UltraNuclease, nota anche come endonucleasi non restrittiva, nucleasi ad ampio spettro, è un'endonucleasi non specifica derivata da Serratia Marcescen, che idrolizza i legami fosfodiesterici interni tra qualsiasi nucleotide negli acidi nucleici per produrre oligonucleotidi 5'-monofosfato di 2-5 basi di lunghezza. Può degradare DNA e RNA in varie forme (a doppio filamento, a singolo filamento, lineare, circolare, nativo o denaturato) in un'ampia gamma di condizioni (6 M Urea, 0,1 M Guanidina HCl, 0,4% Triton X-100, 0,1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF) ed è ampiamente utilizzata per rimuovere gli acidi nucleici dai prodotti biologici. UltraNuclease può anche essere rimossa successivamente con metodi corrispondenti.

Questo kit utilizza il principio del test immunoenzimatico a sandwich a doppio anticorpo (sandwich ELISA) per rilevare i residui di UltraNuclease denaturata e non denaturata. Innanzitutto, ricopri la micropiastra con un anticorpo policlonale di coniglio anti-UltraNuclease per formare un anticorpo in fase solida. In secondo luogo, aggiungi lo standard UltraNuclease e il campione di prova alla micropiastra con anticorpo in fase solida, quindi aggiungi l'anticorpo policlonale Anti-UltraNuclease marcato con biotina e, infine, aggiungi streptavidina marcata con perossidasi di rafano (SA-HRP) per formare un complesso anticorpo + antigene + anticorpo-Biotina + SA-HRP. Successivamente, il substrato TMB è stato aggiunto al complesso per osservare la reazione cromatica dopo il lavaggio del complesso. Il TMB viene convertito in blu sotto la catalisi dell'enzima HRP e infine convertito in giallo in presenza di acido e la tonalità di colore è correlata positivamente alla quantità di UltraNuclease nel campione.

L'intervallo di quantificazione del rilevamento di questo kit è 0,047-3 ng/mL; il limite di rilevamento inferiore è 23,5 pg/mL.

Caratteristica

• Altamente sensibile: rilevamento di appena 23 pg/ml di residui di UltraNucleasi nei campioni biologici in corso di lavorazione e finali.
• Garantisce la precisione: i residui di UltraNuclease possono essere rilevati con precisione con un recupero dell'80%-110%.
• Specificità: può essere utilizzato insieme a YEASEN UltraNuclease ed è in grado di rilevare con precisione i residui.
• Stabile: la differenza tra lotto e lotto è bassa, le proprietà del kit non vengono influenzate da temperature inferiori a 37℃ per 6 giorni.
• Facile raccolta del segnale: utilizzando il sistema Biotina-Streptavidina, il segnale può essere ampliato in modo stabile.
• Kit completo: tutti i componenti chiave sono forniti nel kit, il che lo rende conveniente da utilizzare.

Applicazione

• Test dell'ultranucleasi residua nei prodotti biologici

Specificazione

Componenti

Spedizione e stoccaggio

Il kit UltraNuclease ELISA viene spedito con un impacco di ghiaccio e può essere conservato a 2°C ~8°C. Il prodotto non aperto è valido per un anno. Una volta aperto, il reagente è valido per sei mesi. Non congelare mai questo prodotto.

Conservazione dei reagenti preparati:

1. Il tampone di lavaggio diluito e il tampone di diluizione possono essere conservati a 2°C ~8°C per 1 settimana

2. Lo standard 36701-C è liquido e conservato a 2°C ~8°C per 1 anno

3. L'anticorpo di rilevamento preparato e il tampone di arresto possono essere conservati a 2°C ~8°C per 1 mese

Cifre

• Dimostrazione di specificità

Figure 1. La specificità del kit UltraNuclease ELISA è stata mostrata nella figura sopra.

Sono stati stimati 8 campioni mimici per la reazione non specifica con gli anticorpi nel kit. Non c'era alcuna differenza significativa tra gli 8 campioni e il campione negativo. （*: differenza significativa dal campione negativo；NS: nessuna differenza significativa dal campione negativo）

• Display di precisione

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Figure 2. La precisione dell'UCF.ME™ UltraNuclease ELISA è stata analizzata come sopra schema.

Sono stati testati 6 duplicati a ciascuna concentrazione sulla curva standard e tutti i CV% erano inferiori al 5% (Figura 2A). 3 analisti hanno condotto l'esperimento UCF.ME™ UltraNuclease ELISA e i CV% erano inferiori al 15% (Figura 2B).

• Validazione della precisione

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Figure 3. La precisione di UCF.ME™ L'UltraNuclease ELISA è stato analizzato secondo lo schema seguente.

UltraNuclease è stato addizionato in soluzioni di lisi cellulare da 5 μg/mL (HEK293, E.coli, CHO e Vero) indipendentemente con una concentrazione finale addizionata di 1,5 ng/mL. L'accuratezza in diversi campioni cellulari ha mostrato un'eccellente accuratezza rispetto ad altri fornitori (Figura 3A). UltraNuclease è stato addizionato in un campione reale (fornito dal cliente) ed è diluito in serie 2 volte da 3 ng/mL a 0,093 ng/mL. Il recupero degli spike è stato compreso tra l'80% e il 110% (Figura 3B).