近年、オルガノイド培養の人気が高まっています。オルガノイドは、体外で分化させた成体または多能性幹細胞から作製され、細胞の種類、空間構成、生理機能など、組織／臓器の構造と機能を模倣することができます。オルガノイド技術の進歩は、発生生物学、遺伝学、病理学、毒物学などの分野における発展を促進してきました。
基礎知識
オルガノイド培養には特定の開始細胞源が必要ですか?
はい。ほとんどのオルガノイドは上皮細胞に由来します。非上皮細胞由来のオルガノイドの培養戦略には、さらなる開発が必要です。
オルガノイドは単一の細胞タイプのみで構成されていますか?
いいえ。オルガノイドは、増殖および分化して複数の細胞タイプを含む構造に自己組織化する幹のような開始細胞から生成されます。
オルガノイドは細胞株のように凍結保存して復活させることはできますか?
はい。凍結保存は通常2～3回の継代後に行われますが、オルガノイドが成熟すると（7～10回の継代後）、収量が向上します。
実験的な運用
3D 培養用の初代細胞を得るために、新鮮な組織の代わりに凍結保存された組織を使用できますか?
はい、しかし組織片のサイズは適切でなければなりません。凍結保存されたサンプルでは細胞生存率が大幅に低下し、その後の培養における成功率が低下します。
オルガノイドの継代培養の基準は何ですか?
最初の継代は通常 7 ～ 14 日目に行われ、その後は 7 ～ 10 日ごとに継代が行われます。
オルガノイド培養においてサイズの制御は重要ですか?
はい。オルガノイドは500µm以下に保つ必要があります。血管新生やガス交換がなければ、中心核付近の細胞は栄養と酸素の欠乏に陥り、壊死につながる可能性があります。
識別と応用
オルガノイドの特徴は何ですか?
顕微鏡検査とH&E染色による形態学的検査
ウェスタンブロット、qRT-PCR、免疫蛍光法、フローサイトメトリーを用いたバイオマーカーの発現解析
特徴の喪失を検出するためのゲノム配列解析
オルガノイドの種類に応じた機能アッセイ
オルガノイドはどのような場合に薬物試験に適していますか?
培養アーティファクトを最小限に抑えるには、継代初期（P2～P3）の新鮮なオルガノイドを使用します。
解凍したオルガノイドの場合、解凍後に形態が変化する可能性があるため、試験前に少なくとも 1 回の継代培養を行ってください。
オルガノイドは臓器再建のために体内に移植できますか?
動物実験では実現可能性が示されているが、臨床応用はまだ実現していない。
その他のポイント
オルガノイド培養は従来の細胞培養とどう違うのでしょうか?
起源細胞は幹のような上皮細胞である
培養には3D構造を形成するために細胞外マトリックス（例えば基底膜ゲル）が必要である
試験管内分化と自己組織化には複雑なサイトカインカクテルが必要である
この構造が単なる多細胞集合体ではなく、真のオルガノイドであることをどのようにして証明するのでしょうか?
オルガノイドは生体内の臓器発達を模倣し、単純な凝集体とは異なり、組織化された構造とバイオマーカーの空間分布を示します。マーカーの局在を免疫蛍光法で観察することで、明確な証拠が得られます。
製品概要
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製品名 |
仕様 |
カタログ番号 |
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CHIR-99021 |
2mg/5mg/10mg |
53003ES05/08/10 |
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セチュアゲル™マトリックス高濃度、LDEVフリー |
5mL/10mL |
40187ES08/10 |
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セチュアゲル™ マトリックス GFR、LDEVフリー |
5mL/10mL |
40185ES08/10 |
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組み換えヒトIL-2タンパク質 |
10μg/50μg/100μg/1mg |
90213ES10/50/60/80 |
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組み換えヒトIL-10タンパク質 |
2μg/10μg/50μg/100μg/500μg |
90109ES05/10/50/60/76 |