Questo kit può condurre direttamente e rapidamente l'amplificazione PCR del tessuto del topo (come coda del topo, orecchio del topo, dito del piede del topo, muscolo, ecc.) e ha una forte compatibilità con i campioni. Dotato di un potente tampone di lisi, questo kit può lisare rapidamente i campioni e rilasciare il DNA genomico. Il lisato può essere aggiunto direttamente al sistema di reazione PCR senza purificazione e l'operazione è comoda. Inoltre, questo kit richiede un basso input di campione e per gli esperimenti possono essere utilizzati 5 mg di tessuto del topo o 1-5 mm di coda del topo.
Il 2× Mouse Direct PCR Mix fornito da questo kit è una soluzione di reazione PCR hot-start con una concentrazione 2 volte superiore. Contiene tutti i componenti utilizzati per l'amplificazione PCR, eccetto il modello e i primer, il che semplifica notevolmente il processo operativo e riduce la possibilità di contaminazione. Il kit può essere utilizzato per l'identificazione del transgene, la genotipizzazione del topo, ecc.
Caratteristiche
- Minore quantità di campione richiesta: 5 mg di tessuto di topo o 1-5 mm di coda di topo
- Preparazione del modello conveniente: non c'è bisogno di macinare, non c'è bisogno di raffinare e purificare il DNA, flusso più elevato, risparmio di tempo e denaro
- Sistema PCR ottimizzato: con maggiore specificità e maggiore tolleranza dell'inibitore della reazione PCR
Applicazioni
- Identificazione dei topi transgenici
- Genotipizzazione dei topi
- Analisi del gene knockout del topo
Specifiche
| Specifiche del prodotto | Kit |
| Avvio a caldo | Avvio a caldo integrato |
| Condizioni per il trasporto | Impacchi di ghiaccio |
| Tipo di prodotto | Kit PCR diretto |
| Fare domanda a A (applicazione) | Coda di topo, orecchio di topo, dito di ratto, viscere, pelle, ecc. |
Componenti
| Componenti n. | Nome | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | Respingente ML | 5×1 ml | 20×1 ml |
| 10185-B | Respingente MT | 0,6 ml | 2×1,25 ml |
| 10185-C | 2× Miscela PCR diretta del topo | 500 microlitro | 2×1 ml |
- a) Il tampone ML è un tampone di lisi contenente forti denaturanti proteici, indossare guanti.
- b) Il tampone MT è un tampone di arresto utilizzato per interrompere la funzione di lisi del tampone ML.
- c) 2× Miscela PCR diretta per topi: contiene Taq DNA polimerasi a caldo, miscela dNTP, MgCl2, tampone di reazione, potenziatore di reazione PCR, ottimizzatore, stabilizzatore, colorante indicatore di elettroforesi, ecc.
Magazzinaggio
- Componente A: Il prodotto dovrebbe essere conservato a 2°C~8°C per un anno. Per un uso multiplo per un lungo periodo, si prega di evitare la contaminazione incrociata.
- Componente B/C: Il prodotto dovrebbe essere conservato a-25℃ ~ -15℃ per un anno. Si prega di evitare ripetuti cicli di congelamento e scongelamento.
Cifre
1. Risultato dell'amplificazione del gene bersaglio (entro 1 kb)
Figura 1.Adatto per l'amplificazione del gene bersaglio entro 1 kb.
2. La dimostrazione della velocità di estensione
Figura 2. Gene da 500 bp, la velocità di estensione può arrivare fino a 1 sec/kb.
Citato da "TFPI è un recettore della cripta del colon per TcdB dal clade ipervirulento 2 C. difficile. Cell . 2022 17 marzo;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010. "
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI è un recettore della cripta del colon per TcdB dal clade ipervirulento 2 C. difficile. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. La tirosina chinasi di Bruton regola l'infiammazione indotta dai macrofagi nel rene diabetico tramite l'attivazione dell'inflammasoma NLRP3. Int J Mol Med. 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| Problema comune | Possibile motivo | Soluzione |
| Non sono state rilevate bande nel controllo positivo e nei campioni da analizzare. | Il sistema di reazione PCR o le condizioni di reazione non erano adatti. | Utilizzare la PCR a gradiente per esplorare le condizioni di reazione ottimali per la PCR. |
| Una conservazione non corretta dei reagenti PCR ne determina la perdita di attività. | 2× Mouse Direct PCR Mix deve essere conservato a -20°C ed evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti durante l'uso. Se utilizzato frequentemente, può essere conservato a 4°C per un breve periodo. | |
| Problemi di progettazione del primer. | Prova a riprogettare i primer per verificarlo. | |
| Il controllo positivo presenta una banda di interesse, mentre il campione da analizzare non presenta alcuna banda oppure presenta una banda debole. | Una conservazione impropria o prolungata può causare la perdita di attività del reagente. | Utilizzare reagenti freschi. |
| Aggiungere il lisato tissutale in eccesso. | Aumentare il sistema di reazione o ridurre la quantità di lisato. | |
| La miscela di lisi del campione è stata conservata in modo improprio o per troppo tempo e il genoma del DNA è stato degradato. | La miscela del lisato può essere conservata a 4°C per 2-3 giorni.Provare a utilizzare una miscela di lisato appena preparata per la PCR. | |
| La quantità di modello aggiunta non è adeguata. | La quantità di modello aggiunta è stata ottimizzata nell'intervallo 1-10% del sistema di reazione. | |
| Numero insufficiente di cicli PCR. | Aumentare il numero di cicli di PCR, preferibilmente 35-40 cicli. A causa della complessità del modello, le reazioni di PCR dovrebbero essere eseguite con 5-10 cicli in più rispetto al modello di DNA purificato. | |
| Amplificazione non specifica | Temperatura di annealing della PCR troppo bassa, numero di cicli, concentrazione del primer o concentrazione del modello troppo alti. | Aumentare la temperatura di annealing della PCR e diminuire il numero di cicli della PCR, la concentrazione del primer o la concentrazione del modello. |
| Discordanze nei primer PCR. | Riprogettare i primer PCR. | |
| La temperatura è troppo alta durante la preparazione del sistema di reazione PCR oppure il tempo trascorso dopo il completamento della preparazione è troppo lungo. | La preparazione del sistema di reazione PCR viene effettuata a bassa temperatura e la reazione di amplificazione PCR viene eseguita il prima possibile dopo il completamento della preparazione. | |
| La banda target appare nel controllo negativo | Contaminazione degli strumenti operativi o dei reagenti. | Tutti i reagenti o le attrezzature nell'esperimento devono essere autoclavati. Siate attenti e delicati quando li maneggiate per evitare che la sequenza target venga aspirata nella pistola per campioni o fuoriuscita dalla provetta per centrifuga. |
| Contaminazione incrociata tra campioni. | Ogni campionatore viene utilizzato per un solo campione; in alternativa, dopo aver prelevato un campione, immergere il bordo del campionatore in una soluzione di ipoclorito di sodio al 2%, risciacquare ripetutamente e quindi asciugare il residuo con un tovagliolo di carta pulito. |
Storage
FAQ
Dissociation operation differences: 10185: Dissociate component A and termination dissociation component B separately, and mix them after dissociation is complete. 10181: Add dissociation component A and termination dissociation component B together, but the termination dissociation requires 5 minutes.
Citations
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