Kit de ensayo de genes de reportero de luciferasa dual _ 11402ES
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Kit de ensayo de genes de reportero de luciferasa dual _ 11402ES
Kit de ensayo de genes de reportero de luciferasa dual _ 11402ES
La luciferasa de luciérnaga es una proteína con un peso molecular de aproximadamente 61 kDa, que puede catalizar la oxidación de luciferina a oxiluciferina en presencia de ATP, iones de magnesio y oxígeno. Emite bioluminiscencia con una longitud de onda de alrededor de 560 nm. La luciferasa de renilla es una proteína con un peso molecular de aproximadamente 36 kDa, que puede catalizar la oxidación de coelenterazina a coelenteramida en presencia de oxígeno, y emite una longitud de onda de 480 nm durante el proceso de oxidación. sobre la bioluminiscencia....

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Kit de ensayo de genes de reportero de luciferasa dual _ 11402ES

YeasenSku: 11402ES10
Tamaño: 10 T
Precio:
$25.00
Existencias:
En stock

La luciferasa de luciérnaga es una proteína con un peso molecular de aproximadamente 61 kDa, que puede catalizar la oxidación de luciferina a oxiluciferina en presencia de ATP, iones de magnesio y oxígeno. Emite bioluminiscencia con una longitud de onda de alrededor de 560 nm. La luciferasa de renilla es una proteína con un peso molecular de aproximadamente 36 kDa, que puede catalizar la oxidación de coelenterazina a coelenteramida en presencia de oxígeno, y emite una longitud de onda de 480 nm durante el proceso de oxidación. sobre la bioluminiscencia. Ambas bioluminiscencias se pueden medir mediante quimioluminiscencia. El principio de detección se muestra en la figura 1:

Figura 1: Esquema del ensayo de luciferasa de luciérnaga y renilla

Por lo general, el 5'UTR o promotor del gen objetivo se clona aguas arriba de la luciferasa de luciérnaga, o el 3'UTR se clona aguas abajo de la luciferasa de luciérnaga, y el efecto de regulación transcripcional del promotor o elemento regulador se detecta detectando la cantidad de luciferasa de luciérnaga. La luciferasa de Renilla se utilizó como control interno para eliminar diferencias en el número de células, la eficiencia de la transfección, etc. El kit de ensayo del gen reportero de luciferasa dual utiliza luciferina como sustrato para detectar la actividad del gen reportero de la luciferasa de luciérnaga, y luego utiliza coelenterazina como sustrato para detectar la luciferina de Renilla mientras se extingue la reacción de fluorescencia. Actividad del gen reportero enzimático. El kit tiene las características de alta sensibilidad.

Características

Capacidad de lisis mejorada: capaz de lisar completamente la gran mayoría de tipos de células.

Señal más fuerte: detección precisa de la expresión del promotor débil.

Mayor sensibilidad: detectable hasta 10-20 picomoles de moléculas de luciferasa.

Rango lineal más amplio: el rango de detección lineal supera los 8 órdenes de magnitud de concentración de enzima.

Aplicaciones

Verificación de interacciones de miRNA con 3'UTR de genes diana

Verificación de interacciones lncRNA-miRNA

Verificación de la regulación de factores de transcripción en la región promotora

Análisis de la vía de señalización

Análisis de la actividad de SNP

Presupuesto

Forma

líquido

Luciferasa

Luciérnaga y Renilla

Vida media de la señal

30 minutos

Número de componentes del producto

5

Flujo de trabajo

Dos Spaso

Componentes

Componentes No.

Nombre

11402ES60

11402ES80

11402-A

Lisados ​​celulares

20 ml

10 x 20 ml

11402-B

Tampón de luciferasa de luciérnaga

10 ml

10 x 10 ml

11402-C

Sustrato de luciferasa de luciérnaga (50 ×)

200 μL

10×200 μL

11402-D

Tampón de luciferasa de Renilla

10 ml

10 x 10 ml

11402-E

Sustrato de luciferasa de Renilla (50 ×)

200 μL

10×200 μL

Envío y almacenamiento

Los productos del kit de ensayo del gen reportero de luciferasa dual deben almacenarse a -15 ℃ ~-25℃ para 1 año.

Cifras

Figura 1. YEASEN (Gato#: 11402) tiene una intensidad de fluorescencia comparable a la de Brand P.

Cifra2. YFACILITAR (Gato#: 11402) Los reactivos de detección interactúan con la luciferasa para lograr una intensidad de luminiscencia óptima. Después de la adición del sustrato de luciferasa de Renilla, la bioluminiscencia de la luciferasa de luciérnaga se extingue: se puede extinguir prácticamente por completo.

Documentos:

Hoja de datos de seguridad

11402 MSDS HB220209 ES.PDF

Manuales

11402 Manual HB241230 ES.pdf

Citas y referencias:

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Storage

The Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit products should be stored at -15℃ ~ -25℃ for 1 year.

FAQ

Yes, they can be stored at -80°C, similar to standard protein storage protocols. Lysed samples can be stored at -80°C for up to 6 months and at -20°C for up to 1 month.
Strict light protection is not required during operation. However, store them protected from light. Low temperature is a more critical storage condition—especially for coelenterazine (the Renilla substrate), which is recommended to be stored at -80°C.
The ratio should be adjusted according to specific experimental conditions. Pilot experiments are recommended—for instance, testing Renilla vector to Firefly vector ratios at 1:10, 1:20, 1:50, and 1:100.
They are assayed in the same well. There is no mutual interference because the Renilla luciferase substrate reagent contains a compound that quenches Firefly luminescence. While separate assays are possible, sequential measurement in a single well is standard.
Different microplate readers vary in sensitivity and parameter settings, which can lead to differences in background signal readings for the same sample.
Opaque white microplates.
Add 0.3 mL of Triton X-100 to 10 mL of PBS to prepare a 3% Triton X-100 solution.
Dilute the cell lysate sample 5-fold prior to testing.
1. Luciferase is expressed intracellularly and is a enzyme non-native to humans (yielding extremely low background). It cannot cross cell membranes. In contrast, luciferase substrates are hydrophobic, cyclic small molecules that penetrate cell membranes easily. Thus, any luciferase expression is exogenous, and adding substrate directly to culture media or injecting it in vivo yields detectable signals.
2. In vitro reporter assays require cell lysis to homogenize samples, overcoming transfection heterogeneity, uneven substrate permeability, and signal variation. In vitro reporter assays are highly quantitative and sensitive, requiring ATP and oxygen. Cell lysis fully releases expressed luciferase to optimize the reaction; since intracellular oxygen is limited, omitting lysis leads to signal reduction (some lysis buffers include optimized additives like ATP to boost signal). Therefore, cell lysis ensures superior signal in in vitro assays. 3. In vivo imaging instruments possess high sensitivity and power capable of penetrating skin and tissue, enabling strong signal detection without cell lysis.
No, the order cannot be adjusted. In this kit, Component B (Firefly Luciferase Buffer) is essential for detecting both Firefly and Renilla luciferases. The optimal reaction environment for Renilla luciferase requires the presence of Component B; otherwise, Renilla luciferase readings will be extremely low.

Citations

Documents

Manual
11402_Manual_HB260114_EN.pdf
MSDS
11402_MSDS_HB220209_EN.pdf

Applications

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Consulta

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