विवरण
हाईफ़ेयर™ सुपर रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस एक अगली पीढ़ी का रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस है, कौन ई थाएनजिनीर्ड एम-एमएलवी से। इस एंजाइम में आरएनएसे एच गतिविधि की कमी है और यह काफी बेहतर थर्मल स्थिरता प्रदर्शित करता है, जो 70 डिग्री सेल्सियस तक के प्रतिक्रिया तापमान को सहन करता है। यह जटिल माध्यमिक संरचनाओं के साथ आरएनए टेम्पलेट्स के कुशल रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए अत्यधिक उपयुक्त है।
अनुप्रयोग
यह उत्पाद RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, RNA-seq, और cDNA संश्लेषण प्रयोगों के लिए उपयुक्त है। रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रतिक्रिया तापमान 70°C तक पहुँच सकता है।
इकाई परिभाषा
एंजाइम गतिविधि की एक इकाई (यू) को एंजाइम की मात्रा के रूप में परिभाषित किया जाता है, जो पॉली (ए)। ओलिगो (डीटी) को टेम्पलेट-प्राइमर के रूप में उपयोग करते हुए, 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के भीतर एसिड-अघुलनशील सामग्री में 1 एनएमओएल डीटीटीपी को शामिल करने के लिए आवश्यक है।
अवयव
| अवयव | नाम | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | हाईफेयर™ सुपर रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (200 U/μL) | 50 μएल | 250 μएल |
जमा करने की अवस्था
-25˚C से -15˚C तापमान पर 18 महीने तक स्टोर करें।
उपयोग निर्देश
प्रथम-स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण प्रक्रिया
1. आरएनए विकृतीकरण (वैकल्पिक चरण)
1. आरएनए विकृतीकरण द्वितीयक संरचनाओं को खोलने में मदद करता है, जिससे प्रथम-स्ट्रैंड सीडीएनए उत्पादन में महत्वपूर्ण सुधार होता है।
| अवयव | आयतन |
| RNase-मुक्त ddH2O | 13 μL तक |
| ओलिगो(dT)18 (50 μM) या रैंडम प्राइमर (50 μM) या जीन-विशिष्ट प्राइमर (2 μM) | 1 μएल |
| टेम्पलेट आरएनए | कुल आरएनए: 10 पीजी - 5 μg या एमआरएनए: 10 पीजी - 500 एनजी |
· 5 मिनट के लिए 65°C पर गर्म करें, फिर 2 मिनट के लिए बर्फ पर ठंडा करें।
· प्रतिक्रिया द्रव को एकत्रित करने के लिए संक्षेप में अपकेंद्रित्र करें और नीचे दिखाए अनुसार रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रतिक्रिया मिश्रण जोड़ें।
2. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन रिएक्शन सेटअप (20 μL सिस्टम)
| अवयव | आयतन |
| पिछले चरण से प्रतिक्रिया मिश्रण | 13 μएल |
| 5× प्रतिक्रिया बफर | 4 μएल |
| डीएनटीपी मिश्रण (10 मिमी) | 1 μएल |
| हाईफ़ेयर® सुपर रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (200 U/μL) | 1 μएल |
| आरएनज़ अवरोधक (40 यू/μL) | 1 μएल |
3. रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन प्रोग्राम सेटिंग्स
| तापमान | समय |
| 25° सेल्सियस* | 5 मिनट |
| 50-70° सेल्सियस | 15-30 मिनट |
| 85° सेल्सियस** | 5 मिनट |
*रैंडम प्राइमर का उपयोग करते समय, 5 मिनट के लिए 25°C पर इनक्यूबेट करें। यदि ओलिगो (dT)18 या जीन-विशिष्ट प्राइमर का उपयोग किया जाता है, तो इस चरण को छोड़ा जा सकता है।
5 मिनट तक 85°C तापमान पर गर्म करने से रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस निष्क्रिय हो जाता है तथा इसे आवश्यकतानुसार समायोजित किया जा सकता है।
रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन उत्पाद का उपयोग बाद की पीसीआर या क्यूपीसीआर प्रतिक्रियाओं के लिए तुरंत किया जा सकता है, -20 डिग्री सेल्सियस पर अल्पावधि के लिए संग्रहीत किया जा सकता है, या फ्रीज-थॉ चक्रों से बचने के लिए एलिकोटिंग के बाद -80 डिग्री सेल्सियस पर दीर्घकालिक भंडारण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
सावधानियां
1. प्रयोगशाला में साफ-सफाई का माहौल बनाए रखें; साफ दस्ताने और मास्क पहनें। सुनिश्चित करें कि सभी प्रयोगात्मक उपभोग्य वस्तुएं संदूषण को रोकने के लिए RNase-मुक्त हों।
2. आरएनए क्षरण को रोकने के लिए सभी कार्य बर्फ पर करें।
3. कुशल रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन सुनिश्चित करने के लिए उच्च गुणवत्ता वाले आरएनए नमूनों का उपयोग करें।
4. यह प्रॉडक्ट केवल शोध के उपयोग के लिए है।
5. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, उत्पाद को संभालते समय लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
दस्तावेज़:
भुगतान और सुरक्षा
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उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
येसेन नैतिक विज्ञान के प्रति समर्पित हैं, उनका मानना है कि हमारे शोध में सुरक्षा और नैतिक मानकों को सुनिश्चित करते हुए महत्वपूर्ण प्रश्नों का समाधान किया जाना चाहिए।