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La proteasi TEV ricombinante (proteasi rTEV) è una proteasi ricombinante modificata e purificata tramite ingegneria genetica, che non solo mantiene l'attività funzionale della proteasi TEV naturale, ma mostra anche maggiore stabilità e specificità su un ampio intervallo di temperature. La proteasi rTEV è un enzima comunemente utilizzato per tagliare le etichette di affinità sulla proteina di fusione. È specifica per la sequenza di sette amminoacidi EXXYXQ↓(G/S), e il sito di taglio è tra glutammina e glicina/serina. La sequenza di sette amminoacidi comunemente usata è Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly. La proteasi rTEV è attiva in modo ottimale a pH 7,0, 30°C, ma è attivo in un'ampia gamma di pH 6,0-8,5 e temperature 4-30°C (vedere Tabella 1), consentendo la scelta delle condizioni di reazione flessibile a seconda della proteina target. Inoltre, il 6×La sua etichetta N-terminale può essere utilizzata anche per rimuovere la proteasi rTEV mediante resina Ni-NTA per purificare la proteina target.
Il prodotto è stato ottimizzato sulla base di 20403ES e, rispetto a 20403ES, ha una purezza più elevata, un'attività più forte e una minore Escherichia coli Residuo di gDNA, adatto per applicazioni con requisiti più elevati di purezza, attività e residuo dell'enzima.
Caratteristiche
Elevata efficienza di scissione: Il tag proteico viene rimosso più completamente.
Basso residuo di gDNA ospite: Ridurre efficacemente il rischio di introdurre residui di sostanze esogene.
Applicazioni
Rimozione dei tag di fusione
Specifiche
| Definizione di unità | La quantità di enzima necessaria per tagliare >85% dei 3 iog substrato in un 1×Tampone rTEV (50 mM Tris, pH 8,0, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT) a 30loC per 1 h è stata definita come unità di attività |
| Purezza delle proteine | ≥95% |
| Fonte | Espresso in Escherichia coli |
Componenti
| Componenti n. | Nome | 20427ES80 | 20427ES10 | 20427ES50 |
| 20427-UN | Proteasi rTEV (5 U/μL) | 200 microlitri | 2×1 ml | 10 ml |
| 20427-B | Tampone rTEV (10×) | 600 microlitri | 6 ml | 30 ml |
Spedizione e stoccaggio
Proteasi rTEV, conservata a -25~-15loC per 6 mesi; Conservare a -85~-65loC per 1 anno.
Buffer rTEV, conservato a -25~-15loC per 1 anno.
Nota: si consiglia di conservare separatamente ogni componente al momento della ricezione della merce o del primo utilizzo, per evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.
Cifre
Figura 1. Verifica dell'attività di scissione di UCF.METM Proteasi rTEV
Nota: utilizzo di una proteina di fusione (3 μg) di potassiocontenente UCF.METM Sito di scissione della proteasi rTEV come substrato, UCF.METM La proteasi rTEV è stata aggiunta rispettivamente a 10, 5 e 3 U. La reazione è stata condotta a 30 loC per 1 ora, e l'effetto di scissione è stato rilevato tramite elettroforesi su gel di agarosio. I risultati hanno mostrato che quando la quantità di UCF.METM La proteasi rTEV era superiore a 3 U e poteva scindere il substrato in modo efficiente con un'efficienza di scissione >90%.
Documenti:
Scheda di sicurezza
20427_Scheda di sicurezza_Versione EN20250120.pdf
Manuali
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Citations
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