ปัจจุบันมีการใช้วิธีการใช้เอนไซม์อย่างแพร่หลายในการดีไกลโคซิเลชัน สำหรับไกลแคนที่เชื่อมกับ N เอนไซม์ที่ใช้กันทั่วไปได้แก่ PNGase F, Endo H และ Endo S

การแนะนำผลิตภัณฑ์

1. พีเอ็นจีเอส เอฟ

พีเอ็นจีเอส เอฟ เป็นวิธีการใช้เอนไซม์ที่มีประสิทธิผลสูงสุดในการกำจัด N-linked เกือบทั้งหมด โอลิโกแซกคาไรด์ในไกลโคโปรตีน ซึ่งสามารถแยกไกลโคโปรตีนแมนโนสสูง ไฮบริด และเชิงซ้อนที่เชื่อมต่อด้วยแอสพาราจีน โดยเฉพาะอย่างยิ่งการกำจัดไกลแคนที่เชื่อมโยงกับ N บริเวณที่แยกคือ: พันธะอะไมด์ระหว่าง N-acetylglucosamine (GlcNAc) ที่อยู่ด้านในสุดและสารตกค้างของแอสพาราจีน ขณะเดียวกันก็แปลงแอสพาราจีนบนโปรตีนหลังจากการไฮโดรไลซิสด้วยเอนไซม์เป็นกรดแอสปาร์ติก

เมื่อฟิวโคส α1-6 อยู่ที่แกน GlcNAc, PNGase F ก็สามารถตัดได้เช่นกัน แต่จะไม่สามารถตัดได้ก็ต่อเมื่อฟิวโคส α1-3 อยู่ที่แกน GlcNAc (พบได้ทั่วไปในไกลโคโปรตีนของพืชและแมลง)

บริษัทของเรามีบริการ ธรรมดา PNGase F (Cat#20407ES)อย่างไรก็ตาม ปฏิกิริยาเอนไซม์ PNGase F แบบเดิมต้องใช้เวลาหลายชั่วโมงในการปลดปล่อย N-glycan ของแอนติบอดี และเนื่องจากความต้องการปลดปล่อยไกลแคน การดีไกลโคซิเลชันที่ไม่สมบูรณ์อาจนำไปสู่ผลลัพธ์ที่ไม่สอดคล้องกัน และการกระจายไกลแคนที่ได้อาจไม่แสดงองค์ประกอบที่ถูกต้องของแอนติบอดีในการรักษา ดังนั้น การได้รับโปรไฟล์ N-glycan ที่แม่นยำโดยเร็วที่สุดจึงมีความสำคัญต่อการติดตามการไกลโคซิเลชันในระหว่างกระบวนการผลิตแอนติบอดี โปรตีนฟิวชันแอนติบอดี และตัวแทนทางชีวภาพอื่นๆ

PNGase F รวดเร็ว (รหัสแมว#20406ES) เป็นรีเอเจนต์รีคอมบิแนนท์ที่ปรับให้เหมาะสมซึ่งสามารถดีไกลโคซิเลตแอนติบอดี อิมมูโนโกลบูลิน โปรตีนฟิวชัน และไกลโคโปรตีนอื่นๆ ได้อย่างรวดเร็วและสมบูรณ์ภายในเวลาเพียงไม่กี่นาที เอนไซม์นี้สามารถกำจัดเอ็น-ไกลแคนทั้งหมดได้อย่างรวดเร็วและโดยไม่ต้องเลือก และสามารถใช้โดยตรงสำหรับการวิเคราะห์โครมาโทกราฟีหรือแมสสเปกโตรเมทรีในภายหลัง

คุณสมบัติผลิตภัณฑ์:

เร็ว: การดีไกลโคซิเลชันอย่างสมบูรณ์และรวดเร็วในเวลาเพียงไม่กี่นาที

ความบริสุทธิ์สูง: ไม่มีโปรตีเอส ปนเปื้อนไกลโคซิเดส ความบริสุทธิ์ ≥95%

ไม่เลือก: กำจัด N-glycan ทั้งหมดอย่างรวดเร็วและโดยไม่ต้องเลือก

ความเข้ากันได้ดี: ใช้โดยตรงสำหรับการวิเคราะห์โครมาโทกราฟีปลายทางหรือการวิเคราะห์สเปกโตรเมตรีมวล

2. เอ็นโด เอช

เอ็นโด เอช เป็นไกลโคซิเดสแบบรีคอมบิแนนท์ที่สามารถแยกโครงสร้างแกนของไคโตไบโอสของแมนโนสสูงและโอลิโกแซกคาไรด์ชนิดไฮบริดบางชนิดใน N-ไกลโคโปรตีน โดยกำจัดแมนโนสสูงที่เชื่อมโยงกับ N ออกจากไกลโคโปรตีน

ปัจจุบันบริษัทของเรานำเสนอยีสต์รีคอมบิแนนท์ที่แสดง Endo H (Cat#20414ES)

3. เอ็นโด เอส

Endo S เป็นไกลโคซิเดสที่มีความจำเพาะสูงซึ่งสามารถแยกน้ำตาลที่เชื่อมกับ N ระหว่างโครงสร้างหลักของไคโตไบโอสของโซ่หนัก IgG ชนิดป่า กิจกรรมของไกลโคซิเดส S ไม่ขึ้นอยู่กับเปปไทด์โดยเคร่งครัด ดังนั้น X จึงเป็นโปรตีน เปปไทด์ แอสปาราจีน หรือโอลิโกแซ็กคาไรด์อิสระได้ ไกลโคซิเดส S จะทำงานโดยไม่คำนึงถึงฟิวโคสอัลฟา 1-6 ที่เป็นแกนหลักหรือเอ็น-อะเซทิลกลูโคซามีนที่แบ่งครึ่งบนพื้นผิว อย่างไรก็ตาม ไกลโคซิเดส S จะไม่ทำงานต่อโอลิโกแซ็กคาไรด์ที่ถูกไซอะลิเลตและดีไซอะลิเลตที่แอนเทนนารีสามหรือสี่แอนเทนนารี

ปัจจุบันบริษัทของเรานำเสนอ E.coli recombinant expressed Endo S(Cat#20413ES)

คำแนะนำในการซื้อ

หมายเลขผลิตภัณฑ์	20406ES	20407ES	20414ES	20413ES
ชื่อสินค้า	เร็ว พีเอ็นจีเอส เอฟ	พีเอ็นจีเอส เอฟ	เอ็นโด เอช	เอ็นโด เอส
แหล่งที่มา	การแสดงออกของยีสต์รีคอมบิแนนท์	การแสดงออกของยีสต์รีคอมบิแนนท์	การแสดงออกของยีสต์รีคอมบิแนนท์	อี.อีโคไล การแสดงออกแบบรีคอมบิแนนท์
กิจกรรมเฉพาะ	ไม่สามารถใช้งานได้	100,000 ยู/มล.	1000000U/มล.	8000 ยู/มก.
สถานที่แยกร่าง	ไกลแคนที่เชื่อมโยง N เกือบทั้งหมด	ไกลแคนที่เชื่อมโยง N เกือบทั้งหมด	ไกลแคนแมนโนสสูงที่เชื่อมโยงกับ N	แตกออกภายในโครงสร้างไดแซ็กคาไรด์แกนกลางของโซ่หนัก IgG
ระยะเวลาการย่อยอาหาร	10 นาที	1-3 ชม.	1-3 ชม.	1 ชม.
ไกลโคซิเลชัน	เหมาะสม	เหมาะสม	เหมาะสม	เหมาะสม
โครงสร้างโปรตีน	เหมาะสม	เหมาะสม	เหมาะสม	เหมาะสม

ข้อมูลการทดสอบ

1.PNGase F รวดเร็ว ทดสอบ

1: Protein MarkerCat#20350ES) 2: Competitor + substrate หรือ antibody 3: Competitor + substrate หรือ antibody

4: Yeasen PNGase F + ซับสเตรตหรือแอนติบอดีอย่างรวดเร็ว 5: Yeasen PNGase F + ซับสเตรตหรือแอนติบอดีอย่างรวดเร็ว 6: สารตั้งต้นหรือแอนติบอดี 7: Yeasen PNGase F 8 ที่รวดเร็ว: คู่แข่ง

2.การทดสอบเอ็นโดเอช

รูปที่ 2. เอ็นโดเอช ผลของการแยกเอนไซม์ (พื้นผิว)

3.การทดสอบเอ็นโดเอส

ข้อมูลสินค้า

ชื่อสินค้า	หมายเลขสินค้า	ข้อมูลจำเพาะ
เร็ว PNGase F (ปราศจากกลีเซอรอล)	20406ES20/50	20 ตัน/50 ตัน
พีเอ็นจีเอส เอฟ	20407ES01/02	15000 ยู /75000 ยู
เอ็นโดะ ชม	20414ES92/97	10000 ยู /50000 ยู
เอ็นโด เอส	20413ES80/90	1000 ยู/5 x 1000 ยู