----Temiz Arka Plan, Sabit Bant Desenleri, Kesin Boyutlar
DNA Marker'ları, farklı moleküler ağırlıklara sahip DNA parçalarının bir kombinasyonudur. Birincil kullanımları, DNA moleküllerini ayırmak için agar jel elektroforezinde örnek DNA ile birlikte göç etmektir. Örnek bantlarının boyutunu ve parlaklığını DNA Marker'ınkilerle karşılaştırarak, çözeltideki örnek DNA'nın moleküler ağırlığını ve konsantrasyonunu kabaca tahmin edebilirsiniz. YEASEN DNA Marker'ları 100 bp'den 15 kb'ye kadar moleküler ağırlık aralığını kapsayarak çoğu deneyin ihtiyacını karşılar.
Ürün Özellikleri
- Güçlü stabilite, oda sıcaklığında 3-6 ay saklanabilir;
- Temiz arka plan, istikrarlı bant desenleri ve hassas boyutlar;
- Kolay konumlandırma ve yarı-kantitatif analiz için bilinen konsantrasyonlara sahip referans bantları içerir;
- Doğrudan elektroforez için yükleme tamponu içerir, kullanışlı ve hızlıdır;
- Örnek yükleme için 5× yükleme tamponuyla birlikte gelir.
Elektroforez Diyagramı
Dikkat Edilmesi Gereken Noktalar
- Saklama Yöntemi: Oda sıcaklığında 3 ila 6 ay; daha uzun süreler için 4°C veya -20°C'de saklayın.
- DNA Marker, agar jel elektroforezinde DNA bantlarının analizi için uygundur ve poliakrilamid jel elektroforezinde kullanılması önerilmez.
- Jel konsantrasyonunun ve tampon çözeltisinin seçimi:
| Agaroz Konsantrasyonu | Etkili Ayırma Aralığı (bp) | Önerilen Arabellek |
| %0,5 | 2.000-50.000 | 1×TAE |
| 0,8% | 800-10.000 | 1×TAE |
| 1,0% | 400-8.000 | 1×TAE |
| %1,2 | 300-7.000 | 1×TAE |
| %1,5 | 200-3.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 2.0% | 100-2.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 3.0% | 25-1.000 | 0,5×TBE |
【Not】: Büyük parçalar için düşük konsantrasyonlu bir jel seçin ve elektroforez için bir TAE tampon sistemi kullanın; küçük parçalar için yüksek konsantrasyonlu bir jel seçin ve elektroforez için bir TBE tampon sistemi kullanın.
- Nükleik Asit Boyalarının Seçimi:
EB (Etidyum Bromür), agaroz ve poliakrilamid jellerdeki nükleik asitleri gözlemlemek için kullanılabilen, maksimum uyarım dalga boyu 302 nm olan oldukça hassas bir floresan boyadır. EB, nükleik asitlerdeki bazlarla etkileşime girer ve toksik olduğu bilinmektedir.
YeaRed (Kat#10202ES76) ve YeaGreen (Kat#10204ES76), hücre zarlarını delerek hücrelere giremeyen, kolayca uçucu veya süblim olmayan ve bu nedenle insanlar tarafından solunmayan, benzersiz yağlı moleküler yapıya sahip yeni toksik olmayan nükleik asit boyalarıdır ve deneycinin güvenliğini sağlar.Ames test sonuçları ayrıca YeaRed ve YeaGreen'in jel boyama konsantrasyonlarında mutajeniteye sahip olmadığını ve bu sayede yüksek oranda kanserojen EB'ye güvenli ve toksik olmayan bir alternatif olduğunu göstermektedir. Ayrıca YeaRed, EB ile aynı spektral özelliklere sahiptir, bu nedenle mevcut görüntüleme sistemini değiştirmeden EB'nin yerini mükemmel bir şekilde alabilir.
Soru & Cevap
S1: DNA Marker'ın yüksek molekül ağırlıklı bantları neden sürükleniyor ve iyi ayrılmıyor?
A1: Nükleik asit boyası DNA Marker'ına yeterince bağlanmaz. Yüksek moleküler ağırlıklı bantlar daha fazla nükleik asit boyası gerektirdiğinden, boya doymamışsa yüksek moleküler ağırlıklı bantlar göç etkilerine daha duyarlıdır ve bu da sürüklenmeye ve zayıf ayrılmaya yol açar. Kullanılan DNA Marker miktarının azaltılması (5 kat su ile seyreltilebilir ve ardından 8-10 μL yüklenebilir) veya nükleik asit boyasının konsantrasyonunun artırılması önerilir.
S2: DNA için neden bantlar yok veya zayıf bantlar var?
A2:
- Yetersiz DNA yüklemesi, yüklenen miktarı artırın;
- Jelin içindeki DNA bandı tükendi;
- DNA bandı izleme boyası tarafından gizlenmiştir;
- Jel içerisine nükleik asit boyası eklenmedi;
- Agaroz jel uzun süre bekletilmişse hemen hazırlanıp kullanılması önerilir.
S3: DNA Marker bantları neden dağınıktır?
A3:
- DNA'nın kısmi bozulması, saklama koşullarının çok sıcak olup olmadığını kontrol edin;
- Elektroforez sırasında voltaj çok düşük olduğundan DNA bantlarının dağılmasına neden olur. Jelin 110V-130'da çalıştırılması önerilir V 45 dakikadan fazla;
- Agaroz jelin konsantrasyonu uygun değilse, kılavuzda önerilen jel konsantrasyonuna göre hazırlayın;
- Agar jelin kalitesi düşük olduğundan yenisinin hazırlanması önerilir.
S4: Örnek bantları DNA Marker bantlarına kıyasla neden farklı boyutlarda görünüyor?
A4:
- DNA göçü yalnızca gerçek boyutla değil, aynı zamanda proteinlerle, iyon durumuyla, DNA yapısıyla, jelle ve diğer faktörlerle de ilişkilidir. Nükleik asitlerin elektroforetik göç oranı DNA/boya oranıyla ilişkilidir ve nükleik asit boyası miktarı yetersiz olduğunda daha büyük göç oranı hatalarına yol açabilir;
- Numunede yüksek konsantrasyonda tuz iyonları bulunması durumunda da önemli göç hataları meydana gelebilir;
- Yüklenen örnek miktarı DNA Marker bantlarının miktarından önemli ölçüde farklıysa veya hacimler önemli ölçüde farklıysa, bu da daha büyük göç hatalarına neden olabilir.
Sipariş Bilgileri
| Ürün Odaklılık | Ürün Adı | Ürün Numarası | Özellikler |
| DNA İşaretleyicisi | GoldBand DL2000 DNA İşaretleyicisi | 10501ES60/80 | 100 T/10×100 T |
| GoldBand DL5000 DNA İşaretleyicisi | 10504ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| GoldBand 100bp DNA Merdiveni | 10507ES60/80 | 100 T/10×100 T | |
| GoldBand 1 kb DNA Merdiveni | 10510ES60/80 | 100 T/10×100 T |