Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low ROX) _ 11189es
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Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low ROX) _ 11189es
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low ROX) _ 11189es
Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) ist eine Vorlösung für die 2× quantitative PCR-Amplifikation in Echtzeit mit hoher Fluoreszenzintensität, hoher Sensitivität und Spezifität sowie hoher Amplifikationsausbeute. Die Kernkomponente, Hieff UNICON™ Taq DNA-Polymerase, wird durch die Antikörpermethode heißgestartet, wodurch unspezifische Amplifikationen, die durch Primer-Annealing während der Probenvorbereitung verursacht werden, wirksam gehemmt werden können. Gleichzeitig fügt die Formel Faktoren hinzu, die die Amplifikationseffizienz der PCR-Reaktion verbessern, und erleichtert die Amplifikation von Genen mit unterschiedlichem GC-Gehalt (30–70 %), sodass die quantitative PCR in einem breiten Bereich quantitativer Regionen eine gute lineare...

Color-Traceable qPCR: Zero Mispipetting

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Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low ROX) _ 11189es

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YeasenSKU: 11189ES03
Größe: 1 ml
Preis:
$40.00 $55.00
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Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) ist eine Vorlösung für die 2× quantitative PCR-Amplifikation in Echtzeit mit hoher Fluoreszenzintensität, hoher Sensitivität und Spezifität sowie hoher Amplifikationsausbeute. Die Kernkomponente, Hieff UNICON™ Taq DNA-Polymerase, wird durch die Antikörpermethode heißgestartet, wodurch unspezifische Amplifikationen, die durch Primer-Annealing während der Probenvorbereitung verursacht werden, wirksam gehemmt werden können. Gleichzeitig fügt die Formel Faktoren hinzu, die die Amplifikationseffizienz der PCR-Reaktion verbessern, und erleichtert die Amplifikation von Genen mit unterschiedlichem GC-Gehalt (30–70 %), sodass die quantitative PCR in einem breiten Bereich quantitativer Regionen eine gute lineare Beziehung erzielen kann. Das Produkt nutzt die gemischte Farbwechselreaktion verschiedener Farbstoffe, um den Pipettiervorgang zu überwachen, wodurch das Auftreten von Pipettierfehlern wirksam reduziert wird.

Merkmale

Pipettierverfolgung: Reduzieren Sie das Risiko von übersehenen/Zugabefehlern

Hervorragende Verstärkung: Gute Linearität über einen weiten linearen Bereich

Hohe Präzision: Kann Vorlagen mit einem 2-fachen Konzentrationsunterschied genau unterscheiden

Gute Wiederholbarkeit: Geringe Variabilität zwischen den Vertiefungen in Replikationsvertiefungen, was zu einer besseren Wiederholbarkeit führt

Stabil und zuverlässig: Das Reaktionssystem kann 24 Stunden bei Raumtemperatur gelagert werden und das Produkt bleibt nach 20 Gefrier-Auftau-Zyklen unverändert

Anwendungen

Analyse der Genexpression-Unterschiede

Absolute quantitative Analyse

Technische Daten

Konzentration

2 ×(qPCR-Mischung)

Nachweisverfahren

Färbemethode

PCR-Methode

qPCR

Polymerase

Taq DNA-Polymerase

Art der Probe

DNA

Anwendungsgeräte

Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7;Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P und andere Fluoreszenz-quantitative PCR-Instrumente, die die Zugabe niedriger Konzentrationen von ROX Reference Dye erfordern

Produkttyp

Premix für die quantitative Fluoreszenz-PCR in Echtzeit

Bewerben bei (Bewerbung)

Genexpression

Komponenten

Komponenten Nr.

Name

11189ES03

11189ES08

11189ES60

11189-A

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master-Mix (MOm Rox)

1 ml

5×1 ml

100×1 ml

11189-B

10×Verdünnungspuffer

1 ml

1 ml

20×1 ml

Versand und Lagerung

Dieses Produkt sollte 1 Jahr lang bei -25–15 °C gelagert werden.

Zahlen

Abbildung 1. Innerhalb des Dynamikbereichs können zuverlässige Ergebnisse erzielt werden.

Mithilfe von 2 µL Plasmidvorlagen mit einem Gradienten von 10^1-10^7 wurden die entsprechenden Gene amplifiziert. Hieff UNICON™ Der ColorGPS-Mastermix kann einen Vorlagenmengenbereich von 7 Größenordnungen effektiv erkennen und erreicht eine gute Linearität innerhalb eines breiten linearen Bereichs.

Figur2. Kann Konzentrationsunterschiede der Vorlage von bis zu 2-fach genau unterscheiden.

Unter Verwendung von 2 µL Plasmid, verdünnt in einem 2-fachen Gradienten, als Vorlage wurden die entsprechenden Gene amplifiziert. Hieff UNICON™ Der ColorGPS-Mastermix kann Konzentrationsunterschiede in der Vorlage präzise auflösen.

Figur3. Es wird eine geringe Variabilität zwischen den Vertiefungen beobachtet, was auf eine bessere Wiederholbarkeit hinweist.

Unter Verwendung von Dutzenden von Plasmidkopien als Vorlage wurde die Amplifikation mit verschiedenen fluoreszierenden quantitativen Reagenzien gemäß den in den jeweiligen Bedienungsanleitungen angegebenen Verfahren durchgeführt. Die SD-Werte zeigen, dass das neue Produkt im Vergleich zu anderen Reverse-Transkriptionsreagenzien kleinere Unterschiede zwischen Replikationsvertiefungen und eine bessere Wiederholbarkeit aufweist.

Figur4. Flexibler, für Standard- oder Schnellverfahren geeignet.

Beim Standardverfahren werden die Denaturierungszeit und die Verlängerungszeit auf 10 Sekunden bzw. 30 Sekunden eingestellt, während beim Schnellverfahren die Denaturierungszeit und die Verlängerungszeit auf 3 Sekunden bzw. 10 Sekunden eingestellt werden, um die Ct-Werte zu ermitteln, die 10 Zielgenen entsprechen. Die Ergebnisse zeigen, dass die mit dem neuen Produkt sowohl im Standard- als auch im Schnellverfahren erzielten Ct-Werte stark korrelieren und das neue Produkt im Schnellverfahren gute Ergebnisse erzielen kann.

Figur5. Nachdem das Reaktionssystem hergestellt wurde, kann es 24 Stunden lang bei Raumtemperatur stabil bleiben.

Unter Verwendung verschiedener Gene von Mäusen, menschlichen 293-Zellen und Arabidopsis thaliana als Ziel wurde das Reaktionssystem nach der Vorbereitung vor der Erkennung 24 Stunden lang bei unterschiedlichen Temperaturen im Dunkeln aufbewahrt. Im Vergleich zur sofortigen Verarbeitung überschreitet der Erkennungsunterschied für verschiedene Gene 0,5 Ct nicht, was darauf hindeutet, dass auch bei lang andauernden Operationen stabile Ergebnisse erzielt werden können.

Unterlagen:

Benutzerhandbücher

11189_Handbuch_Ver.EN20241218.pdf

Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 18 months.

FAQ

Please refer to the "YiSheng Biotechnology YiSheng Biotechnology Dye Method Fluorescence Quantitative PCR Mix Selection Table" for details. Click here to learn more and help you choose the appropriate reagents.
For molecular enzyme reagents, simply invert and mix them together, then perform a gentle centrifugation. It is not recommended to vigorously shake to mix them.
Refer to the manual. Ultimately, it is necessary to ensure that after being mixed with the template, the volume is exactly 1×. For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
You can choose to use the cDNA stock solution or dilute it. Just make sure that the Ct value of the gene you want falls within the range of 15 to 30. Generally, for every 10-fold dilution of cDNA, the Ct value increases by 3.3.
Store in a dark place and the reaction system must not be left open. These two points are essential. It can be placed in a 4℃ refrigerator or at room temperature for 24 hours. Before using, gently shake and centrifuge the sample before loading it onto the instrument. Before loading, carefully check if the tubes or plates have been contaminated.
https://cdn.shopify.com/s/files/1/0803/9419/1166/files/bbbb_1024x1024.png?v=1769394213 When designing primers, it is best to cross introns. The design method can refer to "Enjoyable! A single article to understand qPCR primer design, a must-have skill for experimental experts!" Also, validated primers can be selected. The selection method can refer to "Where to find ready-made qPCR primer sequences?"
The possible reasons are as follows:
1. The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2. A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
The specificity of qPCR products can usually be determined through the melting curve. If it is still necessary to determine the products through gel electrophoresis, the qPCR product can undergo electrophoresis. Electrophoresis requires Loading Buffer, and the product cannot be directly loaded for electrophoresis.
1. Confirm whether the signal acquisition function is enabled in the program. If a two-step method is used, the signal acquisition should be set during the annealing extension stage.
2.Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3. Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4. Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The analysis is conducted by observing the melting curve. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
It indicates the presence of genomic DNA contamination. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genome for RNA extraction or during reverse transcription by adding a step to remove the genome. Alternatively, when designing the primers, a design across introns should be adopted.
1. If the CT value is less than 30, but the repeatability is very poor, what should we do? Improve the accuracy of sample addition. Avoid adding small volumes and reduce the error of addition. This can be achieved by preparing a large sample system, for example, mixing primers, water, and qPCR mix into a large system or using the method of mixing primers and water into a large system. The large system needs to be mixed evenly. Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
2. What if CT is ≥ 30 but the repeatability is very poor? At this point, due to the low abundance of the effective template, the randomness of collisions between the template and the primers increases, thereby causing a greater difference between the replicons. It is recommended to try adding 2-3 replicons, and then eliminate the data with large differences for data analysis.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the left of the main peak. This might be a situation caused by primer dimerization. One possible solution could be to increase the annealing temperature, reduce the primer concentration, or redesign the primers. The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak. a. It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned. b. It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.

Citations

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Das Produkt ist nur für Forschungszwecke bestimmt und nicht für die therapeutische oder diagnostische Anwendung bei Menschen oder Tieren. Produkte und Inhalte sind durch Patente, Marken und Urheberrechte von Yeasen Biotechnology geschützt. Markensymbole geben das Herkunftsland an, nicht unbedingt die Registrierung in allen Regionen.

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Yeasen engagiert sich für ethische Wissenschaften und ist davon überzeugt, dass unsere Forschung kritische Fragen ansprechen und gleichzeitig Sicherheit und ethische Standards gewährleisten sollte.