Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low ROX) _ 11189ES
Cuộn hình ảnh để phóng to Bấm vào hình ảnh để phóng to
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low ROX) _ 11189ES
Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low ROX) _ 11189ES
Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) là dung dịch tiền khuếch đại PCR định lượng thời gian thực 2x, có cường độ huỳnh quang cao, độ nhạy và độ đặc hiệu cao, và hiệu suất khuếch đại cao. Thành phần cốt lõi, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, được khởi động nóng bằng phương pháp kháng thể, có thể ức chế hiệu quả sự khuếch đại không đặc hiệu do gắn mồi trong quá trình chuẩn bị mẫu. Đồng thời, công thức bổ sung các yếu tố để tăng...

Color-Traceable qPCR: Zero Mispipetting

Frequently Bought Together

Hieff Unicon ™ ColorGPS QPCR Master Mix (Low ROX) _ 11189ES

YeasenSKU: 11189ES03
Kích cỡ: 1 ml
Giá:
$55.00
Cổ phần:
Trong kho

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Low Rox) là dung dịch tiền khuếch đại PCR định lượng thời gian thực 2x, có cường độ huỳnh quang cao, độ nhạy và độ đặc hiệu cao, và hiệu suất khuếch đại cao. Thành phần cốt lõi, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, được khởi động nóng bằng phương pháp kháng thể, có thể ức chế hiệu quả sự khuếch đại không đặc hiệu do gắn mồi trong quá trình chuẩn bị mẫu. Đồng thời, công thức bổ sung các yếu tố để tăng hiệu quả khuếch đại của phản ứng PCR và các chất xúc tác để cân bằng sự khuếch đại của các gen có hàm lượng GC khác nhau (30~70%), do đó PCR định lượng có thể thu được mối quan hệ tuyến tính tốt trong nhiều vùng định lượng. Sản phẩm sử dụng phản ứng thay đổi màu hỗn hợp của các loại thuốc nhuộm khác nhau để theo dõi hoạt động hút, giúp giảm hiệu quả xảy ra lỗi hút.

Đặc trưng

Theo dõi việc hút: Giảm nguy cơ bỏ sót/lỗi thêm

Độ khuếch đại tuyệt vời: Độ tuyến tính tốt trên phạm vi tuyến tính rộng

Độ chính xác cao: Có thể phân biệt chính xác các mẫu có nồng độ chênh lệch gấp 2 lần

Độ lặp lại tốt: Độ biến thiên nhỏ giữa các giếng trong các giếng sao chép, dẫn đến độ lặp lại tốt hơn

Ổn định và đáng tin cậy: Hệ thống phản ứng có thể được lưu trữ ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ và sản phẩm vẫn không bị ảnh hưởng sau 20 chu kỳ đông lạnh-tan băng

Ứng dụng

Phân tích sự khác biệt biểu hiện gen

Phân tích định lượng tuyệt đối

Thông số kỹ thuật

Sự tập trung

2 ×(Hỗn hợp qPCR)

Phương pháp phát hiện

Phương pháp nhuộm

Phương pháp PCR

qPCR

Polymerase

DNA polymerase Taq

Loại mẫu

ADN

Thiết bị ứng dụng

Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7;Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P và các thiết bị PCR định lượng huỳnh quang khác yêu cầu bổ sung nồng độ thấp Thuốc nhuộm tham chiếu ROX

Loại sản phẩm

Premix cho PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực

Nộp đơn vào (ứng dụng)

Biểu hiện gen

Thành phần

Số thành phần

Tên

11189ES03

11189ES08

11189ES60

11189-MỘT

Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (Lôichúng tôi (Rox)

1mL

5×1 mL

100×1 mL

11189-B

10×Đệm pha loãng

1mL

1mL

20×1mL

Vận chuyển và lưu trữ

Sản phẩm này nên được bảo quản ở nhiệt độ -25~-15℃ trong vòng 1 năm.

Các con số

Hình 1. Có thể thu được kết quả đáng tin cậy trong phạm vi động.

Sử dụng 2 µL khuôn mẫu plasmid với độ dốc 10^1-10^7, các gen liên quan đã được khuếch đại. Hieff UNICON™ Bộ trộn màu ColorGPS có thể phát hiện hiệu quả phạm vi lượng mẫu lên tới 7 cấp độ, đạt được tính tuyến tính tốt trong phạm vi tuyến tính rộng.

Nhân vật2. Có thể phân biệt chính xác sự khác biệt nồng độ mẫu gấp 2 lần.

Sử dụng 2 µL plasmid pha loãng theo gradient 2 lần làm khuôn mẫu, các gen liên quan đã được khuếch đại. Hieff UNICON™ ColorGPS master mix có thể phân giải chính xác sự khác biệt về nồng độ mẫu.

Nhân vật3. Sự thay đổi nhỏ giữa các giếng được quan sát thấy, cho thấy khả năng lặp lại tốt hơn.

Sử dụng hàng chục bản sao của plasmid làm khuôn mẫu, quá trình khuếch đại được thực hiện với các thuốc thử định lượng huỳnh quang khác nhau theo các quy trình được chỉ định trong hướng dẫn sử dụng tương ứng. Các giá trị SD cho thấy rằng, so với các thuốc thử phiên mã ngược khác, sản phẩm mới có sự khác biệt nhỏ hơn giữa các giếng sao chép và khả năng lặp lại tốt hơn.

Nhân vật4. Linh hoạt hơn, phù hợp với các quy trình tiêu chuẩn hoặc nhanh chóng.

Trong quy trình chuẩn, thời gian biến tính và thời gian kéo dài được đặt lần lượt là 10 giây và 30 giây, trong khi trong quy trình nhanh, thời gian biến tính và thời gian kéo dài được đặt lần lượt là 3 giây và 10 giây để phát hiện các giá trị Ct tương ứng với 10 gen mục tiêu. Kết quả cho thấy các giá trị Ct thu được bằng sản phẩm mới trong cả quy trình chuẩn và quy trình nhanh đều có mối tương quan mạnh và sản phẩm mới có thể đạt được kết quả tốt khi sử dụng quy trình nhanh.

Nhân vật5. Sau khi hệ thống phản ứng được chuẩn bị xong, nó có thể ổn định ở nhiệt độ phòng trong 24 giờ.

Sử dụng các gen khác nhau từ chuột, tế bào 293 của người và Arabidopsis thaliana làm mục tiêu, sau khi chuẩn bị hệ thống phản ứng, hệ thống được đặt trong bóng tối ở các nhiệt độ khác nhau trong 24 giờ trước khi phát hiện. So với quá trình xử lý ngay lập tức, sự khác biệt về phát hiện đối với các gen khác nhau không vượt quá 0,5 Ct, cho thấy rằng kết quả ổn định cũng có thể đạt được với các hoạt động kéo dài.

Tài liệu:

Hướng dẫn sử dụng

11189_Thủ công_Phiên bản EN20241218.pdf

Storage

This product should be stored at -25~-15℃ for 18 months.

FAQ

Please refer to the "YiSheng Biotechnology YiSheng Biotechnology Dye Method Fluorescence Quantitative PCR Mix Selection Table" for details. Click here to learn more and help you choose the appropriate reagents.
For molecular enzyme reagents, simply invert and mix them together, then perform a gentle centrifugation. It is not recommended to vigorously shake to mix them.
Refer to the manual. Ultimately, it is necessary to ensure that after being mixed with the template, the volume is exactly 1×. For example, for 20 μL of cDNA stock solution, add 180 μL of sterile ultrapure water to dilute it 10 times, resulting in 200 μL of diluted template. Take 90 μL of the diluted template and add 10 μL of 10× Dilution Buffer, mix well, and then use it. You can choose not to do this, but it will not affect the result.
You can choose to use the cDNA stock solution or dilute it. Just make sure that the Ct value of the gene you want falls within the range of 15 to 30. Generally, for every 10-fold dilution of cDNA, the Ct value increases by 3.3.
Store in a dark place and the reaction system must not be left open. These two points are essential. It can be placed in a 4℃ refrigerator or at room temperature for 24 hours. Before using, gently shake and centrifuge the sample before loading it onto the instrument. Before loading, carefully check if the tubes or plates have been contaminated.
When designing primers, it is best to cross introns. The design method can refer to "Enjoyable! A single article to understand qPCR primer design, a must-have skill for experimental experts!" Also, validated primers can be selected. The selection method can refer to "Where to find ready-made qPCR primer sequences?"
The possible reasons are as follows:
1. The instrument has not been calibrated for a long time or it is aging. Usually, the instrument needs to be calibrated once a year. It is necessary to have an instrument engineer perform the calibration or replace the aging components.
2. A 10 μL reaction system was used. The normal system is a 20 μL system. Using half of the normal system would result in an excessively low total concentration of Rox, increasing the probability of BadRox occurrence. It is recommended to conduct the experiment using the 20 μL system.
The specificity of qPCR products can usually be determined through the melting curve. If it is still necessary to determine the products through gel electrophoresis, the qPCR product can undergo electrophoresis. Electrophoresis requires Loading Buffer, and the product cannot be directly loaded for electrophoresis.
1. Confirm whether the signal acquisition function is enabled in the program. If a two-step method is used, the signal acquisition should be set during the annealing extension stage.
2.Is the length of the product too long? If the length of the product is set to 500bp or more, this situation may occur. It is recommended that during primer design, the length of the product be controlled within the range of 80-300bp.
3. Are the primers inappropriate? If the primers are not designed correctly, they need to be redesigned. If the primers are correctly designed but seem to be degraded, PAGE electrophoresis can be used to check the integrity of the primers.
4. Template degradation: Prepare the template anew and repeat the experiment.
The analysis is conducted by observing the melting curve. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC does not overlap with that of the corresponding gene, and the TM value of NTC is smaller than that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is a primer dimer. If the melting curve peak shape of the corresponding gene is a single peak, the collection of the signal of the related gene will not be affected. The melting curve shows that the melting peak shape of NTC overlaps with that of the corresponding gene. In this case, the product corresponding to NTC is likely to be the product of the corresponding gene. The system has been contaminated. We need to check one by one whether the water, primers, or reagents have been contaminated. If none of them have been contaminated, it might be aerosol contamination. Based on the obtained amplification data, the ΔCT value is calculated to determine whether the contamination has a significant impact on the system. If ΔCT ≥ 5, it indicates that the contamination has a minor effect and can be ignored.
It indicates the presence of genomic DNA contamination. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genome for RNA extraction or during reverse transcription by adding a step to remove the genome. Alternatively, when designing the primers, a design across introns should be adopted.
1. If the CT value is less than 30, but the repeatability is very poor, what should we do? Improve the accuracy of sample addition. Avoid adding small volumes and reduce the error of addition. This can be achieved by preparing a large sample system, for example, mixing primers, water, and qPCR mix into a large system or using the method of mixing primers and water into a large system. The large system needs to be mixed evenly. Improve the accuracy of the pipette's aspiration. Pipettes usually need to be calibrated regularly, once a year.
2. What if CT is ≥ 30 but the repeatability is very poor? At this point, due to the low abundance of the effective template, the randomness of collisions between the template and the primers increases, thereby causing a greater difference between the replicons. It is recommended to try adding 2-3 replicons, and then eliminate the data with large differences for data analysis.
The overlapping peaks in the melting curve are located to the left of the main peak. This might be a situation caused by primer dimerization. One possible solution could be to increase the annealing temperature, reduce the primer concentration, or redesign the primers. The overlapping peaks in the melting curve are located to the right of the main peak. a. It is possible that the non-specific amplification occurred due to poor specificity of the primers. The primers need to be redesigned. b. It is possible that the template DNA was contaminated with genomic DNA. It is recommended to use an RNA extraction kit that removes the genomic DNA for RNA extraction, or to add a step of removing the genomic DNA during reverse transcription to reprepare the cDNA template.

Citations

Documents

Applications

Bạn cũng có thể thích

Cuộc điều tra

Câu hỏi thường gặp

Sản phẩm chỉ dành cho mục đích nghiên cứu và không dùng để điều trị hoặc chẩn đoán ở người hoặc động vật. Sản phẩm và nội dung được bảo vệ bởi các bằng sáng chế, nhãn hiệu và bản quyền thuộc sở hữu của Yeasen Công nghệ sinh học. Biểu tượng nhãn hiệu chỉ ra quốc gia xuất xứ, không nhất thiết phải đăng ký ở tất cả các khu vực.

Một số ứng dụng có thể yêu cầu thêm quyền sở hữu trí tuệ của bên thứ ba.

Yeasen dành riêng cho khoa học đạo đức, tin rằng nghiên cứu của chúng tôi phải giải quyết các vấn đề quan trọng đồng thời đảm bảo các tiêu chuẩn về an toàn và đạo đức.