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Este producto es una endonucleasa de restricción de tipo II derivada de la proteína recombinante codificada por el gen BspQI en Bacillus sphaericus expresado por E. coli. Su secuencia de reconocimiento es 5'-GCTCTTCN1/N4-3'. Se utiliza para digerir plásmidos para preparar fragmentos de ADN linealizados con terminación poli(A/T/G/C) para obtener extremos cohesivos específicos. Este producto se produce de acuerdo con los requisitos del proceso GMP y se proporciona en forma líquida.
Característica
- Las enzimas de restricción de tipo IIS reconocen secuencias de ADN asimétricas y cortan fuera de su secuencia de reconocimiento.
- Sitio de corte de la enzima de restricción: GCTCTTC (1/4)
- Digestión del ADN para obtener extremos pegajosos específicos
- Aislado de una fuente recombinante
- Probado para la ausencia de endonucleasas, exonucleasas y ARNasas.
Solicitud
- Digerir el plásmido para preparar un fragmento de ADN linealizado al final de Poly (A/T/C/G);
- Linealizar la plantilla de plásmido antes de la transcripción in vitro
- Resumen de restricciones
Especificación
| Expresión del anfitrión | E. coli recombinante con gen BspQI |
| Temperatura de reacción | 50℃ |
| Búfer de almacenamiento | 20 mM Tris-HCl, 0,5 M KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,1 % Triton X-100, 50 % glicerol |
| Definición de unidad | 1 unidad: La cantidad de enzima necesaria para digerir 1 μg de λDNA en 1 h a 50 ℃ en un sistema de 50 μL |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 10664ES76 (500 U) | 10664ES86 (2.500 U) | 10664ES92 (10 ku) | 10664ES98 (100 ku) |
| 10664 | BspQI grado GMP (10 U/μL) | 50 μl | 250 μL | 1 ml | 10 ml |
Envío y almacenamiento
El producto se envía con hielo seco y se puede almacenar a -15 ℃. ~-25℃ Para uno año.
Cifras
Figura 1. El rendimiento de YEASEN BspQI es superior.
En un sistema de reacción de 50 μL, se trató 1 μg de λDNA con la cantidad correspondiente de BspQI (incubar a 50 °C durante 60 min y luego incubar a 80 °C durante 20 min para inactivar BspQI). Luego se cargaron 20 μL de la solución de reacción.
METRO: Marcador de ADN
C: El grupo de control sin tratamiento BspQI
Storage
FAQ
1. The cut site should be such that the 5' end protrudes or is flush with the end. The presence of the 3' protruding end will increase the generation of false by-products during in vitro transcription (IVT) from the template body.
2. The recognition sequence of the restriction enzyme cleavage site should be as long as possible; the longer the recognition sequence, the less likely it is to appear in the gene fragment.
3. IIS-type endonucleases are the preferred enzymes for linearizing plasmids in vaccine development, as their cleavage sites are outside the recognition sequence, ensuring the integrity of the designed poly(A) tail. After linearizing DNA templates using IIS-type endonucleases, no "scars" will remain, and no unnecessary nucleotides will be added during the IVT process.
4. The endonucleases meet the pharmaceutical production grade requirements (GMP, without animal-derived components, etc.)
At present, for most mRNA development projects, especially vaccine projects, the endonucleases used for linearization of plasmids are still BspQI, BsaI, and XbaI. Among them, BspQI is the most frequently used. It is estimated that there is a certain relationship with the previous designed plasmid sequences from abroad. Of course, it is not limited to these enzymes; we have also encountered cases where other enzymes were used for linearization.
Citations
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Consulta
Preguntas frecuentes
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