แท็ก แอนติบอดี บทนำ
แอนติบอดีแท็กใช้สำหรับการตรวจจับและการทำให้บริสุทธิ์ของลำดับแท็กบนเวกเตอร์การแสดงออกทางการค้าต่างๆ เพื่อวิเคราะห์และกำหนดระดับการแสดงออกและฟังก์ชันของโปรตีนเป้าหมาย หลักการเบื้องหลังการใช้งานคือปฏิกิริยาแอนติเจน-แอนติบอดี ซึ่งแอนติบอดีแท็กเหล่านี้สามารถจับกับโปรตีนที่หลอมรวมแท็กที่เกี่ยวข้องโดยเฉพาะได้ ต่อไปนี้คือรายการสั้นๆ ของแท็กโปรตีนทั่วไปบางส่วนที่เหมาะสำหรับใช้ร่วมกับแอนติบอดีแท็ก:
ตารางที่ 1 บทนำเกี่ยวกับแท็กโปรตีนต่างๆ
| แท็ก | ลำดับ | คุณสมบัติ | สถานการณ์ที่สามารถนำไปใช้ได้ |
| ธง | DYKDDDDK | 1. มีน้ำหนักโมเลกุลเล็ก ไม่เปลี่ยนฟังก์ชันของโปรตีนฟิวชั่น ชอบน้ำมากกว่าแท็กที่คล้ายกัน 2. ประกอบด้วยไซต์การจดจำเอนเทอโรไคเนส (DDDDK) ซึ่งสะดวกในการกำจัดแท็กเมื่อหลอมรวมที่ปลาย N ของโปรตีนเป้าหมาย | เหมาะสำหรับการทำให้บริสุทธิ์และการตรวจจับโปรตีนฟิวชันระดับการแสดงออกต่ำในระบบการแสดงออกของยูคาริโอต |
| ฮา | ยพยดวปดยา | ได้มาจากตัวกำหนดแอนติเจนบนพื้นผิวเฮแมกกลูตินินของไวรัสไข้หวัดใหญ่ หลีกเลี่ยงการใช้ในการทดลองที่เกี่ยวข้องกับเซลล์ที่เกิดอะพอพโทซิส | เหมาะสำหรับการทำให้บริสุทธิ์และการตรวจจับโปรตีน |
| มายซี | Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu | มาจากโปรโตออนโคยีน Myc ของมนุษย์ หลีกเลี่ยงการใช้ในการทดลองที่เกี่ยวข้องกับเซลล์ของมนุษย์ | โดยทั่วไปไม่ใช้สำหรับการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ เหมาะสำหรับการตรวจจับ |
| ซีรี่ส์ผลิตภัณฑ์ | ซีรีย์เรซินบริสุทธิ์ | ซีรี่ส์ลูกปัดแม่เหล็กภูมิคุ้มกัน | |||||
| หมายเลขสินค้า | 20584ES | 20586ES | 20587ES | 20565ES | 20566ES | 20567ES | 20564ES |
| ชื่อสินค้า | ลูกปัดแม่เหล็กต่อต้าน HA | แอนตี้-MycMagBeads | |||||
| ลิแกนด์ | แอนติบอดีโมโนโคลนอล IgG ของเมาส์คุณภาพสูง | แอนติบอดีโมโนโคลนอลต่อต้าน GFP/Flag/HA/Myc ของเมาส์คุณภาพสูง | |||||
| ความสามารถในการจับโปรตีน | โปรตีนฟิวชันที่มีแท็กธง ≥1.1 มก./มล. เจล โปรตีนฟิวชันที่มีแท็ก HA ≥1.5 มก. ต่อเจลมล. เจลโปรตีนฟิวชันที่มีแท็ก Myc ≥0.9 มก./มล. | ≥0.8 มก. โปรตีนฟิวชันที่มีแท็ก GFP/มก. ลูกปัด โปรตีนฟิวชันที่มีแท็กธง ≥0.6 มก./เม็ดมก. โปรตีนฟิวชันที่มีแท็ก HA ≥0.4 มก. ต่อเม็ดมก. ≥0.5 มก. โปรตีนฟิวชันที่มีแท็ก Myc/มก. ลูกปัด
| |||||
| เมทริกซ์ | เจลอะกาโรสเชื่อมขวาง 4% | ลูกปัดแม่เหล็กชนิดซิลิกา | |||||
| ขนาดอนุภาค | 45-165 ไมโครเมตร | 200 นาโนเมตร | |||||
| ข้อดี | การจับยึดแบบไม่จำเพาะต่ำ ความจุสูง | ความบริสุทธิ์สูง ความจุสูง ความจำเพาะสูง ใช้งานสะดวกด้วยชั้นวางแม่เหล็ก | |||||
| แอปพลิเคชั่นที่แนะนำ | การชำระล้างด้วยความสัมพันธ์ของโปรตีนฟิวชันที่ติดแท็กในทุกขนาด การตกตะกอนภูมิคุ้มกัน (IP) | การตกตะกอนภูมิคุ้มกัน (IP), การตกตะกอนภูมิคุ้มกันร่วม (COIP) | |||||
ข้อมูลการทดสอบ
1.
รูปที่ 1.
M: โปรตีนมาร์กเกอร์ 1: ไลเสทพรีคอลัมน์ของโปรตีน Flag-N, M, C 2: โปรตีนซึมผ่านหลังคอลัมน์ของ Flag-N, M, C 3: การชะ (การชะที่ pH 2.7) 4: การชะ (การชะที่ pH 12)
2.ลูกศรในรูปด้านล่างระบุโปรตีนที่ติดแท็กเป้าหมาย และแถบทั้งสามจากบนลงล่างหลังจากต้มลูกปัดแม่เหล็กโดยตรงคือ BSA โซ่หนักของแอนติบอดี และโซ่เบาของแอนติบอดี
รูป 2. การทำให้บริสุทธิ์โปรตีนที่มีแท็ก Flag ด้วย Anti-Flag MagBeads
1: ไลเสทของ E. coli ที่ประกอบด้วยโปรตีนที่มีแท็ก Flag 10 μL; 2: ของเหลวส่วนบนหลังจากการฟักไลเสทของ E. coli ที่ประกอบด้วยโปรตีนที่มีแท็ก Flag พร้อมลูกปัดแม่เหล็ก 10 μL; 3: การต้มโปรตีนที่มีแท็ก Flag โดยตรงด้วย Anti-Flag MagBeads 10 μL; 4: การต้ม Anti-Flag MagBeads โดยตรง; 5: มาร์กเกอร์
3.
รูป 3. การทำให้บริสุทธิ์โปรตีนที่มีแท็ก GFP ด้วย Anti-GFP MagBeads
1: ไลเสทของ E. coli ที่ประกอบด้วยโปรตีนที่มีแท็ก GFP 10 μL; 2: ของเหลวส่วนบนหลังจากการฟักไลเสทของ E. coli ที่ประกอบด้วยโปรตีนที่มีแท็ก GFP พร้อมลูกปัดแม่เหล็ก 10 μL; 3: การต้มโปรตีนที่มีแท็ก GFP โดยตรงด้วย Anti-GFP MagBeads 10 μL; 4: การต้ม Anti-GFP MagBeads โดยตรง; 5: มาร์กเกอร์
ข้อมูลสินค้า
| ชื่อสินค้า | หมายเลขสินค้า | ข้อมูลจำเพาะ |
| 20584ES03/08/25 | 1 มล./5 มล./25 มล. | |
| 20586ES03/08/25 | 1 มล./5 มล./25 มล. | |
| 20587ES03/08/25 | 1 มล./5 มล./25 มล. | |
| 20565ES03/08 | 1 มล./5 มล. | |
| ลูกปัดแม่เหล็กต่อต้าน HA | 20566ES03/08 | 1 มล./5 มล. |
| ลูกปัดแม่เหล็กป้องกัน Myc | 20567ES03/08 | 1 มล./5 มล. |
| 20564ES03/08 | 1 มล./5 มล. |