Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR मास्टर मिक्स (हाई रॉक्स) 2×रियल-टाइम क्वांटिटेटिव PCR एम्पलीफिकेशन के लिए एक प्री-सॉल्यूशन है, जिसमें उच्च फ्लोरोसेंस तीव्रता, उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता, और उच्च एम्पलीफिकेशन यील्ड की विशेषता है। मुख्य घटक, Hieff UNICON™ Taq DNA पॉलीमरेज़, एंटीबॉडी विधि द्वारा हॉट-स्टार्ट किया जाता है, जो नमूना तैयार करने के दौरान प्राइमर एनीलिंग के कारण होने वाले गैर-विशिष्ट एम्पलीफिकेशन को प्रभावी ढंग से रोक सकता है। साथ ही, सूत्र PCR प्रतिक्रिया की एम्पलीफिकेशन दक्षता को बढ़ाने के लिए कारक जोड़ता है और विभिन्न GC सामग्री (30~70%) वाले जीन के एम्पलीफिकेशन को बराबर करने के लिए सुविधा प्रदान करता है, ताकि क्वांटिटेटिव PCR मात्रात्मक क्षेत्रों की एक विस्तृत श्रृंखला में एक अच्छा रैखिक संबंध प्राप्त कर सके। उत्पाद पाइपिंग ऑपरेशन की निगरानी के लिए विभिन्न रंगों की मिश्रित रंग परिवर्तन प्रतिक्रिया का उपयोग करता है, जो पाइपिंग त्रुटियों की घटना को प्रभावी ढंग से कम करता है।
विशेषताएँ
पाइपिंग ट्रैकिंग: छूटी हुई/अतिरिक्त त्रुटियों के जोखिम को कम करें
उत्कृष्ट प्रवर्धन: विस्तृत रैखिक रेंज में अच्छी रैखिकता
उच्च परिशुद्धता: 2 गुना सांद्रता अंतर वाले टेम्पलेट्स को सटीक रूप से पहचान सकता है
अच्छी पुनरावृत्ति: प्रतिकृति कुओं में छोटी अंतर-कुआं परिवर्तनशीलता, जिसके परिणामस्वरूप बेहतर पुनरावृत्ति होती है
स्थिर और विश्वसनीय: प्रतिक्रिया प्रणाली को कमरे के तापमान पर 24 घंटे तक संग्रहीत किया जा सकता है, और उत्पाद 20 फ्रीज-थॉ चक्रों के बाद भी अप्रभावित रहता है
अनुप्रयोग
जीन अभिव्यक्ति अंतर विश्लेषण
पूर्ण मात्रात्मक विश्लेषण
विशेष विवरण
| एकाग्रता | 2 ×(qPCR मिक्स) |
| पता लगाने की विधि | रंग विधि |
| पीसीआर विधि | क्यूपीसीआर |
| पोलीमर्स | टैक डीएनए पोलीमरेज़ |
| नमूने का प्रकार | डीएनए |
| अनुप्रयोग उपकरण | बायोसिस्टम्स 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT फास्ट, स्टेपवन, स्टेपवनप्लस और अन्य फ्लोरोसेंस क्वांटिटेटिव पीसीआर उपकरण जिनमें आरओएक्स रेफरेंस डाई की उच्च सांद्रता की आवश्यकता होती है |
| उत्पाद का प्रकार | वास्तविक समय प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर के लिए प्रीमिक्स |
| आवेदन करें (आवेदन) | पित्रैक हाव भाव |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 11190ईएस03 | 11190ईएस08 | 11190ईएस60 |
| 11190-ए | हिएफ़ यूनिकॉन™ कलरजीपीएस क्यूपीसीआर मास्टर मिक्स (उच्च रॉक्स) | 1 एमएल | 5×1 एमएल | 100×1 एमएल |
| 11190-बी | 10×डाइल्यूशन बफर | 1 एमएल | 1 एमएल | 20×1 एमएल |
शिपिंग और भंडारण
इस उत्पाद को 1 वर्ष के लिए -25 ~ -15 ℃ पर संग्रहित किया जाना चाहिए।
आंकड़ों
चित्र 1. गतिशील रेंज के भीतर विश्वसनीय परिणाम प्राप्त किए जा सकते हैं।
10^1-10^7 के ग्रेडिएंट वाले 2 µL प्लास्मिड टेम्प्लेट का उपयोग करके, संबंधित जीन को प्रवर्धित किया गया।™ कलरजीपीएस मास्टर मिक्स 7 ऑर्डर ऑफ मैग्नीट्यूड की टेम्पलेट राशि रेंज का प्रभावी ढंग से पता लगा सकता है, जिससे व्यापक रैखिक रेंज के भीतर अच्छी रैखिकता प्राप्त होती है।
आकृति22 गुना के टेम्पलेट सांद्रता अंतर को सटीक रूप से भेद सकता है।
2 गुना ग्रेडिएंट में पतला किए गए 2 µL प्लास्मिड को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करके, संबंधित जीन को प्रवर्धित किया गया।™ कलरजीपीएस मास्टर मिक्स टेम्पलेट सांद्रता अंतर को सटीक रूप से हल कर सकता है।
आकृति3छोटी अंतर-कुएं परिवर्तनशीलता देखी गई है, जो बेहतर पुनरावृत्ति दर्शाती है।
प्लास्मिड की दर्जनों प्रतियों को टेम्पलेट के रूप में उपयोग करते हुए, उनके संबंधित अनुदेश पुस्तिकाओं में निर्दिष्ट प्रक्रियाओं के अनुसार विभिन्न फ्लोरोसेंट मात्रात्मक अभिकर्मकों के साथ प्रवर्धन किया गया। एसडी मान संकेत देते हैं कि, अन्य रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन अभिकर्मकों की तुलना में, नए उत्पाद में प्रतिकृति कुओं और बेहतर पुनरावृत्ति के बीच कम अंतर है।
आकृति4अधिक लचीला, मानक या तीव्र प्रक्रियाओं के लिए उपयुक्त।
मानक प्रक्रिया में, विकृतीकरण समय और विस्तार समय क्रमशः 10 सेकंड और 30 सेकंड पर सेट किया जाता है, जबकि तीव्र प्रक्रिया में, विकृतीकरण समय और विस्तार समय क्रमशः 3 सेकंड और 10 सेकंड पर सेट किया जाता है, ताकि 10 लक्ष्य जीनों के अनुरूप Ct मानों का पता लगाया जा सके।परिणाम दर्शाते हैं कि मानक और तीव्र दोनों प्रक्रियाओं में नए उत्पाद के साथ प्राप्त सीटी मानों में मजबूत सहसंबंध है, और नया उत्पाद तीव्र प्रक्रिया का उपयोग करके अच्छे परिणाम प्राप्त कर सकता है।
आकृति5प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार होने के बाद, यह कमरे के तापमान पर 24 घंटे तक स्थिर रह सकती है।
माउस, मानव 293 कोशिकाओं और अरेबिडोप्सिस थालियाना से अलग-अलग जीन को लक्ष्य के रूप में इस्तेमाल करते हुए, प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करने के बाद, इसे पता लगाने से पहले 24 घंटे के लिए अलग-अलग तापमान पर अंधेरे में रखा गया था। तत्काल प्रसंस्करण की तुलना में, विभिन्न जीनों के लिए पता लगाने का अंतर 0.5 सीटी से अधिक नहीं है, जो दर्शाता है कि लंबी अवधि के संचालन के साथ भी स्थिर परिणाम प्राप्त किए जा सकते हैं।
दस्तावेज़:
नियमावली
Storage
FAQ
For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
1)The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2)A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
2)Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3)Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4)Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected.
The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak.
1). It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned.
2). It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.
Citations
Documents
| Manual |
|---|
| 11190ES-Hieff_UNICON_ColorGPS_qPCR_Master_Mix_High_Rox_-Ver.EN20241218.pdf |
| Brochure |
|---|
| qPCR_solutions.pdf |
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