1.実験材料
- BMDM細胞
- ターゲットプラスミド DNA (濃度 ≥ 1000 ng/μ L)
- Hieff Trans TM Booster DNA&RNAトランスフェクション試薬（カタログ番号40801 ） （ 詳細と無料サンプルの入手）
- Opti-MEM低血清培地
- 互換性のある組織培養プレートおよび関連する研究室消耗品（例として 24 ウェル プレートを使用）
2.実験手順
1)トランスフェクション前日の準備
細胞を数え、成長速度に応じて播種し、翌日のトランスフェクション時に細胞密度が約 80% ～ 90% に達するようにします。
2)トランスフェクション当日の前処理（オプション）
細胞培養培地を吸引し、0.5 mL の新鮮な完全培地と交換します。
3) DNA-トランスフェクション試薬複合体の調製
- DNA を希釈します。各ウェルから 0.5 μg の DNA を取り、25 μL の Opti-MEM 減少血清培地と 1 μL のトランスフェクションエンハンサーに加えます。
- トランスフェクション試薬を希釈します。1 μL のトランスフェクション試薬を取り、25 μL の Opti-MEM 低血清培地に加えます。
- DNA-トランスフェクション試薬複合体の形成：希釈したDNA（26 μL）と希釈したトランスフェクション試薬（26 μL）を混合し、室温で10～15分間インキュベートします。
4)細胞トランスフェクション
DNA-トランスフェクション試薬複合体を細胞に滴下します。均一に分散するように、ディッシュを軽く前後に揺らします。
5) トランスフェクション後の取り扱い
複合体は除去しないでください。37℃のCO₂インキュベーターで18～24時間培養を継続します。その後、標的遺伝子の発現を検出してください。
3.実験結果
図1 ： Booster DNA&RNAトランスフェクション試薬と競合製品のL *3000を用いた一次骨髄由来マクロファージ（BMDM）へのプラスミドDNAトランスフェクション。この結果は、 Boosterの優れた一次細胞トランスフェクション効率を示している。
4. 顧客からのフィードバック
1)高効率初代真皮線維芽細胞トランスフェクション
図2. Booster DNA&RNAトランスフェクション試薬とL * 3000を用いた初代真皮線維芽細胞へのプラスミドEGFR DNAトランスフェクション。この結果は、 Boosterが初代細胞へのトランスフェクション効率に優れていることを示しています。
2)高効率ブタ肺胞マクロファージトランスフェクション
図3. Booster DNA&RNAトランスフェクション試薬とL * 3000を用いた初代豚肺胞マクロファージ（PAM）へのDNAトランスフェクション。この結果は、 Boosterが初代細胞へのトランスフェクション効率に優れていることを示しています。
3)高効率初代マウス肝細胞トランスフェクション
図4 ：ブースターDNA&RNAトランスフェクション試薬とTブランドL*3000を用いたマウス初代肝細胞へのプラスミドDNAトランスフェクション。この結果は、ブースターが初代細胞へのトランスフェクション効率に優れていることを示しています。
4)高効率マウス神経幹細胞のトランスフェクション
図5. Booster DNA&RNAトランスフェクション試薬とSブランドS*8008を用いたマウス初代神経幹細胞へのmRNAトランスフェクション。この結果は、Boosterが初代細胞へのトランスフェクション効率に優れていることを示しています。
5.よくある質問（FAQ）と解決策
1)トランスフェクション効率を向上させるにはどうすればよいでしょうか?
- 核酸ベクター構造を最適化します（プロモーターの選択、ベクターバックボーンの最適化）。
- 初代細胞用に検証されたトランスフェクション試薬を選択してください。
Hieff Trans TMブースター DNA&RNA トランスフェクション試薬(カタログ番号 40801 ) 以下の機能があり、無料サンプルをサポートしています。
- 低い 細胞毒性：小説 ポリマーは従来のリポソームに代わるもので、細胞毒性を軽減し、細胞の生存率を向上させます。
- 高速放出と高い効率:高速放出により細胞内の核酸の分解が最小限に抑えられ、90% を超えるトランスフェクション効率 (フローサイトメトリーで測定) が達成されます。
- トランスフェクションが難しい細胞株向けのプレミアム オプション:敏感な細胞と初代細胞。
- 実証済みの性能、幅広い細胞株に対応：高い効率を実現 293T、HeLa、MCF7、HepG2、A549、NIH3T3、RAW264.7、HCT116 および一次細胞を含む 200 種類以上のさまざまな細胞株で、一貫性があり再現性のある結果が得られます。
- 1 つの試薬ですべての核酸を処理:最大 15 kb の断片でも、DNA、siRNA、miRNA、mRNA、ASO を高効率で提供します。
2)トランスフェクション結果が異常な場合はどうすればいいですか?
内部参照コントロール グループを設定します (例: 体系的なエラーを排除するために恒常的に発現するプラスミドを使用します)。
細胞生存率を検出します（Calcein-AM/PI二重染色を使用して死亡率<20%を確認します）。
関連製品
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応用 |
名前 |
カタログ番号 |
サイズ |
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DNA、siRNA、miRNA、mRNA、ASOなどに対応します。 一次細胞における実証済みの成功。 |
40801 |
100μL/1.5mL |
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