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रिकॉम्बिनेंट TEV प्रोटीज़ (rTEV प्रोटीज़) एक रिकॉम्बिनेंट प्रोटीज़ है जिसे जेनेटिक इंजीनियरिंग द्वारा संशोधित और शुद्ध किया जाता है, जो न केवल प्राकृतिक TEV प्रोटीज़ की कार्यात्मक गतिविधि को बनाए रखता है, बल्कि व्यापक तापमान सीमा पर अधिक स्थिरता और विशिष्टता भी दिखाता है। rTEV प्रोटीज़ फ़्यूज़न प्रोटीन पर आत्मीयता लेबल को काटने के लिए एक सामान्य उपकरण एंजाइम है। यह सात अमीनो एसिड अनुक्रम EXXYXQ के लिए विशिष्ट है↓(जी/एस), और काटने की जगह ग्लूटामाइन और ग्लाइसिन/सेरीन के बीच है। आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला सात अमीनो एसिड अनुक्रम ग्लू-एएसएन-ल्यू-टायर-फे-ग्लन है↓-Gly. rTEV प्रोटीएज़ pH 7.0, 30 पर सर्वोत्तम रूप से सक्रिय होता है°सी, लेकिन पीएच 6.0-8.5 और तापमान 4-30 की एक विस्तृत श्रृंखला में सक्रिय है°सी (तालिका 1 देखें), जिससे लक्ष्य प्रोटीन के आधार पर प्रतिक्रिया की स्थिति का चुनाव लचीला हो सके। इसके अलावा, 6×एन-टर्मिनल के उनके लेबल का उपयोग लक्ष्य प्रोटीन को शुद्ध करने के लिए Ni-NTA रेजिन द्वारा rTEV प्रोटीएज को हटाने के लिए भी किया जा सकता है।
उत्पाद को 20403ES के आधार पर अनुकूलित किया गया है, और 20403ES की तुलना में, इसमें उच्च शुद्धता, मजबूत गतिविधि और कम है ई कोलाई जीडीएनए अवशेष, जो एंजाइम शुद्धता, गतिविधि और अवशेष के लिए उच्च आवश्यकताओं के साथ अनुप्रयोग के लिए उपयुक्त है।
विशेषताएँ
उच्च विखंडन दक्षताप्रोटीन टैग को अधिक अच्छी तरह से हटा दिया जाता है।
कम अवशिष्ट मेजबान gDNA: बहिर्जात पदार्थ अवशेषों के जोखिम को प्रभावी ढंग से कम करना।
अनुप्रयोग
फ्यूजन टैग हटाना
विशेष विवरण
| इकाई परिभाषा | 3 में से 85% से अधिक को काटने के लिए एंजाइम की आवश्यक मात्रा μजी सब्सट्रेट में एक 1×आरटीईवी बफर (50 मिमी ट्रिस, पीएच 8.0, 0.1 मिमी ईडीटीए, 1 मिमी डीटीटी) 30 परहेसी 1 घंटे के लिए गतिविधि की एक इकाई के रूप में परिभाषित किया गया था |
| प्रोटीन शुद्धता | ≥95% |
| स्रोत | में व्यक्त ई कोलाई |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 20427ईएस80 | 20427ईएस10 | 20427ईएस50 |
| 20427-ए | आरटीईवी प्रोटीएज़ (5 यू/μL) | 200 μएल | 2×1 एमएल | 10 एमएल |
| 20427-बी | आरटीईवी बफर (10×) | 600 μएल | 6 एमएल | 30 एमएल |
शिपिंग और भंडारण
आरटीईवी प्रोटीएज, -25~-15 पर संग्रहीतहेसी 6 महीने के लिए; -85~-65 पर स्टोर करेंहेसी 1 वर्ष के लिए।
आरटीईवी बफर, -25~-15 पर संग्रहीतहेसी 1 वर्ष के लिए।
नोट: सामान प्राप्त करते समय या पहली बार उपयोग करते समय प्रत्येक घटक को अलग से संग्रहीत करने की सिफारिश की जाती है ताकि बार-बार जमने और पिघलने से बचा जा सके।
आंकड़ों
आकृति 1. UCF.ME की क्लीवेज गतिविधि का सत्यापनटीएम आरटीईवी प्रोटीएज
नोट: संलयन प्रोटीन का उपयोग (3 माइक्रोग्राम) सीUCF.ME को बनाए रखनाटीएम सब्सट्रेट के रूप में rTEV प्रोटीएज क्लीवेज साइट, UCF.MEटीएम आरटीईवी प्रोटीज को क्रमशः 10, 5 और 3 यू पर मिलाया गया। प्रतिक्रिया 30 पर की गई हेसी 1 घंटे के लिए, और दरार प्रभाव agarose जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा पता लगाया गया था। परिणामों से पता चला कि जब UCF.ME की मात्राटीएम यदि rTEV प्रोटीएज़ 3 U से अधिक होता, तो यह सब्सट्रेट को कुशलतापूर्वक 90% से अधिक की क्लीवेज दक्षता के साथ क्लीवेज कर सकता था।
दस्तावेज़:
सुरक्षा डेटा पत्रक
20427_एमएसडीएस_संस्करण EN20250120.पीडीएफ
नियमावली
Storage
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