックス (ワンチューブ、UDG Plus) |
16710ES |
|
|
Lyo-Ready qPCR試薬 |
11893ES |
||
|
プローブRT-qPCRキット |
ユニバーサルバージョン試薬 |
HifairTM V2 マルチプレックス ワンステップ RT-qPCR プローブキット (UDG Plus、GC エンハンサープラス) |
16630ES |
|
「ワンチューブ」で完全に混合された試薬 |
11899ES |
||
|
Lyo-Ready RT-qPCR試薬 |
16645ES |
||