AapCas12b न्यूक्लिऐस (जिसे C2c1 के नाम से भी जाना जाता है) एक डीएनए एंडोन्यूक्लिऐस है जो ट्रैक्रआरएनए:सीआरआरएनए (या एसजीआरएनए) द्वारा मध्यस्थ होता है, जो थर्मोफिलिक बैक्टीरिया से प्राप्त होता है एलीसाइक्लोबैसिलस एसिडोफिलसलक्ष्य डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए (dsDNA) पर PAM (TTN) अनुक्रम की उपस्थिति में, यह विशेष रूप से लक्ष्य dsDNA को विभाजित करता है, जिससे डबल-स्ट्रैंड टूटता है और चिपचिपे सिरे उत्पन्न होते हैं। AapCas12b विशेष रूप से PAM अनुक्रम से स्वतंत्र एकल-स्ट्रैंडेड डीएनए लक्ष्यों को विभाजित कर सकता है। डबल-स्ट्रैंडेड और सिंगल-स्ट्रैंडेड डीएनए लक्ष्य दोनों AapCas12b की ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि को सक्रिय कर सकते हैं। जब AapCas12b एंजाइम sgRNA और लक्ष्य डीएनए के साथ एक त्रिगुणात्मक परिसर बनाता है, तो यह गैर-विशिष्ट ssDNA ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि के लिए सक्रिय हो जाता है, जिससे सिस्टम में ssDNA का कोई भी मनमाना अनुक्रम कट जाता है। AapCas12b के लिए इष्टतम क्लीवेज प्रतिक्रिया तापमान 60 हैहेसी, जो इसे AacCas12b की तुलना में अधिक ऊष्मा प्रतिरोधी बनाता है, और आइसोथर्मल प्रवर्धन/CRISPR-Cas डिटेक्शन सिस्टम विकसित करने के लिए LAMP के साथ उपयोग के लिए अधिक उपयुक्त बनाता है।
विशेषताएँ
व्यापक प्रतिक्रिया तापमान रेंज: 37 डिग्री के तापमान रेंज में दरार गतिविधि प्रदर्शित करता है~65हेसी
कम न्यूक्लिऐस अवशेष: कोई अवशिष्ट एक्सोन्यूक्लिऐस, निकेज या आरएनेज नहीं
सिस-क्लीवेज गतिविधि: इन विट्रो में डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए का अत्यधिक प्रभावी विभाजन
ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि: उच्च ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि, न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के लिए उपयुक्त
अनुप्रयोग
CRISPR/Cas जीन संपादन
CRISPR/Cas प्रणाली पर आधारित निदान और पता लगाना
आइसोथर्मल न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रौद्योगिकियों (RPA और LAMP) आदि के साथ संयुक्त अन्य पता लगाने के अनुप्रयोग
विशेष विवरण
| आणविक वजन | 130 केडीए |
| एकाग्रता | 10 µएम |
| पवित्रता | >95% (एसडीएस-पृष्ठ) |
| इकाई परिभाषा | 60 डिग्री सेल्सियस पर 1 मिनट के भीतर 1 pmol ssDNA जांच को विभाजित करने के लिए Cas12b एंजाइम की आवश्यक मात्राहेसी कुल प्रतिक्रिया मात्रा 20 μएल, जिसमें 1 है×प्रतिक्रिया बफर, 1 यू के रूप में परिभाषित किया गया है |
अवयव
| अवयव नहीं। | नाम | 14808ES65 | 14808ES80 |
| 14808-ए | AapCas12b न्यूक्लिऐस (10 μएम) | 100 μएल | |
| 14808-बी | 10×प्रतिक्रिया बफर | 1 एमएल | 1 एमएल |
जहाजपिंग और भंडारण
इस उत्पाद को -25 ~ -15 पर संग्रहित किया जाना चाहिएहेसी दो वर्षों के लिए।
आंकड़ों
आकृति 1. AapCas12b न्यूक्लिऐस का सिस-क्लीवेज गतिविधि सत्यापन
टिप्पणी: 20 में μएल प्रतिक्रिया प्रणाली जिसमें PAM अनुक्रम, sgRNA, Cas12b और 1 के साथ लक्ष्य dsDNA शामिल है×प्रतिक्रिया बफर, मिश्रण 60 पर संवर्धित किया गया थाहेसी 30 मिनट के लिए और फिर 85 पर निष्क्रियहेसी 5 मिनट के लिए। एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस के परिणामों से पता चला कि AapCas12b न्यूक्लिऐस के तीन बैच सभी dsDNA को प्रभावी ढंग से विभाजित करने में सक्षम थे, जिसमें विभाजन दक्षता आयातित ब्रांड T* के बराबर थी।
आकृति 2. AapCas12b न्यूक्लिऐस ट्रांस-क्लीवेज गतिविधि परीक्षण के परिणाम
टिप्पणी: 20 में μएल प्रतिक्रिया प्रणाली जिसमें PAM अनुक्रम, sgRNA, Cas12b, रिपोर्ट ssDNA फ्लोरोसेंट जांच और 1 के साथ लक्ष्य dsDNA शामिल है×प्रतिक्रिया बफर, मिश्रण 60 पर संवर्धित किया गया थाहेसी 1 घंटे के लिए, और प्रतिदीप्ति संकेत हर 30 सेकंड में एकत्र किया गया था। परिणामों से पता चला कि लक्ष्य डीएनए, एसजीआरएनए और कैस12बी की एक साथ उपस्थिति में, रिपोर्ट एसएसडीएनए फ्लोरोसेंट जांच को विभाजित किया जा सकता है, जिससे प्रतिदीप्ति संकेत जारी हो सकता है।
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