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फायरफ्लाई ल्यूसिफ़रेज़ एक प्रोटीन है जिसका आणविक भार लगभग 61 kDa है, जो ATP, मैग्नीशियम आयनों और ऑक्सीजन की उपस्थिति में ल्यूसिफ़रिन के ऑक्सीकरण को ऑक्सील्यूसिफ़रिन में उत्प्रेरित कर सकता है। यह लगभग 560 एनएम की तरंग दैर्ध्य के साथ बायोलुमिनेसेंस उत्सर्जित करता है। रेनिला ल्यूसिफ़रेज़ एक प्रोटीन है जिसका आणविक भार लगभग 36 kDa है, जो ऑक्सीजन की उपस्थिति में कोएलेंटरेज़िन के ऑक्सीकरण को कोएलेंटरामाइड में उत्प्रेरित कर सकता है, और ऑक्सीकरण प्रक्रिया के दौरान 480 एनएम की तरंग दैर्ध्य उत्सर्जित करता है। बायोलुमिनेसेंस के बारे में। दोनों बायोलुमिनेसेंस को केमिलुमिनेसेंस द्वारा मापा जा सकता है। पता लगाने का सिद्धांत चित्र 1 में दिखाया गया है:
चित्र 1: फायरफ्लाई और रेनिला ल्यूसिफ़रेज़ परख योजनाबद्ध
आमतौर पर, लक्ष्य जीन के 5´UTR या प्रमोटर को फायरफ्लाई लूसिफ़ेरेज़ के अपस्ट्रीम में क्लोन किया जाता है, या 3´UTR को फायरफ्लाई लूसिफ़ेरेज़ के डाउनस्ट्रीम में क्लोन किया जाता है, और प्रमोटर या विनियामक तत्व के ट्रांसक्रिप्शनल विनियमन प्रभाव का पता फायरफ्लाई लूसिफ़ेरेज़ की मात्रा का पता लगाकर लगाया जाता है। सेल संख्या, अभिकर्मक दक्षता आदि में अंतर को खत्म करने के लिए रेनिला लूसिफ़ेरेज़ का उपयोग आंतरिक नियंत्रण के रूप में किया गया था। डुअल लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख किट फायरफ्लाई लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन की गतिविधि का पता लगाने के लिए सब्सट्रेट के रूप में लूसिफ़ेरिन का उपयोग करता है, और फिर फ्लोरोसेंस प्रतिक्रिया को बुझाने के दौरान रेनिला लूसिफ़ेरिन का पता लगाने के लिए सब्सट्रेट के रूप में कोएलेंटरेज़िन का उपयोग करता है। एंजाइम रिपोर्टर जीन गतिविधि। किट में उच्च संवेदनशीलता की विशेषताएं हैं।
विशेषताएँ
उन्नत विखंडन क्षमता: अधिकांश कोशिका प्रकारों को पूर्णतः विघटित करने में सक्षम।
मजबूत संकेत: कमजोर प्रमोटर अभिव्यक्ति का सटीक पता लगाना।
उच्च संवेदनशीलता: ल्यूसिफ़रेज़ अणुओं के 10-20 पिकोमोल्स तक पता लगाने योग्य।
व्यापक रैखिक रेंज: रैखिक पता लगाने की रेंज एंजाइम सांद्रता के परिमाण के 8 क्रम से अधिक होती है।
अनुप्रयोग
लक्ष्य जीन 3'UTRs के साथ miRNA अंतःक्रियाओं का सत्यापन
lncRNA-miRNA अंतःक्रियाओं का सत्यापन
प्रमोटर क्षेत्र में प्रतिलेखन कारक विनियमन का सत्यापन
सिग्नलिंग मार्ग विश्लेषण
एसएनपी गतिविधि विश्लेषण
विशेष विवरण
| रूप | तरल |
| लूसिफ़ेरेज़ | जुगनू और रेनिला |
| सिग्नल अर्ध-जीवन | 30 मिनट |
| उत्पाद घटकों की संख्या | 5 |
| कार्यप्रवाह | दो एसटेप |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 11402ईएस60 | 11402ES80 |
| 11402-ए | कोशिका लाइसेट्स | 20 एमएल | 10×20 एमएल |
| 11402-बी | जुगनू लूसिफ़ेरेज़ बफर | 10 एमएल | 10×10 एमएल |
| 11402-सी | जुगनू ल्यूसिफ़रेज़ सब्सट्रेट (50 ×) | 200 μएल | 10×200 μL |
| 11402-डी | रेनिला लूसिफ़ेरेज़ बफर | 10 एमएल | 10×10 एमएल |
| 11402-ई | रेनिला लूसिफ़ेरेज़ सब्सट्रेट (50 ×) | 200 μएल | 10×200 μL |
शिपिंग और भंडारण
डुअल लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर जीन परख किट उत्पादों को -15 ℃ पर संग्रहित किया जाना चाहिए ~ -25℃ के लिए 1 वर्ष।
आंकड़ों
चित्र 1. येसेन (बिल्ली#: 11402) की प्रतिदीप्ति तीव्रता ब्रांड पी के बराबर है।
आकृति2. यईसेन (बिल्ली#: 11402) डिटेक्शन अभिकर्मक ल्यूसिफ़रेज़ के साथ परस्पर क्रिया करके इष्टतम चमक तीव्रता प्राप्त करते हैं। रेनिला ल्यूसिफ़रेज़ सब्सट्रेट को जोड़ने के बाद, फ़ायरफ़्लाई ल्यूसिफ़रेज़ की बायोल्यूमिनेसेंस बुझ जाती है: इसे अनिवार्य रूप से पूरी तरह से बुझाया जा सकता है।
दस्तावेज़:
सुरक्षा डेटा पत्रक
11402 एमएसडीएस HB220209 EN.PDF
नियमावली
11402 मैनुअल HB241230 EN.पीडीएफ
उद्धरण एवं संदर्भ:
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FAQ
2. In vitro reporter assays require cell lysis to homogenize samples, overcoming transfection heterogeneity, uneven substrate permeability, and signal variation. In vitro reporter assays are highly quantitative and sensitive, requiring ATP and oxygen. Cell lysis fully releases expressed luciferase to optimize the reaction; since intracellular oxygen is limited, omitting lysis leads to signal reduction (some lysis buffers include optimized additives like ATP to boost signal). Therefore, cell lysis ensures superior signal in in vitro assays. 3. In vivo imaging instruments possess high sensitivity and power capable of penetrating skin and tissue, enabling strong signal detection without cell lysis.
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