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टीथ डीएनए पॉलीमरेज़ एक ऊष्मा-प्रतिरोधी डीएनए पॉलीमरेज़ है जो थर्मोफिलिक जीवाणु से खोजा गया है थर्मस थर्मोफिलस HB8Mg²⁺ की उपस्थिति में, यह एंजाइम 5′-3′ DNA पॉलीमरेज़ गतिविधि और 5′-3′ एक्सोन्यूक्लिएज़ गतिविधि प्रदर्शित करता है, लेकिन इसमें 3′-5′ एक्सोन्यूक्लिएज़ गतिविधि नहीं होती है, जिससे यह PCR प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं के लिए व्यापक रूप से लागू होता है। Mn²⁺ की उपस्थिति में, एंजाइम 55-70°C के तापमान पर मजबूत रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस गतिविधि प्रदर्शित करता है, जिससे यह एक-चरण RT-PCR प्रतिक्रियाओं के लिए उपयुक्त हो जाता है।
विनिर्देश
इकाई परिभाषा: क्रियाशीलता की एक इकाई (यू) को एंजाइम की वह मात्रा के रूप में परिभाषित किया जाता है, जो सक्रिय सैल्मन शुक्राणु डीएनए को टेम्पलेट/प्राइमर के रूप में प्रयोग करते हुए, 74°C पर 30 मिनट में कुल न्यूक्लियोटाइड के 10 nmol को अम्ल-अघुलनशील उत्पाद में शामिल कर देती है।
अवयव
| नहीं। | नाम | आकार | |
| 14607ES72 (250 यू) | 14607ES80 (1250 यू) | ||
| 14607-ए | टीथ डीएनए पोलीमरेज़ (5 यू/μL) | 50 μएल | 250 μएल |
| 14607-बी | 5×टीथ आरटी-पीसीआर बफर | 1 एमएल | 4×1.25 एमएल |
| 14607-सी | 10×टीथ पीसीआर बफर (Mg2+ के साथ) | 500 μएल | 2×1.25 एमएल |
| 14607-डी | 50एमएम एमजी(ओएसी)2 | 250 μएल | 1.25 एमएल |
| 14607-ई | डीएनटीपी मिश्रण (प्रत्येक 10 मिमी) | 150 μएल | 750 μएल |
शिपिंग और भंडारण
शिपिंगसूखी बर्फ के साथ स्टोर करें। पर -20°C, 2 वर्ष का शेल्फ जीवन।
सावधानियां
1) अगर पिघलने पर बफ़र में थोड़ी मात्रा में अवक्षेप दिखाई देता है, तो यह एक सामान्य घटना है। कृपया उपयोग करने से पहले इसे पलटें और अच्छी तरह मिलाएँ।
2) अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, ऑपरेशन के दौरान लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
3) यह उत्पाद केवल अनुसंधान के लिए है!
निर्देश
अनुशंसित पीसीआर प्रतिक्रिया प्रक्रिया:
1.प्रतिक्रिया प्रणाली की तैयारी
| नाम | आयतन (μएल) |
| 10×टीथ पीसीआर बफर (Mg2+ के साथ) | 5 |
| टीथ डीएनए पोलीमरेज़ (5 यू/μL) | 0.5 |
| डीएनटीपी मिश्रण (प्रत्येक 10 मिमी) | 1 |
| नदी के ऊपर भजन की पुस्तक 10μएम | 2 |
| डाउनस्ट्रीम भजन की पुस्तक 10μएम | 2 |
| टेम्पलेट डीएनए | 50 स्नातकोत्तर- 1μg |
| डीडीएच2हे | को 50 |
[नोट]: टीथ डीएनए पोलीमरेज़, अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्राइमर्स, और डीएनटीपी मिश्रण की मात्रा को विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।
2. साइकिल सेटअप
| कदम | अस्थायी(डिग्री सेल्सियस) | समय | साइकिल |
| पूर्व विकृतीकरण | 94 | 30 सेकंड-5 मिनट | 1 |
| विकृतीकरण | 94 | 30 सेकंड |
35
|
| एनीलिंग | 50-70 | 30 सेकंड | |
| विस्तार | 72 | 60 सेकंड/केबी | |
| अंतिम विस्तार | 72 | 10 मिनट | 1 |
[नोट]: प्रतिक्रिया की स्थिति को विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।
अनुशंसित आरटी-पीसीआर प्रतिक्रिया प्रक्रिया:
1. प्रतिक्रिया प्रणाली की तैयारी
| नाम | आयतन (μएल) |
| 5×टीथ आरटी-पीसीआर बफर | 10 |
| टीथ डीएनए पोलीमरेज़ (5 यू/μL) | 1.5 |
| 50एमएम एमजी(ओएसी)2 | 2.5 |
| डीएनटीपी मिश्रण (प्रत्येक 10 मिमी) | 1.5 |
| नदी के ऊपर भजन की पुस्तक 10μएम | 2 |
| डाउनस्ट्रीम भजन की पुस्तक 10μएम | 2 |
| खाका शाही सेना | 50 स्नातकोत्तर- 1μg |
| डीडीएच2ओ | को 50 |
[नोट]: टीथ डीएनए पोलीमरेज़, अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्राइमर्स, और डीएनटीपी मिश्रण की मात्रा को विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।
2.साइकिल सेटअप
| कदम | तापमान (डिग्री सेल्सियस) | समय | साइकिल |
| रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन | 55-70 | 30 मिनट | 1 |
| के पूर्वविकृतीकरण | 94 | 30 सेकंड-5 मिनट | 1 |
| विकृतीकरण | 94 | 30 सेकंड |
35
|
| एनीलिंग | 50-70 | 30 सेकंड | |
| विस्तार | 72 | 60 सेकंड/केबी | |
| अंतिम विस्तार | 72 | 10 मिनट | 1 |
[नोट]: प्रतिक्रिया की स्थिति को विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार समायोजित किया जा सकता है।
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