D -luciferina, sale di potassio -40902es
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D -luciferina, sale di potassio -40902es
La D-luciferina è un substrato comune per la luciferasi ed è ampiamente utilizzata in tutta la biotecnologia, in particolare nella tecnologia di imaging in vivo. Il meccanismo d'azione è che la luciferina (substrato) può essere ossidata per emettere luce in presenza di ATP e luciferasi. Quando la fluoresceina è in eccesso, il numero quantico di luce prodotta è uguale a Le concentrazioni di luciferasi erano correlate positivamente (vedere la figura sotto). I plasmidi che trasportano il gene codificante la luciferasi (Luc) sono stati trasfettati nelle cellule e introdotti negli animali...

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D -luciferina, sale di potassio -40902es

YeasenSku: 40902ES01
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La D-luciferina è un substrato comune per la luciferasi ed è ampiamente utilizzata in tutta la biotecnologia, in particolare nella tecnologia di imaging in vivo. Il meccanismo d'azione è che la luciferina (substrato) può essere ossidata per emettere luce in presenza di ATP e luciferasi. Quando la fluoresceina è in eccesso, il numero quantico di luce prodotta è uguale a Le concentrazioni di luciferasi erano correlate positivamente (vedere la figura sotto). I plasmidi che trasportano il gene codificante la luciferasi (Luc) sono stati trasfettati nelle cellule e introdotti negli animali da studio come ratti e topi.

La D-luciferina è anche comunemente usata negli studi in vitro, tra cui l'analisi dei livelli di luciferasi e ATP; analisi del gene reporter; sequenziamento ad alto rendimento e vari test di contaminazione. Esistono tre forme di prodotto: D-luciferina (acido libero), sale di D-luciferina (sale di sodio e sale di potassio). La differenza principale sta nella solubilità: solubilità in acqua del primo e solubilità del sistema tampone. Sono debolmente solubili tranne che in basi deboli come basse concentrazioni di soluzioni di NaOH e KOH. Solubile in metanolo e DMSO; quest'ultimo può essere facilmente sciolto in acqua o tampone, facile da usare.

Caratteristiche

  • Nessuna radiazione, pressoché innocuo per gli organismi viventi.
  • Bioluminescenza, nessuna fonte di luce di eccitazione.
  • È così sensibile che è possibile rilevarlo in poche centinaia di cellule.
  • Buona penetrazione, è ancora possibile rilevare 3-4 cm di profondità nei tessuti.
  • Elevato rapporto segnale/rumore, forte segnale di fluorescenza e buona anti-interferenza.

Applicazioni

  • Nell'esperimento di tumorigenesi su topi nudi, la crescita del tumore è stata osservata senza invasione in tempo reale, senza misurazione dello stripping del tumore.
  • Per testare l'effetto della somministrazione sulla crescita del tumore o sulle metastasi, il substrato della fluoresceina può essere completamente eliminato entro 3 ore, senza interferire con l'esperimento sul farmaco.
  • Sono state rilevate la localizzazione e la distribuzione di cellule estranee negli animali.
  • Il gene bersaglio o il promotore del gene bersaglio viene fuso con il gene della luciferasi per rilevare cambiamenti nell'espressione genica durante il trattamento farmacologico o la progressione della malattia.
  • Monitoraggio del trapianto, della sopravvivenza e della proliferazione delle cellule staminali; tracciamento della distribuzione e della migrazione delle cellule staminali in vivo.

Specifiche

sinonimo inglese Sale di potassio dell'acido (S)-4,5-diidro-2-(6-idrossi-2-benzotiazolil)-4-tiazolecarbossilico; D-Luciferina lucciola, sale di potassio
N. CAS 115144-35-9
Formula C11H7N2O3S2K
Peso molecolare 318,42 g/mol
Aspetto Polvere giallo chiaro
Solubilità Solubile in acqua (60 (mg/ml)

Componenti

Componenti n. Nome 40902ES01 40902ES02 40902ES03 40902ES08
40902 D-Luciferina, Sale di Potassio 100 mg 500 mg 1g 5g


Cifre

Citato da "Un nuovo inibitore allosterico della fosfoglicerato mutasi 1 sopprime la crescita e le metastasi del carcinoma polmonare non a piccole cellule, Cell Metab.2019;30(6):1107-1119

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Citazioni e riferimenti:

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Storage

The product is shipped with dry ice and can be stored at -15℃ ~ -25℃ for 1 year.

FAQ

There is no difference. The three are merely variations in naming by different companies, and they are all compounds (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2 -thiazoline-4-carboxylic acid
Besides being used for in vivo imaging, fluorescent dye products are also employed in other applications involving luciferase, such as in vitro reporter gene assays, microbial/viral monitoring, pyrosequencing, etc.
Sodium fluorescein: It can be used for cell permeability testing. The permeability of the pigment can be determined by measuring the absorbance value at OD490. D-fluorescein sodium salt: Used for in vivo imaging and reporter gene systems. It is detected through a cold luminescence module and does not require excitation light stimulation.
The main differences among the three are as follows:
1) Solubility: The salt form is easily soluble in water. The solubility of potassium salt is 60mg/ml, and that of sodium salt is 100mg/ml. Free acid is not easily soluble in water. It can be dissolved by a weak alkaline solution of sodium bicarbonate, and its solubility in methanol is 10mg/ml, and in DMSO is 50mg/ml.
2) Toxicity: The salt form is more convenient to use during the process, especially in in vivo imaging experiments, as it can dissolve in water and the reaction toxicity will be smaller (Fluorescein is a low-molecular-weight organic compound composed of phenylthiazole and thiazole carboxyl group, with low toxicity).
3) Usage effect: There is no significant difference. In in vivo experimental studies, the usage rate of potassium salt is higher.
It has an impact. The purity is above 99%, with a good level of 99%. For 99% pure fluorescein, there is 1% solid impurity. If this 1 gram of impurity is dissolved in 25 ml of buffer solution (this dilution ratio is the standard dilution method for in vivo imaging experiments), the concentration of the impurity at this time is 0.4 g/L. Assuming the molecular weight of the impurity is 1000 g/mol, then the molar concentration of the impurity is 400 μM. This concentration may inhibit the action of certain enzymes in the cells and may reduce the experimental effect or cause harm to the animals.
The powder should be stored in a dark place at -20 or -70 degrees Celsius. Its validity period is at least one year.
D-fluorescein (D-Luciferin) is a commonly used substrate for luciferase. Its mechanism of action is that under the action of ATP and luciferase, the fluorescent substance (the substrate) can be oxidized and emit light. When there is an excess of fluorescent substance, the number of photons produced is positively correlated with the concentration of luciferase.
2. Native coelenterazine is an action substrate for various luciferases such as sea kidney luciferase (Rluc) and Gaussia luciferase (Gluc).
Recommended instruments:
1. Instruments with a biochemiluminescence detection module. The light produced by luciferin can be detected by a photometer or a scintillation counter. Common in vivo imaging instruments: such as the IVIS® Lumina small animal in vivo imaging system, the In-Vivo Xtreme multi-mode small animal in vivo imaging instrument from Bruker, Germany.
2. Multi-functional microplate readers: It is necessary to confirm with the instrument manufacturer whether it is a specific biochemiluminescence detection module (note: cannot use a fluorescence microscope).
Fluorescein is a small molecule with excellent water solubility and lipid solubility. It can easily penetrate the cell membrane and the blood-brain barrier.
Either one is fine. Intraperitoneal injection has a slower diffusion rate and the light emission lasts longer; intravenous injection has a faster diffusion rate, but the light emission lasts for a very short period of time.
Intraperitoneal injection (i.p.), with a fluorescein concentration of 150 mg/kg per kg of body weight. Taking a 20g C57 mouse as an example, the dosage for each mouse for one test: 150 mg/kg × 20g = 3mg, 100mg ÷ 3mg = 33 mice. This is for reference only. The specific dosage should be based on the reagent and without any loss.
Generally speaking, potassium d-fluorescein does not cause any toxic effects on animals.
There is no such information.
This product undergoes in vitro imaging. The ATP and magnesium ions required for this process need to be achieved through the cell culture medium. Therefore, a cell culture medium containing ATP and magnesium ions needs to be added to dilute the probe;
2. The cells themselves also contain a certain amount of ATP and magnesium, which can promote the reaction. In most cases, the ATP and magnesium contained in the cells are sufficient for the reaction of D-fluorescein salt, but the content varies depending on the type of cells. You can first try using a culture medium without additional ATP and magnesium, and conduct the experiment normally to see the results.
Chemiluminescence, no excitation wavelength required. The detection wavelength for firefly luciferin is 560 nm. The detection wavelength for sea kidney luciferin is 465 nm.
It can pass through the blood-brain barrier, the placental barrier and the blood test barrier, and also enter living cells.
The recommended concentrations are derived from the literature:
1) Injection method: It can be done through intraperitoneal injection or tail vein injection.
2) Injection volume: The scientific approach is to evaluate the injection dose based on the kinetic curve. The initial attempted injection dose is: 150mg substrate/kg of mouse body weight. Therefore, the purchase quantity can be calculated according to the above method: If there are 10 mice, 22 - 25g, then 33 - 37.5mg of substrate is required.
Approximately 3 minutes after intraperitoneal injection of fluorescein into mice, cells expressing luciferase began to emit light. The intensity reached a stable peak after 10 minutes, and this peak lasted for about 10 - 15 minutes before gradually diminishing. Detection can be conducted within 10 - 15 minutes after the injection. This is for reference only. It is recommended to conduct a preliminary experiment to establish the kinetics curve of luciferase, thereby determining the optimal time for signal detection and the signal plateau period.
To successfully conduct the in vivo imaging experiment, the following conditions are required: The target tissue or cells must express the luciferase gene; the injection of the luciferin substrate must be successful; and the thickness of the tissue at the luminescent site is also a factor. If the experiment fails, the reasons can be investigated from these aspects: whether the luciferase gene is expressed, whether the luciferin substrate was injected correctly, and whether the luminescent site is deep.

Citations

Documents

Brochure
In_vivo_imaging_Leaving_Tumor_Cells_Nowhere_to_Hide.pdf

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