คำอธิบายพื้นหลัง

การฟอกโปรตีนเป็นกระบวนการแยกโปรตีนเป้าหมายออกจากโปรตีนทั้งหมดในตัวอย่างการทดลองโดยยังคงรักษากิจกรรมทางชีวภาพและความสมบูรณ์ทางเคมีของโปรตีนเป้าหมายไว้ ในระหว่างการสร้างเวกเตอร์ นอกเหนือจากองค์ประกอบการแสดงออกที่จำเป็นบางอย่างแล้ว ยังจำเป็นต้องพิจารณาการเพิ่มประสิทธิภาพโคดอนและการเลือกแท็กด้วย การเลือกแท็กที่เหมาะสมไม่เพียงแต่มีประโยชน์ต่อการฟอกโปรตีนและส่งเสริมการละลายของโปรตีนเท่านั้น แต่ยังไม่ควรส่งผลกระทบต่อโครงสร้างและการทำงานของโปรตีนและการใช้งานปลายทางอีกด้วย หัวข้อนี้มุ่งเน้นที่การแนะนำแท็ก His และ GST

ตารางที่ 1. การแนะนำแท็ก GST ของเขาและ GST

แท็ก	ขนาด kDa	ลำดับ	ความบริสุทธิ์	ความสามารถในการละลาย	การลบแท็ก	เอ็นไซม์แยกแท็ก
ของเขา	~0.84	ฮึๆๆ	-	-	ไม่จำเป็น	TEV โปรตีเอส
ภาษีมูลค่าเพิ่ม	26	ประกอบด้วย 211 กรดอะมิโน	-	-	ที่จำเป็น	3C โปรตีเอส/พีเอสพี

การทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนแท็กของเขา

เรซินอะกาโรส HisSep Ni-NTA มีพื้นฐานมาจากเจลอะกาโรสที่มีการเชื่อมโยงขวางสูงเป็นเมทริกซ์ ซึ่งจับคู่ทางเคมีกับกรดไนไตรโลไตรอะซิติกที่ประสานงานกันแบบเทตระ (NTA) เป็นลิแกนด์ และหลังจากการคีเลตไอออนนิกเกิล (Ni²⁺) มันสร้างโครงสร้างแปดด้านที่เสถียรมากโดยมีไอออนของนิกเกิลอยู่ตรงกลางของแปดด้าน โครงสร้างนี้สามารถปกป้องไอออนของนิกเกิลจากการโจมตีของโมเลกุลขนาดเล็กได้ เมื่อเปรียบเทียบกับเรซิน Ni-IDA แล้ว มันมีเสถียรภาพมากกว่าและสามารถทนต่อความเข้มข้นบางอย่างของตัวรีดักชัน ตัวแทนการเสื่อมสภาพ หรือตัวแทนการจับคู่ภายใต้สภาวะที่รุนแรงได้ เมื่อเปรียบเทียบกับเรซิน Ni-TED มันมีความสามารถในการดูดซับสำหรับโปรตีนเป้าหมายที่ใหญ่กว่า มันได้กลายเป็นหนึ่งในเรซินที่ขาดไม่ได้สำหรับการทำให้โปรตีนที่มีแท็ก His บริสุทธิ์ในห้องปฏิบัติการ

รูปที่ 1 แผนภาพหลักการผลิตภัณฑ์เรซินฮิส

ตารางที่ 2. Yeasen คู่มือการเลือกผลิตภัณฑ์ทำความสะอาดร่างกาย

หมายเลขสินค้า	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
ชื่อสินค้า	เรซินอะกาโรส Ni-NTA HisSep	HisSep Ni-NTA อะกาโรส เรซิน 6FF	คอลัมน์โครมาโตกราฟี HisSep Ni-NTA 6FF, 5 มล. / 1 ​​มล	ลูกปัดแม็กบีด Ni-NTA ของ HisSep
เมทริกซ์	เจลอะกาโรส 6% แบบเชื่อมขวาง	เจลอะกาโรส 6% ที่มีการเชื่อมโยงสูง	เจลอะกาโรส 6% ที่มีการเชื่อมโยงสูง	ไมโครสเฟียร์แม่เหล็กอะกาโรส
ความต้านทานต่อแรงดัน	0.1 เมกะปาสคาล 1 บาร์	0.3 เมกะปาสคาล 3 บาร์	0.3 เมกะปาสคาล 3 บาร์	ไม่มีข้อมูล
ความจุ	＞40 มก. 6×โปรตีนที่ติดแท็กฮิส/มล. เมทริกซ์	＞40 มก. 6×โปรตีนที่ติดแท็กฮิส/มล. เมทริกซ์		> 40 โปรตีนที่ติดแท็ก His 6 มก./มล. เม็ดแม่เหล็ก
คำแนะนำในการชำระล้าง	เมทริกซ์ ด้วยความต้านทานแรงดันปานกลาง เหมาะกับวิธีการฟักไข่ คอลัมน์แรงโน้มถ่วงสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ขนาดเล็ก	เมทริกซ์ที่มีความต้านทานแรงดันสูง สามารถใช้สำหรับการฟอกโปรตีนในระดับอุตสาหกรรมขนาดใหญ่ด้วยเครื่องมือฟอกโปรตีน		การฟอกโปรตีนที่รวดเร็วและสะดวกสบายผ่านการแยกด้วยแม่เหล็ก
ความอดทน	ยูเรีย 8 M, กรดไฮโดรคลอริก 6 M, DTT 0.5-1 mM, EDTA 1 mM เป็นต้น
แอปพลิเคชัน	การฟอกโปรตีนที่ติดแท็ก His เป็นตัวเลือกแรก โหลดสูง ความคลาดเคลื่อนเฉลี่ย เหมาะเป็นพิเศษสำหรับระบบฟอกการแสดงออกของโปรคาริโอต

ภาคผนวก: คุณสมบัติผลิตภัณฑ์ HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES)

1. เมื่อเทียบกับคอลัมน์และเรซินที่บรรจุไว้ล่วงหน้าแบบดั้งเดิมแล้ว ไม่จำเป็นต้องทำการปั่นตัวอย่างหลายครั้งและควบคุมอัตราการไหลของตัวอย่าง จึงช่วยลดเวลาในการทำให้บริสุทธิ์ได้อย่างมาก
2. การฟอกเพียงขั้นตอนเดียวสามารถบรรลุความบริสุทธิ์มากกว่า 95% ของโปรตีนเป้าหมาย
3. ผลผลิตโปรตีนเป้าหมายสูง: ผลผลิตสามารถเข้าถึง 70-80%
4. สามารถนำมาใช้ซ้ำได้ถึง 5 ครั้ง.
5. ปรับความเข้มข้นและปริมาณโปรตีนเป้าหมายได้อย่างง่ายดาย
6. สูญเสียโปรตีนเพียงเล็กน้อย และไม่มีความเสี่ยงต่อการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างหรือการตกตะกอนของโปรตีน

สื่อการทำให้บริสุทธิ์ด้วยความสัมพันธ์ของโปรตีนแท็ก GST

โครมาโทกราฟีแบบจับกับโปรตีนแท็ก GST ใช้การจับกับโควาเลนต์ระหว่างโปรตีนฟิวชัน GST กับกลูตาไธโอนที่ตรึงไว้ (GSH) ผ่านพันธะกำมะถัน และทำให้บริสุทธิ์ตามหลักการของการชะด้วยการแลกเปลี่ยน GSH ในการทำให้บริสุทธิ์นี้ กลูตาไธโอนจะถูกผสมกับแขนของเจลผ่านพันธะกำมะถัน จากนั้นแรงกระทำเฉพาะระหว่างกลูตาไธโอนและกลูตาไธโอน S-transferase (เช่น GST-tag) จะถูกใช้เพื่อทำให้โปรตีนฟิวชันที่ติดแท็ก GST รวมกับกลูตาไธโอนแขนบนเจล จึงแยกโปรตีนที่ติดฉลากออกจากโปรตีนอื่น กลูตาไธโอนมักจะมีรูปแบบออกซิไดซ์ GSSG และ GSH รูปแบบรีดิวซ์ เมื่อเราใช้การชะด้วย GSH GSH จะแข่งขันกับกลูตาไธโอนของเจลเพื่อรวมกับโปรตีนฟิวชัน จึงชะโปรตีนเป้าหมายออกไป

GSTSep Glutathione Agarose Resin เป็นเรซินสำหรับทำโปรตีนบริสุทธิ์แท็ก GST ซึ่งผลิตขึ้นโดยผสมกลูตาไธโอนที่ลดลงกับเจลอะกาโรส 6% เข้าด้วยกันอย่างโคเวเลนต์ทางเคมีเป็นเมทริกซ์ผ่านแขน 12 อะตอม การออกแบบนี้ช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพในการทำโปรตีนบริสุทธิ์ของเรซินได้อย่างมาก ทำให้สามารถบรรจุโปรตีนฟิวชัน GST ได้มากกว่า 20 มก. ต่อมิลลิลิตรของตัวกลาง ผลิตภัณฑ์นี้มีความจำเพาะและคุ้มต้นทุนดี และสามารถใช้ทำโปรตีน S-transferase กลูตาไธโอน โปรตีนที่ขึ้นอยู่กับกลูตาไธโอน และอนุพันธ์รีคอมบิแนนท์กลูตาไธโอนได้ในขั้นตอนเดียว

ตารางที่ 3. Yeasen คู่มือการเลือกผลิตภัณฑ์ทำความสะอาด GST

หมายเลขสินค้า	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
ชื่อสินค้า	เรซินกลูตาไธโอนอะกาโรส GSTsep	GSTSep กลูตาไธโอนอะกาโรสเรซิน 4FF	คอลัมน์โครมาโตกราฟี Glutathione 4FF GSTSep 1 มล. / 5 มล.	GSTSep กลูตาไธโอน แม็กบีดส์
เมทริกซ์	เจลอะกาโรส 6% แบบเชื่อมขวาง	เจลอะกาโรส 4% ที่มีการเชื่อมโยงสูง	เจลอะกาโรส 4% ที่มีการเชื่อมโยงสูง	ไมโครสเฟียร์แม่เหล็กอะกาโรส
ความต้านทานต่อแรงดัน	0.1 เมกะปาสคาล 1 บาร์	0.3 เมกะปาสคาล 3 บาร์	0.3 เมกะปาสคาล 3 บาร์	ไม่มีข้อมูล
ความจุ	เมทริกซ์โปรตีน GST มากกว่า 20 มก. (40 kDa) ต่อมล.	โปรตีน GST มากกว่า 10 มก. (40 kDa) ต่อเมทริกซ์มล.		โปรตีนฟิวชันแท็ก GST 5-10 มก. ต่อเม็ดแม่เหล็ก 1 มล.
แอปพลิเคชัน	โหลดสูง เมทริกซ์ ด้วยความต้านทานแรงดันปานกลาง เหมาะสำหรับวิธีการฟักไข่ คอลัมน์แรงโน้มถ่วงสำหรับการฟอกอากาศขนาดเล็ก แนะนำสำหรับลูกค้าในระดับห้องปฏิบัติการ	การใช้งาน โหลดต่ำ ต้านทานแรงดันเมทริกซ์สูง สามารถใช้สำหรับการฟอกโปรตีนขนาดใหญ่ในอุตสาหกรรมด้วยเครื่องมือฟอกโปรตีน ขยายขนาดได้ง่ายขึ้น		การกรองโปรตีนด้วยโหลดต่ำสุด รวดเร็วและสะดวกสบายผ่านการแยกด้วยแม่เหล็ก

ภาคผนวก: GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES) คุณสมบัติผลิตภัณฑ์

1. ทำการแยกโปรตีนเป้าหมายที่มีความบริสุทธิ์สูงโดยตรงจากตัวอย่างทางชีววิทยาด้วยแม่เหล็กในขั้นตอนเดียว ทำให้กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ง่ายขึ้นอย่างมากและเพิ่มประสิทธิภาพในการทำบริสุทธิ์ เหมาะสำหรับการทำให้บริสุทธิ์โปรตีนฟิวชัน GST อย่างสะดวกในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์และภาคอุตสาหกรรม
2. การใช้ลูกปัดแม่เหล็กนี้สำหรับการทดลองแบบดึงลง GST เนื่องจากการแยกแม่เหล็กไม่จำเป็นต้องปั่นเหวี่ยงหลายครั้งและใช้เวลาในการบ่มนาน การทำงานจึงง่ายกว่า เร็วกว่า และอัตโนมัติมากกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับวิธีโครมาโทกราฟีแบบดั้งเดิม

ข้อมูลสินค้า

การวางตำแหน่งผลิตภัณฑ์	ชื่อสินค้า	หมายเลขสินค้า	ข้อมูลจำเพาะ
โปรตีนบริสุทธิ์ของฮิสแท็ก	HisSep Ni-NTA อะกาโรส เรซิน	20502ES10/50/60	10 มล./50 มล./100 มล.
	HisSep Ni-NTA อะกาโรส เรซิ่น 6FF	20503ES10/50/60	10 มล./50 มล./100 มล.
	คอลัมน์โครมาโตกราฟี HisSep Ni-NTA 6FF, 5 มล	20504ES08/25	5มล./5x5มล.
	คอลัมน์โครมาโตกราฟี HisSep Ni-NTA 6FF, 1 มล	20505ES03/08	1 มล./5x1 มล.
	ลูกปัดแม็กบีด Ni-NTA ของ HisSep	20561ES08/25	5มล./25มล.
GST Tag การทำให้บริสุทธิ์โปรตีน	เรซินกลูตาไธโอนอะกาโรส GSTsep	20507ES10/50/60	10 มล./50 มล./100 มล.
	GSTSep กลูตาไธโอนอะกาโรสเรซิน 4FF	20508ES10/50/60	10 มล./50 มล./100 มล.
	คอลัมน์โครมาโตกราฟี GSTSEp กลูตาไธโอน 4FF 1 มล.	20509ES03/08	1 มล./5x1 มล.
	คอลัมน์โครมาโตกราฟี GSTSEp กลูตาไธโอน 4FF ขนาด 5 มล.	20510ES08/25	5มล./5x5มล.
	GSTSep กลูตาไธโอน MagBeads	20561ES08/25	5มล./25มล.