Este producto es una ARN polimerasa del bacteriófago T7 derivada de la expresión de proteínas recombinantes en Escherichia coli. Cataliza la síntesis de ARN 5'→3' en ADN bicatenario a partir de su secuencia promotora T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') y utiliza NTP como sustratos. El ADN con extremos romos lineales bicatenarios o extremos salientes 5' puede utilizarse como molde para la ARN polimerasa T7, por lo que los plásmidos linealizados y los productos de PCR pueden utilizarse como moldes para análisis in vitro. síntesis de ARN.
Nota: G* es la primera base de la transcripción de ARN.
Este producto se elabora de acuerdo con las normas GMP y se suministra en forma líquida.
Característica
- Sintetizar transcripciones largas y cortas, se pueden producir 100-200 μg de ARN con 1 μg de plantilla de ADN
- Mayor rendimiento y fácil operación.
- Endotoxinas más bajas
- Probado para la ausencia de endonucleasas, exonucleasas y ARNasas.
Solicitud
- Preparación de sondas de ARN radiomarcadas
- Generación de ARN para estudios de estructura, procesamiento y catálisis del ARN
- Control de expresión mediante ARN antisentido
- síntesis de ARNm y ARNsg
Especificación
| Fuente | Expresado en E. coli con un gen de ARN polimerasa T7 recombinante |
| Temperatura óptima | 37℃ |
| Búfer de almacenamiento | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1 % Triton X-100, 50 % (v/v) glicerina, pH 7,9 a 25℃ |
| Definición de unidad | La cantidad de enzima necesaria para incorporar 1 nmol de [3H] GMP al precipitado insoluble en ácido en 1 hora a 37 °C y pH 8,0 se define como 1 unidad. |
Calidad
| Artículos del COA | Estándar |
| Actividad | 250-300 U/μL |
| Proteína concentración | ≥0,5 mg/ml |
| Pureza | ≥95% |
| Endotoxin | <20 UE/mg |
| Proteasa residual | Negativo |
| Exonucleasa residual | Negativo |
| Nickasa residual | Negativo |
| ARNasa residual | Negativo |
| MI. proteína huésped de coli | <50 ppm |
| Huésped de E. coli ADN | <10 fg/U |
| Micoplasma ADN | Negativo |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 10625ES10 (10 KU) | 10625ES60 (100 KU) | 10625ES86 (2500 KU) | 10625ES99 (100 MU) |
| 10625 | ARN polimerasa T7 de grado GMP (250 U/μL) | 40 μL | 400 μL | 10 ml | 400 ml |
Envío y almacenamiento
Los productos de grado GMP de ARN polimerasa T7 se envían con hielo seco y se pueden almacenar a -15 °C ~ -25 °C durante un año.
Cifras
Figura 1. El ARN estándar se sintetizó in vitro utilizando el kit de síntesis de ARN T7.
La reacción se incubó en un instrumento de PCR a 37 °C durante 2 h y luego se purificó con perlas magnéticas (Cat. n.° 12602). El resultado se analizó con un espectrofotómetro NanoDrop, como se muestra en la Figura 1.
Figuras 2. Demostración de la transcripción de ARN de diferentes longitudes por el kit T7 respectivamente en el electroforetograma (Figuras 2A), el diagrama de electroforesis capilar (Figuras 2B) y el cromatograma (Figuras 2C).
Figura 3. Síntesis de ARN con capuchón in vitro.
La reacción se incubó en un instrumento de PCR a 37 °C durante 2 h y posteriormente se purificó mediante microesferas magnéticas (Cat. n.° 12602). El rendimiento se analizó con un espectrofotómetro NanoDrop, como se muestra en la Figura 3A. La integridad se analizó mediante electroforesis capilar, como se muestra en la Figura 3B.
10625_Manual_HB221111_ES.pdf
Citas y referencias:
Storage
FAQ
1)ptimizing the sequence immediately upstream of the template's 3' end;
2)Controlling the IVT yield, as excessively high transcription levels tend to increase the frequency of self-extension events.
Citations
Documents
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