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प्लांट टिशू डायरेक्ट पीसीआर किट एक ऐसी किट है जो पीसीआर द्वारा विभिन्न प्रकार के पौधों की पत्तियों को सीधे बढ़ा सकती है, जिसमें व्यापक अनुकूलनशीलता और मजबूत स्थिरता है। किट एक अद्वितीय लाइसिस बफर सिस्टम का उपयोग करती है, जो विभिन्न प्रकार के पौधों के नमूनों को जल्दी से नष्ट कर सकती है और जीनोमिक डीएनए जारी कर सकती है। जारी किए गए जीनोमिक डीएनए को पीसीआर प्रतिक्रिया में प्रोटीन, आरएनए या द्वितीयक मेटाबोलाइट्स को हटाए बिना सीधे टेम्पलेट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। इसके अलावा, किट को कम मात्रा में नमूने की आवश्यकता होती है, प्रयोगों के लिए 1 मिमी पौधे की पत्तियों का उपयोग किया जा सकता है।
इस किट में दिए गए 2×प्लांट मास्टर मिक्स में मजबूत प्रवर्धन संगतता है और यह नमूने के लाइसेट को कुशल और विशिष्ट प्रवर्धन के लिए सीधे टेम्पलेट के रूप में उपयोग कर सकता है। यह अभिकर्मक एक 2-गुना सांद्रित पीसीआर प्रतिक्रिया मिश्रण है, जिसमें टेम्पलेट और प्राइमर को छोड़कर पीसीआर प्रवर्धन के लिए उपयोग किए जाने वाले सभी घटक शामिल हैं, जो ऑपरेशन प्रक्रिया को बहुत सरल बनाता है और संदूषण की संभावना को कम करता है।
इस किट का उपयोग ट्रांसजेनिक पौधों की पहचान, पौधों की जीनोटाइपिंग आदि के लिए किया जा सकता है।
शिपिंग
उत्पादों को बर्फ पैक के साथ भेजा जाता है।
भंडारण
1. अभिकर्मक 10187-ए [बफर पी1] को 4℃ पर 1 वर्ष तक संग्रहीत किया जा सकता है।
2. अभिकर्मक 10187-बी [बफर पी2], लाइसेट को बेअसर करने के लिए उपयोग किया जाता है, जो नमूने को लंबे समय तक संग्रहीत करने के लिए फायदेमंद है, और इसे 4℃ पर 1 वर्ष तक संग्रहीत किया जा सकता है।
3. अभिकर्मक 10187-C [2× प्लांट मास्टर मिक्स] को -20℃ पर 1 वर्ष तक संग्रहीत किया जा सकता है। बार-बार जमने और पिघलने से बचें।
चेतावनी
1. पत्ती प्रयोग करते समय, ताजा एकत्रित पत्ती ऊतक का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। यदि यह लंबे समय तक जमे हुए ऊतक है, तो इसे -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत करने की आवश्यकता है। टेम्पलेट गिरावट से बचने और पीसीआर दक्षता को प्रभावित करने के लिए बार-बार जमने और पिघलने से जितना संभव हो सके बचना चाहिए। पत्ती ऊतक युवा पत्तियों के लिए उपयुक्त है। यदि यह एक परिपक्व पत्ती है, तो पत्ती की मुख्य शिरा के ऊतक का उपयोग करने से बचें।
2. सर्वोत्तम प्रवर्धन दक्षता के लिए खंड को 1 केबी लंबाई के भीतर प्रवर्धित करने की अनुशंसा की जाती है।
3. नमूना लेते समय, उपयुक्त आकार का नमूना लेने के लिए छेद पंच या चाकू का उपयोग करें। जब नमूने अलग-अलग हों, तो नमूने को संसाधित करने से पहले छेद पंच या चाकू को हर बार साफ करना होगा।
4. पत्ती ऊतक के लिए, 1-10 मिमी की पत्तियां लेने की सिफारिश की जाती है, बहुत छोटी पत्ती की लंबाई कम पीसीआर प्रवर्धन उपज का कारण बनेगी, बहुत अधिक पीसीआर प्रतिक्रिया को बाधित करेगी, थर्मल क्रैकिंग की विधि का उपयोग करें, पिपेट टिप के साथ मैशिंग करें, और पौधे की पत्तियों को संसाधित करने के लिए ग्राइंडर के साथ कुचल दें। उपचार के बाद, इसे हिलाया जाना चाहिए और सेंट्रीफ्यूज किया जाना चाहिए। परीक्षण के लिए सतह पर तैरनेवाला लेना सुनिश्चित करें। अवक्षेपण पीसीआर प्रतिक्रिया को गंभीर रूप से बाधित करेगा।
5. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के समय लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
6. यह उत्पाद केवल अनुसंधान उपयोग के लिए है!
| सामान्य समस्या | संभावित कारण | समाधान |
| सकारात्मक नियंत्रण और परीक्षण किये जाने वाले नमूनों में कोई बैंड नहीं थे। | पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली या प्रतिक्रिया स्थितियाँ उपयुक्त नहीं थीं। | पीसीआर के लिए इष्टतम प्रतिक्रिया स्थितियों का पता लगाने के लिए ग्रेडिएंट पीसीआर का उपयोग करें। |
| पीसीआर अभिकर्मकों का अनुचित भंडारण उन्हें निष्क्रिय कर देता है। | 2×पीसीआर मिक्स को -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित किया जाना चाहिए, उपयोग करते समय बार-बार जमने और पिघलने से बचें। यदि बार-बार उपयोग किया जाता है, तो इसे थोड़े समय के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है। | |
| प्राइमर डिज़ाइन संबंधी मुद्दे. | जांच करने के लिए प्राइमरों को पुनः डिज़ाइन करने का प्रयास करें। | |
| सकारात्मक नियंत्रण में रुचि का एक बैंड होता है, तथा परीक्षण किये जाने वाले नमूने में कोई बैंड नहीं होता है या कमजोर बैंड होता है। | लाइसिस बफर और न्यूट्रलाइजेशन बफर का अनुपात अनुपयुक्त है, और लाइसिस मिश्रण पीसीआर प्रणाली के पीएच मान को प्रभावित करेगा। | सामान्य परिस्थितियों में, निष्प्रभावी लाइसिस मिश्रण का pH लगभग 7-8 होना चाहिए (लाइसिस उत्पाद और बफर P2 को 5:1 के अनुपात के अनुसार सख्ती से निष्प्रभावी किया जाना चाहिए)। |
| नमूना लाइसिस मिश्रण को अनुचित तरीके से या बहुत लंबे समय तक संग्रहीत किया गया है, और डीएनए जीनोम का क्षरण हो गया है। | लाइसेट मिश्रण को 4°C पर 5 दिनों तक भंडारित किया जा सकता है, PCR के लिए ताजा तैयार लाइसेट मिश्रण का उपयोग करने का प्रयास करें। | |
| जोड़े गए टेम्पलेट की मात्रा उपयुक्त नहीं है। | प्रतिक्रिया प्रणाली के <5% की सीमा के भीतर जोड़े गए टेम्पलेट की मात्रा को अनुकूलित करें। | |
| पीसीआर चक्रों की अपर्याप्त संख्या. | पीसीआर चक्रों की संख्या को उचित रूप से बढ़ाएँ, अधिमानतः 35-40 चक्र। टेम्पलेट की जटिलता के कारण, शुद्ध डीएनए टेम्पलेट का उपयोग करने की तुलना में पीसीआर प्रतिक्रिया के 5-10 और चक्रों का उपयोग करना आम तौर पर बेहतर होता है। | |
| अविशिष्ट प्रवर्धन | पीसीआर एनीलिंग तापमान बहुत कम, चक्र संख्या, प्राइमर सांद्रता, या टेम्पलेट सांद्रता बहुत अधिक। | पीसीआर एनीलिंग तापमान बढ़ाएं और पीसीआर चक्र संख्या, प्राइमर सांद्रता, या टेम्पलेट सांद्रता घटाएं। |
| पीसीआर प्राइमर बेमेल. | पीसीआर प्राइमरों को पुनः डिज़ाइन करें। | |
| पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करते समय तापमान बहुत अधिक होता है या तैयारी के बाद रखा गया समय बहुत लंबा होता है। | पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली की तैयारी कम तापमान पर की जाती है, और तैयारी पूरी होने के बाद जितनी जल्दी हो सके पीसीआर प्रवर्धन प्रतिक्रिया की जाती है। | |
| लक्ष्य बैंड नकारात्मक नियंत्रण में दिखाई देता है | परिचालन उपकरणों या अभिकर्मकों का संदूषण। | प्रयोग में सभी अभिकर्मकों या उपकरणों को आटोक्लेव किया जाना चाहिए।लक्ष्य अनुक्रम को नमूना गन में जाने या सेंट्रीफ्यूज ट्यूब से बाहर गिरने से रोकने के लिए इसे संभालते समय सावधानी और कोमलता बरतें। |
| नमूनों के बीच क्रॉस-संदूषण। | प्रत्येक नमूना लेने वाले उपकरण का उपयोग केवल एक नमूने के लिए किया जाता है; या एक नमूना लेने के बाद, नमूना लेने वाले ब्लेड को 2% सोडियम हाइपोक्लोराइट घोल में डुबोएं, बार-बार धोएं, और फिर अवशेषों को साफ कागज के तौलिये से सुखाएं। |
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