उत्पाद वर्णन

Hieff NGS™ mRNA आइसोलेशन मास्टर किट एक चुंबकीय मनका किट है जो विशेष रूप से mRNA शुद्धिकरण के लिए है। mRNA कैप्चर बीड्स माइक्रोमीटर आकार के पैरामैग्नेटिक माइक्रोस्फीयर हैं जो ओलिगो डीटी (पॉली ए) टेल्स के साथ युग्मित हैं, जिनका उपयोग पॉली ए टेल्स के साथ mRNA से जुड़कर 10 एनजी से 4 μg तक के पूर्ण RNA को अलग करने के लिए किया जा सकता है।

विशेष विवरण

अवयव

भंडारण

उत्पाद को एक वर्ष तक 2 ~ 8℃ तापमान पर संग्रहित किया जाना चाहिए तथा जमने से बचाया जाना चाहिए।

निर्देश

1. आवश्यक सामग्री शामिल नहीं है

चुंबकीय रैक, न्यूक्लिऐस-मुक्त पीसीआर ट्यूब

2. संचालन

1) mRNA कैप्चर बीड्स को संतुलित करें कमरे के तापमान पर (~ 30 मिनट)।

2) 10 एनजी - 4 μg कुल आरएनए को न्यूक्लिअस-मुक्त पीसीआर ट्यूब में न्यूक्लिअस-मुक्त पानी द्वारा 50 μL तक पतला करें, इसे बर्फ पर रखें।

3) चुंबकीय मोतियों को उल्टा करके या घुमाकर मिलाएँ। 50 μL चुंबकीय मोतियों को 50 μL कुल RNA नमूने में डालें और अच्छी तरह मिलाने के लिए 6 बार पिपेट करें। ट्यूब के नीचे तक थोड़ी देर घुमाएँ।

4) चुंबकीय मोतियों और आरएनए के मिश्रण को थर्मल साइक्लर में इनक्यूबेट करें और निम्नलिखित प्रोग्राम चलाएं: 65°C, 5 मिनट; 25°C, 5 मिनट; 25°C, होल्ड करें।

5) ट्यूब को चुंबकीय पर रखें रैक कुल आरएनए से mRNA को अलग करने के लिए 5 मिनट तक रखें। ध्यान से सतह पर तैरनेवाला पदार्थ हटाएँ।

6) ट्यूब को चुंबकीय क्षेत्र से हटाएँ रैक और चुंबकीय मोतियों को 200 μL बीड्स वॉश बफर के साथ फिर से लटका दें। पूरी मात्रा को अच्छी तरह मिलाने के लिए 6 बार ऊपर-नीचे पिपेट करें। ट्यूब को चुंबकीय पर रखें रैक 5 मिनट के लिए छोड़ दें, और ध्यान से सतह पर तैरनेवाला पदार्थ हटा दें।

7) चरण 6 को दोहराएँ.

8) ट्यूब को चुंबकीय क्षेत्र से हटाएँ रैकचुंबकीय मोतियों को पुनः निलंबित करने के लिए 50 μL ट्रिस बफर जोड़ें और अच्छी तरह से मिश्रण करने के लिए 6 बार पिपेट करें।

9) नमूने को थर्मल साइक्लर में डालें और mRNA को निकालने के लिए निम्नलिखित प्रोग्राम चलाएँ: 80°C, 2 मिनट; 25°C, रखें।

10) थर्मल साइक्लर से सैंपल निकालें। 50μL बीड्स बाइंडिंग बफर डालें और अच्छी तरह मिलाने के लिए 6 बार पिपेट चलाएँ।

11) mRNA को चुंबकीय मोतियों से बांधने के लिए कमरे के तापमान पर 5 मिनट तक रखें।

12) ट्यूब को चुंबकीय क्षेत्र पर रखें 5 मिनट के लिए रैक पर रखें, और सावधानीपूर्वक सतह पर तैरनेवाला पदार्थ हटा दें।

[नोट]: शेष तरल को चूसने के लिए 10 μL पिपेट की आवश्यकता होती है।

13) चुंबकीय क्षेत्र से ट्यूब को हटाएँ रैक, चुंबकीय मोतियों को 200 μL बीड्स वॉश बफर के साथ फिर से लटकाएं, अच्छी तरह से मिश्रण करने के लिए 6 बार पिपेट करें। ट्यूब को चुंबकीय पर रखें रैक कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए रखें। सभी सतही तरल पदार्थ को निकाल कर फेंक दें।

14) mRNA अंतिम निक्षालन

योजना A: आरक्षित प्रतिलेखन प्रतिक्रिया के लिए

ट्यूब हटाएँ चुंबकीय क्षेत्र से रैक12μL न्यूक्लिऐस-मुक्त पानी डालें और अच्छी तरह से मिश्रण करने के लिए 6 बार पिपेट से चलाएँ। ट्यूब को थर्मल साइक्लर में रखें और निम्नलिखित प्रोग्राम चलाएं: 80°C, 2 मिनट। फिर ट्यूब को चुंबकीय क्षेत्र पर रखें रैक तुरंत, कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए रखें। घोल के साफ हो जाने के बाद, 10 μL सुपरनेटेंट को एक और नए न्यूक्लिअस-फ्री पीसीआर ट्यूब में सावधानी से चूसें।

योजना बी: आरएनए के लिए पुस्तकालय की तैयारी

लाइब्रेरी निर्माण के लिए प्रासंगिक किट निर्देशों के अनुसार फ्रैग/प्राइमर बफर की उचित मात्रा जोड़ें।

टिप्पणी

1. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के समय लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
2. केवल अनुसंधान उपयोग के लिए.
3. चुंबकीय मोतियों का उपयोग करने से पहले उन्हें कमरे के तापमान तक गर्म करना और अच्छी तरह मिलाना सुनिश्चित करें, अन्यथा नमूनों की पुनर्प्राप्ति दक्षता प्रभावित हो सकती है।
4. ऑपरेशन पूरी तरह से RNase और न्यूक्लिक एसिड संदूषण से मुक्त होना चाहिए।
5. जब इस उत्पाद का उपयोग अन्य अभिकर्मकों के साथ किया जाता है, तो कृपया संचालन के लिए विशिष्ट प्रयोगात्मक निर्देशों का पालन करें।
6. अच्छे शुद्धिकरण परिणाम प्राप्त करने के लिए, आपको कुल RNA की अच्छी अखंडता की आवश्यकता है और RIN मान > 7.0 सुनिश्चित करना होगा।