Mikoplazma Tespiti, Önlenmesi ve Temizlenmesi - Hepsi Tek Adımda!
Mikoplazma
Mikoplazma olarak da bilinen mikoplazma, 0,1 ila 0,3 μm çapında, bugüne kadar keşfedilen en küçük ve en basit prokaryottur. Filtrelerden geçebilir ve küresel, çubuk şeklinde, filamentli ve dallı gibi çeşitli şekillerde görünerek yüksek pleomorfizm sergiler. Laboratuvarlarda ve biyofarmasötik üretiminde, hücre kültürleri mikoplazma kontaminasyonuna eğilimlidir. Literatüre göre, depolanan hücre hatlarında mikoplazma kontaminasyonu insidansı yaklaşık %15-%35'tir ve biyofarmasötik endüstrisinde %0,44-%6,70 arasında değişmektedir [1].
Şekil 1: Mikoplazmanın Morfolojisi
Mikoplazma Kontaminasyonunun Etkisi
Bakteriyel ve fungal kontaminasyonu tespit etmek, önlemek ve ortadan kaldırmak nispeten kolaydır, ancak mikoplazma kontaminasyonunu fark etmek zordur. 10^7-10^9 CFU/ml kadar yüksek büyüme yoğunluklarında bile, belirgin bir kontaminasyon belirtisi (bulanıklık veya pH değişiklikleri gibi) olmayabilir. Mikoplazma kontaminasyonu hücrelerde çeşitli değişikliklere yol açabilir (bkz. Şekil 2).
Şekil 2: Mikoplazma Kontaminasyonundan Sonra Hücre Durumlarındaki Değişiklikler
Mikoplazma Tespiti için Uygulama Senaryoları
Mikoplazma Kontaminasyonunun Tipik Kaynakları
- Hücreler arası çapraz bulaşma;
- Çalışma ortamının veya deney ekipmanının kirlenmesi;
- Deneycinin yetersiz aseptik tekniği;
- Kültür ortamının veya diğer reaktiflerin kontaminasyonu;
- Hücre hazırlanmasında kullanılan orijinal doku veya organın kontaminasyonu.
Hücre Kültürleri Mikoplazma Kontaminasyonuyla Karşılaştığında Ne Yapılmalıdır?
Şekil 3: Mikoplazma Kontaminasyonuna Yönelik Toplam Çözüm
Hücrelerdeki Mikoplazma Kontaminasyonuna Karşı Üçlü Çözüm
1. Mikoplazma Tespiti
Tek Adımlı İzotermal Mikoplazma Tespiti:
Yeasen'in tek adımlı izotermal mikoplazma tespit reaktifi, benzersiz izotermal amplifikasyon teknolojisini kullanarak daha güçlü renk ayrımı sunar -mavi-mordan (negatif) gök mavisine (pozitif)- görsel tanımlamayı kolaylaştırır. Yanlış pozitifleri ortadan kaldırmak için anti-kontaminasyon bileşenleri içerir.
Şekil 4: Tek Adımlı Mikoplazma Tespiti İşlem Süreci
PCR Tabanlı Mikoplazma Tespiti:
Yeasen'in PCR mikoplazma tespit yöntemi, tek adımlı PCR'den, yuvalanmış PCR amplifikasyonu için mikoplazmanın 16S ve 23S korunan bölgelerini hedef alarak bir yerine üç çift primer kullanarak farklılık gösterir. Bu, tek bir mikoplazma kopyası kadar düşük bir seviyede tespit ederek, özgül olmayanlığı azaltırken duyarlılığı önemli ölçüde artırır.
Şekil 5: Farklı Mikoplazma Konsantrasyonlarına Sahip Örneklerin PCR Amplifikasyonunun Jel Elektroforez Görüntüsü
Şekil 6: Farklı Mikoplazma Konsantrasyonlarına Sahip Örneklerin PCR Amplifikasyonunun Jel Elektroforez Görüntüsü
Tablo 1: Yeasen'in Tek Adımlı İzotermal Mikoplazma Tespit Reaktifi ile Tespit Edilebilen Mikoplazma Türleri
Not: Mavi bölüm hem tek adımlı izotermal tespit hem de PCR yöntemleriyle tespit edilebilen mikoplazma tiplerini göstermektedir.
2. MycAway Mikoplazma Eliminasyon Reaktifi (1000×)
MycAway Mikoplazma Eliminasyon Reaktifi (1000×), hücrelere zarar vermeden mikoplazma büyümesi için gerekli olan DNA ve temel protein sentezini inhibe ederek mikoplazmayı etkili bir şekilde ortadan kaldıran karma bir formüldür. Hücrelerinizi maksimum düzeyde kurtarır ve mikoplazma kontaminasyonundan kaynaklanan kayıpları azaltır.
Şekil 7: Hücre Eliminasyon Etkisinin Gösterimi
Mikoplazma Eliminasyon Reaktifinin Özellikleri:
- Düşük Toksisite: Minimum sitotoksisite, sonraki hücre deneylerini etkilemez hücre canlılığı testi ve transfeksiyon gibi;
- Yüksek Stabilite: -20°C'de uzun süre saklanabilir ve etkinliği korunur;
- Kullanımı Kolay: Ürünü mikoplazma ile kontamine olmuş kültür ortamına ekleyin ve inkübe edin;
- Hızlı Etkili: Sadece 3 gün gibi kısa bir sürede gözle görülür sonuçlar;
- Geniş Spektrum: Laboratuvar mikoplazma türlerinin çoğuna karşı etkilidir.
Şekil 8: Mikoplazma Eliminasyon Reaktifinin Sitotoksisite Test Diyagramı
3. Mikoplazma Önleme
Ürün Bilgi
| kategori | Ürün Adı | Katalog No. | Özellikler |
|
Tespit | 40612ES25/60 | 25/100T | |
| MycAway™ Mikoplazma Gerçek Zamanlı qPCR Tespit Kiti Sıcak | 40618ES25/60 | 25/100T | |
| 40601ES10/20 | 10/20 denemeleri | ||
|
Kaldırma | MycAway™ Sprey (Kullanıma hazır) | 40605ES02/03 | 1/2×500 mL |
| 40607ES03/08 | 1/5×1 mL | ||
|
Önleme | 40608ES03/08 | 1/5×1 mL | |
| 40609ES60 | 100 ml | ||
| 40610ES60 | 100 ml |