2 zi

YeasenSku: 10166ES01

Misurare: 250 μl
Prezzo:
Prezzo di vendita$20.00
Azione:
In magazzino


2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (con colorante) è una soluzione premiscelata 2× pronta all'uso contenente Hieff Canace™ AdvanceFast High-Fidelity DNA Polymerase, dNTP e un sistema tampone ottimizzato, che contiene indicatori di elettroforesi pre-aggiunti. La premiscela contiene indicatori di elettroforesi pre-aggiunti, i prodotti PCR possono essere sottoposti direttamente a elettroforesi, i prodotti di amplificazione sono estremità piatte. 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (con colorante) ha i vantaggi di essere rapido e facile, elevata sensibilità, elevata specificità, buona stabilità, ecc., il sistema di reazione può essere aggiunto solo con i primer e i template. Inoltre, il prodotto contiene anche uno specifico agente protettivo, in modo che il premix possa comunque mantenere un'attività stabile dopo ripetuti congelamenti e scongelamenti.

Fedeltà ultra elevata: Basso tasso di disadattamento nei soggetti a mutazione gene GC alto;
Velocità elevata: La velocità è veloce come 5 secondi/kb;
Ampia applicabilità: Può essere utilizzato per amplificare geni con un contenuto di GC pari al 20-80% e tollera lisati di sangue e di topo al 20%;
Buona stabilità: Conservato a 37°C per 7 giorni senza comprometterne le prestazioni;
Facile da usare: Basta aggiungere primer e template per l'amplificazione, con colorante di caricamento blu per l'elettroforesi diretta.

Specifiche

N. di cat. 10164ES01 10164ES03 10164ES08
Misurare 250 microlitri 1 ml 5×1 ml

Cifre

Figura: Hieff Canace™ AdvanceFast High-Fidelity DNA Polymerase ha un'elevata fedeltà rispetto ai prodotti di altri marchi (A). Il test è stato eseguito esaminando la frequenza di mutazione dei prodotti PCR di 6 segmenti ricchi di GC (circa l'80%) amplificati dai genomi di specie diverse. I prodotti PCR amplificati da Hieff Canace™ AdvanceFast High-Fidelity DNA Polymerase sono stati clonati in vettori e 100 singoli cloni selezionati per ciascuna sequenza sono stati sottoposti a sequenziamento Sanger.

La DNA polimerasi ad alta fedeltà Hieff Canace™ AdvanceFast ha un'elevata velocità di amplificazione (B), un'elevata compatibilità con l'amplificazione GC (C) e una tolleranza al sangue (D). I risultati della PCR e del sequenziamento dei clienti dimostrano che la DNA polimerasi ad alta fedeltà Hieff Canace™ AdvanceFast offre buone prestazioni in termini di resa e specificità della PCR (EH).

Magazzinaggio

Questo prodotto deve essere conservato a una temperatura compresa tra -25 e -15 °C per 1 anno.

Istruzioni

  1. Sistemi di reazione PCR consigliati.

Componenti

Volume(μL)

Finale concentrazione

2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (con colorante)*

25

1×

Modello**

X

-

Inoltrare Primer (10 μmol/L)***

2

0,4 μmol/L

Inversione Primer (10 μmol/L)

2

0.4 μmol/L

ddH2Lo

Fino a 50

-

Tabella 1 Sistema di reazione PCR

*In premiscele 1× contenenti 2 mM Mg2+ e 200 μM dNTP.

**Intervallo consigliato 10-200 ng, intervallo del volume di caricamento del campione di cDNA non superiore a 1/10 del sistema di reazione, consigliato 1-2,5 μL.

***La concentrazione finale del primer nel sistema di reazione PCR varia da 0,2 a 1 μM; si raccomanda 0,4 μM.

  1. Programma di reazione.

Ciclo fare un passo

Temperatura

Tempo

Cicli

Denaturazione iniziale

98℃

30 secondi

1

Denaturazione

98℃

10 secondi

30-35

Ricottura*

60℃

5 secondi

Estensione**

72℃

5-10 secondi/kb

Finale estensione

72℃

2 minuti

1

Tabella 2 Programma di reazione PCR

*Temperatura consigliata: 60°C, è possibile impostare un gradiente di temperatura per trovare la temperatura ottimale per l'annealing del primer. Il tempo di annealing consigliato è impostato su 5 sec e può essere regolato da 5 a 30 sec. Un tempo di annealing troppo lungo può causare prodotti di amplificazione diffusi sul gel.

**Tempo di estensione: consigliato 5 sec/kb, estendibile anche a 10 sec/kb se necessario.

Appunti

  1. Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca.
  2. Per la vostra sicurezza, operate indossando camici da laboratorio e guanti monouso.

Documenti:

Manuali

Citazioni e riferimenti:

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Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 1 years.

FAQ

When dealing with fragments larger than 10 kb, it is advisable to combine 68℃ with 10 sec/kb to enhance the amplification success rate. For fragments smaller than 10 kb, an amplification speed of 5 sec/kb can be used.
(1) This 10166ES product can accommodate cDNA amplification ranging from 1 kb to 14 kb. If you need to perform long fragment amplification, it is recommended to use the validated 11149ES reverse transcription kit from Yeasen Biotechnology to reverse transcribe the target RNA. The resulting cDNA template can then be used in conjunction with 10166ES for long fragment amplification.
(2) If the RNA sample is small or if you need to obtain a very long target fragment, it is recommended not to perform digestion during reverse transcription. The longer the target fragment, the more RNA needs to be input, and accordingly, more cDNA will be required.
10166ES is a high-fidelity PCR product. High fidelity means a lower error rate and more accurate sequences. However, different experimental methods may result in variations. Product mutations are low-probability events. It is recommended to perform multiple repeated sets of new amplifications to obtain unmutated amplification products.
Yes, after testing, the 10166ES can cover fragments with GC content ranging from 20% to 80%. When expanding fragments with a high GC content, it is recommended to adjust the temperature to 68℃, which will significantly increase the success rate.
The 10166ES can tolerate a certain amount of bacterial solution. After testing, it has been found that this product can tolerate bacterial solution at a proportion of 12.5% in the reaction system, and it has good specificity. If you need to directly expand the bacterial solution, please keep the proportion below 12.5%.
The 10166ES product can tolerate a certain amount of cDNA stock solution, which contains residual RNA and degraded RNA. Therefore, cDNA containing uracil can be used as the template. However, there is a certain range. After product performance testing, 10166ES can meet the requirement of a cDNA input volume accounting for 15% of the reaction system.
(1) For plant genomes, after product performance testing, it can detect as low as 100pg of plant genome.
(2) For animal genomes, after product performance testing, the minimum detectable amount is 100pg of animal genome.
(3) For plasmids, since they are relatively pure, after product performance testing, the minimum detectable amount is 1pg of plasmid.
Possible causes and solutions:
(1)The thawing requirements for 10166ES stipulate that it should be thawed slowly on ice, and it cannot be thawed at room temperature or through heating.
(2) When performing the amplification process, it is recommended to set the temperature at 68℃ and the amplification speed at 10 seconds per kilobase.
(3) The longer the target fragment to be amplified is, the more template should be used.
(4) In the PCR system, the concentration of primers is too low or the number of cycles is insufficient: appropriately increase the amount of primers, or increase the number of amplification cycles;

Citations

Applications

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Indagine

FAQ

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