यह उत्पाद एस्चेरिचिया कोली में पुनः संयोजक प्रोटीन अभिव्यक्ति से प्राप्त एक बैक्टीरियोफेज T7 RNA पॉलीमरेज़ है। यह अपने T7 प्रमोटर अनुक्रम (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') से डबल-स्ट्रैंडेड DNA पर RNA के 5'→3' संश्लेषण को उत्प्रेरित करता है और सब्सट्रेट के रूप में NTP का उपयोग करता है। डबल-स्ट्रैंडेड रैखिक कुंद सिरों या 5'प्रोट्रूडिंग सिरों वाले DNA को T7 RNA पॉलीमरेज़ के लिए टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, इसलिए रैखिक प्लास्मिड और PCR उत्पादों को इन विट्रो के लिए टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है आरएनए का संश्लेषण.
नोट: G* RNA प्रतिलेख का प्रथम आधार है।
यह उत्पाद जीएमपी विनियमों के अनुसार निर्मित किया जाता है और तरल रूप में उपलब्ध कराया जाता है।
विशेषता
- लंबे ट्रांसक्रिप्ट और छोटे ट्रांसक्रिप्ट को संश्लेषित करने के लिए, 1 μg डीएनए टेम्प्लेट के साथ 100-200 μg आरएनए का उत्पादन किया जा सकता है
- उच्च उपज और संचालन में आसान
- एंडोटॉक्सिन कम करें
- एंडोन्यूक्लिऐस, एक्सोन्यूक्लिऐस, आरएनएज़ की अनुपस्थिति के लिए परीक्षण किया गया
आवेदन
- रेडियोलेबल आरएनए जांच की तैयारी
- आरएनए संरचना, प्रसंस्करण और उत्प्रेरण के अध्ययन के लिए आरएनए उत्पादन
- एंटी-सेंस आरएनए के माध्यम से अभिव्यक्ति नियंत्रण
- mRNA, sgRNA संश्लेषण
विनिर्देश
| स्रोत | में व्यक्त ई कोलाई पुनः संयोजक T7 आरएनए पोलीमरेज़ जीन के साथ |
| इष्टतम तापमान | 37℃ |
| भंडारण बफर | 50 मिमी ट्रिस-एचसीएल, 1 मिमी ईडीटीए, 10 मिमी डीटीटी, 100 मिमी NaCl, 0.1% ट्राइटन एक्स-100，50% (v/v) ग्लिसरीन, pH7.9 पर 25℃ |
| इकाई परिभाषा | 37°C और pH 8.0 पर 1 घंटे के भीतर एसिड-अघुलनशील अवक्षेप में [3H] GMP के 1 nmol को शामिल करने के लिए आवश्यक एंजाइम की मात्रा 1 इकाई के रूप में परिभाषित किया गया है. |
गुणवत्ता
| सीओए आइटम | मानक |
| गतिविधि | 250-300यू/μएल |
| प्रोटीन एकाग्रता | ≥0.5मिग्रा/एमएल |
| पवित्रता | ≥95% |
| अन्तर्जीवविष | <20 ईयू/एमजी |
| अवशिष्ट प्रोटीएज़ | नकारात्मक |
| अवशिष्ट एक्सोन्यूक्लिऐस | नकारात्मक |
| अवशिष्ट निकेज | नकारात्मक |
| अवशिष्ट RNase | नकारात्मक |
| इ. कोली होस्ट प्रोटीन | <50पीपीएम |
| ई.कोली होस्ट डीएनए | <10 एफजी/यू |
| माइकोप्लाज़्मा डीएनए | नकारात्मक |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 10625ES10 (10 केयू) | 10625ES60 (100 केयू) | 10625ES86 (2,500 केयू) | 10625ES99 (100 एमयू) |
| 10625 | टी7 आरएनए पॉलीमरेज़ जीएमपी-ग्रेड (250 यू/μL) | 40 μएल | 400 μएल | 10 एमएल | 400 एमएल |
शिपिंग और भंडारण
टी7 आरएनए पोलीमरेज़ जीएमपी-ग्रेड उत्पादों को सूखी बर्फ के साथ भेजा जाता है और इन्हें एक वर्ष के लिए -15℃ ~ -25℃ पर संग्रहीत किया जा सकता है।
आंकड़ों
चित्र 1. मानक आरएनए को टी7 आरएनए संश्लेषण किट का उपयोग करके इन विट्रो में संश्लेषित किया गया।
प्रतिक्रिया को पीसीआर उपकरण में 37 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया, और फिर चुंबकीय मोतियों (कैट#12602) द्वारा शुद्ध किया गया। उपज परिणाम का विश्लेषण नैनोड्रॉप स्पेक्ट्रोफोटोमीटर द्वारा किया गया जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है।
चित्र 2. इलेक्ट्रोफोरेटोग्राम (चित्र 2A), केशिका वैद्युतकणसंचलन आरेख (चित्र 2B), और क्रोमैटोग्राम (चित्र 2C) में क्रमशः T7 किट द्वारा विभिन्न लंबाई के RNA का प्रतिलेखन प्रदर्शन
चित्र 3. इन विट्रो में कैप्ड आरएनए का संश्लेषण।
प्रतिक्रिया को पीसीआर उपकरण में 37 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया, और फिर चुंबकीय मोतियों (कैट#12602) द्वारा शुद्ध किया गया। उपज परिणाम को नैनोड्रॉप स्पेक्ट्रोफोटोमीटर द्वारा परखा गया जैसा कि चित्र 3ए में दिखाया गया है। अखंडता परिणाम का विश्लेषण केशिका वैद्युतकणसंचलन द्वारा किया गया जैसा कि चित्र 3बी में दिखाया गया है।
10625_मैनुअल_HB221111_EN.pdf
उद्धरण एवं संदर्भ:
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FAQ
1)ptimizing the sequence immediately upstream of the template's 3' end;
2)Controlling the IVT yield, as excessively high transcription levels tend to increase the frequency of self-extension events.
Citations
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