Protein A og Protein G er guldstandardproteinerne til antistofaffinitetsoprensning og immunpræcipitation (IP). Ved kovalent at koble både Protein A og Protein G til agarose eller magnetiske perler tilbyder disse værktøjer et bredere bindingsområde sammenlignet med perler med kun én proteintype, hvilket øger deres alsidighed. Derudover er protein A og protein G, der anvendes i disse produkter, gensplejset til at bevare deres høje affinitet for immunoglobuliner (Ig), mens de eliminerer ikke-primære bindingsdomæner, hvorved ikke-specifikke interaktioner reduceres.
Tabel 1: Sammenligning af protein A/G agarose perler og magnetiske perler
|
| rProtein A/G Agarose Harpiks | Protein A/G MagBeads |
| Matrix | Meget tværbundne 4% agarose mikrosfærer | Silica-baserede magnetiske perler |
| Partikelstørrelse | 45-165 µm | 200 nm |
| Kapacitet | >20 mg hIgG/ml harpiks | >0,7 mg hIgG/ml magnetiske perler |
| Fordele | Nem at bruge, ingen ekstraudstyr påkrævet | Enkel betjening |
| Stor porestørrelse, stærk bindekraft | Lille diameter, god kinetik | |
| Højt udbytte af målprotein | Glat overflade, minimal perleadsorption, lav baggrund, mindre antistofforbrug | |
| Ulemper | Porøs og tilbøjelig til adsorption (forudrensning påkrævet) | Praktisk at bruge med et magnetstativ |
Produktapplikationer
1. Oprensning af antistoffer
Isoler antistoffer med høj renhed fra serum eller ascites i et enkelt trin.
2. Immunpræcipitation (IP)
Berig specifikt proteins at studere dens karakteristika (såsom post-translationelle modifikationer).
3. Co-immunpræcipitation (Co-IP)
Berige mål protein til undersøge andre proteiner, der binder til det (dvs. protein-protein-interaktioner, proteinkomplekser osv.).
Driftsprocedure
Test data
1. Oprensning af antistoffer fra kaninserum vha rProtein A/G Agarose Harpiks.
 | M: Proteinmarkør L: Præ-kolonne råprøve elu: Eluering |
Figur 1. Elektroforese resultat af antistofoprensning vha rProtein A/G Agarose Harpiks.
2. Antistofkonjugationsforsøg med Protein A/G Magbeads
 | 1: NC 2: Yeasen Protein A/G Magbeads 3: Yeasen Protein A/G Magbeads 4: Konkurrent |
Figur 2. Yeasen Protein A/G Magbeads klarede sig bedre Konkurrent magnetiske perler.
3. Anvendelse af Protein A/G Magbeads for IP
 |
Målprotein 1: NC 2: Yeasen Protein A/G Magbeads 3: Yeasen Protein A/G Magbeads 4: Konkurrent |
Figur 3. Yeasen Protein A/G Magbeads klarede sig bedre Konkurrent magnetiske perler.
4. Anvendelse af Protein A/G Magbeads for Co-IP: Specifikke antistoffer mod p65 og cyclin-afhængig kinase 9 (CDK9) anvendes til immunpræcipitationsanalyse af ekstraheret total cellulært protein.
Figur 4. Immunpræcipitanter blev derefter udsat for western blot-analyse under anvendelse af specifikke antistoffer mod CDK9 og p65.
Produktinformation
| Produktnavn | Produktnummer | Specifikation |
| Protein A/G Magbeads | 1 ml/5 ml | |
| rProtein A/G Agarose Harpiks | 36403ES08/25/60 | 5 ml/25 ml/100 ml |
Relaterede produkter
| Produktnavn | Produktnummer | Specifikation |
| SuRi rProtein A Agarose Harpiks | 5 ml/25 ml/100 ml | |
| rProtein G Agarose Harpiks | 36405ES08/25/60 | 5 ml/25 ml/100 ml |