विवरण
यह किट सीधे और जल्दी से माउस ऊतक (जैसे माउस पूंछ, माउस कान, माउस पैर की अंगुली, मांसपेशी, आदि) के पीसीआर प्रवर्धन का संचालन कर सकती है, और इसमें मजबूत नमूना संगतता है। एक शक्तिशाली लाइसिस बफर से लैस, यह किट तेजी से नमूनों को नष्ट कर सकती है और जीनोमिक डीएनए जारी कर सकती है। लाइसेट को शुद्धिकरण के बिना सीधे पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली में जोड़ा जा सकता है, और ऑपरेशन सुविधाजनक है। इसके अलावा, इस किट को कम नमूना इनपुट की आवश्यकता होती है, और प्रयोगों के लिए 5 मिलीग्राम माउस ऊतक या 1-5 मिमी माउस पूंछ का उपयोग किया जा सकता है।
इस किट द्वारा प्रदान किया गया 2× माउस डायरेक्ट पीसीआर मिक्स 2 गुना सांद्रता वाला एक हॉट-स्टार्ट पीसीआर प्रतिक्रिया समाधान है। इसमें टेम्पलेट और प्राइमर को छोड़कर पीसीआर प्रवर्धन के लिए उपयोग किए जाने वाले सभी घटक शामिल हैं, जो ऑपरेशन प्रक्रिया को बहुत सरल बनाता है और संदूषण की संभावना को कम करता है। किट का उपयोग ट्रांसजीन पहचान, माउस जीनोटाइपिंग आदि के लिए किया जा सकता है।
विशेषताएँ
- कम नमूने की आवश्यकता: 5 मिलीग्राम चूहे के ऊतक या 1-5 मिमी चूहे की पूंछ
- सुविधाजनक टेम्पलेट तैयारी: पीसने की आवश्यकता नहीं, डीएनए को परिष्कृत और शुद्ध करने की आवश्यकता नहीं, उच्च प्रवाह, समय और धन की बचत
- अनुकूलित पीसीआर प्रणाली: पीसीआर प्रतिक्रिया अवरोधक की उच्च विशिष्टता और मजबूत सहनशीलता के साथ
अनुप्रयोग
- ट्रांसजेनिक चूहों की पहचान
- चूहों की जीनोटाइपिंग
- माउस जीन नॉकआउट विश्लेषण
विशेष विवरण
| उत्पाद विनिर्देश | किट |
| ठोस शुरुआत | अंतर्निहित हॉट स्टार्ट |
| परिवहन की शर्तें | बर्फ के पैक |
| उत्पाद का प्रकार | डायरेक्ट पीसीआर किट |
| आवेदन करना को (आवेदन पत्र) | चूहे की पूंछ, चूहे का कान, चूहे का पैर, आंत, त्वचा, आदि। |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 10185ईएस50 | 10185ES70 |
| 10185-ए | बफर एमएल | 5×1 एमएल | 20×1 एमएल |
| 10185-बी | बफर मीट्रिक टन | 0.6 एमएल | 2×1.25 एमएल |
| 10185-सी | 2× माउस डायरेक्ट पीसीआर मिक्स | 500 μएल | 2×1 एमएल |
- क) बफर एमएल एक लाइसिस बफर है जिसमें मजबूत प्रोटीन डिनेचुरेंट्स होते हैं, कृपया दस्ताने पहनें।
- ब) बफर एमटी एक स्टॉप बफर है जिसका उपयोग बफर एमएल के लिसिस फ़ंक्शन को रोकने के लिए किया जाता है।
- c) 2× माउस डायरेक्ट पीसीआर मिक्स: इसमें हॉट-स्टार्ट टैक डीएनए पॉलीमरेज़, डीएनटीपी मिक्स, एमजीसीएल2, रिएक्शन बफर, पीसीआर रिएक्शन एन्हांसर, ऑप्टिमाइज़र, स्टेबलाइज़र, इलेक्ट्रोफोरेसिस इंडिकेटर डाई आदि शामिल हैं।
भंडारण
- घटक A: उत्पाद को एक वर्ष के लिए 2°C~8°C पर संग्रहीत किया जाना चाहिए। लंबे समय तक कई बार उपयोग करने के लिए, कृपया क्रॉस-संदूषण से बचें।
- घटक बी/सी: उत्पाद पर संग्रहित किया जाना चाहिए-25℃ ~ -15℃ एक वर्ष के लिए। कृपया बार-बार फ्रीज-थॉ से बचें।
आंकड़ों
1. लक्ष्य जीन (1 केबी के भीतर) प्रवर्धन परिणाम
चित्र 1.1 केबी के भीतर लक्ष्य जीन प्रवर्धन के लिए उपयुक्त।
2. विस्तार गति प्रदर्शन
चित्र 2. 500bp जीन, विस्तार की गति 1sec/kb जितनी तेज़ हो सकती है।
"TFPI हाइपरवायरुलेंट क्लेड 2 सी. डिफिसाइल से TcdB के लिए एक कोलोनिक क्रिप्ट रिसेप्टर है। सेल। 2022 मार्च 17;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010." से उद्धृत
[1] लुओ जे, यांग क्यू, झांग एक्स, एट अल. टीएफपीआई हाइपरविरुलेंट क्लेड 2 सी से टीसीडीबी के लिए एक कोलोनिक क्रिप्ट रिसेप्टर है। डिफिसाइल. सेल. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] झाओ जे, चेन जे, ली वाईवाई, ज़िया एलएल, वू वाईजी। ब्रूटन का टायरोसिन किनेज एनएलआरपी3 इन्फ्लेमसोम सक्रियण के माध्यम से मधुमेह के गुर्दे में मैक्रोफेज-प्रेरित सूजन को नियंत्रित करता है। इंट जे मोल मेड। 2021;48(3):177. doi:10.3892/ijmm.2021.5010(IF:4.101)
| आम समस्या | संभावित कारण | समाधान |
| सकारात्मक नियंत्रण और परीक्षण किये जाने वाले नमूनों में कोई बैंड नहीं थे। | पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली या प्रतिक्रिया स्थितियाँ उपयुक्त नहीं थीं। | पीसीआर के लिए इष्टतम प्रतिक्रिया स्थितियों का पता लगाने के लिए ग्रेडिएंट पीसीआर का उपयोग करें। |
| पीसीआर अभिकर्मकों के अनुचित भंडारण से उनकी सक्रियता समाप्त हो जाती है। | 2× माउस डायरेक्ट पीसीआर मिक्स को -20°C पर संग्रहित किया जाना चाहिए और उपयोग के दौरान बार-बार जमने और पिघलने से बचना चाहिए। यदि बार-बार उपयोग किया जाता है, तो इसे थोड़े समय के लिए 4°C पर संग्रहीत किया जा सकता है। | |
| प्राइमर डिज़ाइन संबंधी मुद्दे. | जांच करने के लिए प्राइमरों को पुनः डिज़ाइन करने का प्रयास करें। | |
| सकारात्मक नियंत्रण में रुचि का एक बैंड होता है, तथा परीक्षण किये जाने वाले नमूने में कोई बैंड नहीं होता है या कमजोर बैंड होता है। | अनुचित भंडारण या लंबे समय तक भंडारण से अभिकर्मक क्रियाशीलता की हानि हो सकती है। | ताज़ा अभिकर्मकों का उपयोग करें. |
| ऊतक लाइसेट को अधिक मात्रा में मिलाएं। | प्रतिक्रिया प्रणाली को बढ़ाएं, या लाइसेट की मात्रा को कम करें। | |
| नमूना लाइसिस मिश्रण को अनुचित तरीके से या बहुत लंबे समय तक संग्रहीत किया गया है, और डीएनए जीनोम का क्षरण हो गया है। | लाइसेट मिश्रण को 4°C पर 2-3 दिनों तक भंडारित किया जा सकता है।पीसीआर के लिए ताजा तैयार लाइसेट मिश्रण का उपयोग करने का प्रयास करें। | |
| जोड़े गए टेम्पलेट की मात्रा उपयुक्त नहीं है। | जोड़े गए टेम्पलेट की मात्रा को प्रतिक्रिया प्रणाली के 1-10% की सीमा के भीतर अनुकूलित किया गया था। | |
| पीसीआर चक्रों की अपर्याप्त संख्या. | पीसीआर चक्रों की संख्या बढ़ाएँ, अधिमानतः 35-40 चक्र। टेम्पलेट की जटिलता के कारण, पीसीआर प्रतिक्रियाओं को शुद्ध डीएनए टेम्पलेट की तुलना में 5-10 अधिक चक्रों के साथ किया जाना चाहिए। | |
| अविशिष्ट प्रवर्धन | पीसीआर एनीलिंग तापमान बहुत कम, चक्र संख्या, प्राइमर सांद्रता, या टेम्पलेट सांद्रता बहुत अधिक। | पीसीआर एनीलिंग तापमान बढ़ाएं और पीसीआर चक्र संख्या, प्राइमर सांद्रता या टेम्पलेट सांद्रता घटाएं। |
| पीसीआर प्राइमर बेमेल. | पीसीआर प्राइमरों को पुनः डिज़ाइन करें। | |
| पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली तैयार करते समय तापमान बहुत अधिक हो जाता है या तैयारी पूरी होने के बाद समय बहुत अधिक लग जाता है। | पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली की तैयारी कम तापमान पर की जाती है, और तैयारी पूरी होने के बाद जितनी जल्दी हो सके पीसीआर प्रवर्धन प्रतिक्रिया की जाती है। | |
| लक्ष्य बैंड नकारात्मक नियंत्रण में दिखाई देता है | परिचालन उपकरणों या अभिकर्मकों का संदूषण। | प्रयोग में सभी अभिकर्मकों या उपकरणों को ऑटोक्लेव किया जाना चाहिए। लक्ष्य अनुक्रम को सैंपल गन में चूसने या सेंट्रीफ्यूज ट्यूब से बाहर गिरने से रोकने के लिए उन्हें संभालते समय सावधान और कोमल रहें। |
| नमूनों के बीच क्रॉस-संदूषण। | प्रत्येक नमूना लेने वाले उपकरण का उपयोग केवल एक नमूने के लिए किया जाता है; या एक नमूना लेने के बाद, नमूना लेने वाले उपकरण के किनारे को 2% सोडियम हाइपोक्लोराइट घोल में डुबोएं, बार-बार धोएं, और फिर अवशेषों को साफ कागज के तौलिये से सुखाएं। |
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