หลีกเลี่ยงการออกนอกเส้นทาง! โซลูชันแบบครบวงจรสำหรับวัตถุดิบหลักในการก่อสร้างห้องสมุด NGS กำลังจะมาถึง!

รูปที่ 1 กระบวนการสร้างห้องสมุด DNA ทั่วไป (ซ้าย) และกระบวนการสร้างห้องสมุด RNA (ขวา) โดยใช้แพลตฟอร์ม Illumina เป็นตัวอย่าง

การสังเคราะห์การถอดรหัสย้อนกลับเป็นส่วนหลัก ของ RNA-Seq, ใหม่ ประเภทของความสูง ประสิทธิภาพของ reverse transcriptase ซึ่งรวมฟังก์ชันต่างๆ ไว้ด้วยกัน เช่น ความไวสูง สูง ผลผลิต ของ cDNA และความเข้ากันได้กับเทมเพลตของโครงสร้างที่ซับซ้อนเป็นจุดศูนย์กลางของการวิจัย แพลตฟอร์มดัดแปลงเอนไซม์ ZymeEditor™ ของ Yeasen ได้รับผลิตภัณฑ์การถอดรหัสย้อนกลับรอบด้านพร้อมประสิทธิภาพการทำงานที่ได้รับการปรับปรุงอย่างครอบคลุมผ่านการปรับเปลี่ยนทิศทางของ M-MLV สามารถใช้งานได้ในสถานการณ์การใช้งานต่างๆ เช่น RNA-seq, การเรียงลำดับเซลล์เดี่ยว, การโคลน cDNA และการสร้างไลบรารี

รูปที่ 2 ประสิทธิภาพของ 13488ES ที่นำไปใช้ใน RNA-seq

เนื่องจากความยาวการอ่านที่สั้นของแพลตฟอร์มการจัดลำดับ DNA จึงจำเป็นต้องถูกแบ่งส่วนแบบสุ่มก่อนสร้างไลบรารี ในระยะเริ่มแรก การแบ่งส่วนของเอนไซม์เป็นเรื่องน่ากลัวเนื่องจากปัญหาเรื่องความสม่ำเสมอและอคติ Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพ ได้พัฒนาเอนไซม์การแยกส่วนที่มีลักษณะเฉพาะ 2 ชนิด เอนไซม์การแยกส่วนที่ออกฤทธิ์อย่างเข้มข้นที่ทำงานที่อุณหภูมิ 37℃ เป็นเวลา 3-30 นาที และเอนไซม์การแยกส่วนที่ออกฤทธิ์อ่อนๆ ที่ทำงานที่อุณหภูมิ 30℃ เป็นเวลา 10 – 40 นาที. ผลิตภัณฑ์การแตกตัวของเอนไซม์ที่อาศัยการแตกตัวแบบสุ่มกำลังปรับปรุงข้อบกพร่องของตนดีขึ้นเรื่อยๆ ผลิตภัณฑ์เหล่านี้ถูกนำมาผสมผสานกันเป็นผลิตภัณฑ์โมดูลาร์สำหรับการแตกตัวของ DNA การซ่อมแซมส่วนปลาย และส่วนหาง A ซึ่งตอบสนองความต้องการต่างๆ ของตัวอย่างที่แตกต่างกันและประเภทการจัดลำดับที่แตกต่างกัน

รูปที่ 3 ผลกระทบจากการแตกตัวของเอนไซม์แตกตัวของ DNA ที่แตกต่างกัน: เอนไซม์แตกตัวที่ออกฤทธิ์รุนแรง (ซ้าย) และเอนไซม์แตกตัวที่ออกฤทธิ์อ่อน (ขวา)

อัตราการแปลงห้องสมุดเป็นตัวบ่งชี้ที่สำคัญในการประเมินคุณภาพของห้องสมุด อัตราการแปลงห้องสมุดที่สูงในระดับหนึ่งหมายถึงห้องสมุดมีความสมบูรณ์มากขึ้นและมีข้อมูลการเรียงลำดับที่มีความสม่ำเสมอมากขึ้น ลิเกส DNA T4 ทั่วไปมุ่งเน้นที่การปรับให้การเชื่อมต่อมีประสิทธิภาพสูงขึ้น แต่ชิ้นส่วนต่างๆ มีแนวโน้มที่จะเชื่อมต่อด้วยตัวเอง ซึ่งจะลดอัตราการแปลงไลบรารี และส่งผลต่อความสมบูรณ์ของไลบรารีและคุณภาพของการจัดลำดับ การ Yeasen แพลตฟอร์มวิศวกรรมเอนไซม์ ZymeEditor™ ดำเนินการปรับเปลี่ยนทิศทางบน T4 DNA Ligase เพื่อให้ได้กลายพันธุ์ใหม่ เมื่อใช้ร่วมกับบัฟเฟอร์การเชื่อมต่อที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมอย่างระมัดระวัง ผลิตภัณฑ์โมดูลการเชื่อมต่อที่มีเสถียรภาพทางความร้อนสูง และอัตราการเชื่อมต่อด้วยตนเองของชิ้นส่วนต่ำ ได้รับการพัฒนาขึ้น ซึ่งช่วยปรับปรุงอัตราการแปลงไลบรารีได้อย่างมีนัยสำคัญ

รูปที่ 4 การวิเคราะห์เสถียรภาพทางความร้อนและสารตกค้างของตัวเชื่อมของ 12996ES

เอนไซม์ขยาย PCR ทั้งหมดจำเป็นสำหรับวิธีการเตรียมห้องสมุด NGS ดีเอ็นเอโพลีเมอเรสที่มีความเที่ยงตรงสูงส่วนใหญ่มีกิจกรรมโพลีเมอเรส 5'→3' และกิจกรรมเอ็กโซนิวคลีเอส 3'→5' สามารถสังเคราะห์ DNA ได้ในทิศทาง 5'→3' พร้อมทั้งแก้ไขเบสที่ผสมเข้าไปอย่างผิดพลาด ด้วยเหตุนี้ จึงสามารถขยายชิ้นส่วน DNA ได้อย่างรวดเร็วและมีความเที่ยงตรงสูง แต่มีเอนไซม์เพียงไม่กี่ชนิดที่ได้รับการออกแบบเฉพาะสำหรับ NGS ผลิตภัณฑ์ขยายห้องสมุดที่มีประสิทธิภาพ แม่นยำ เฉพาะเจาะจง และสามารถขยายเป้าหมายที่มีขนาดและเนื้อหา GC ต่างกันได้โดยไม่ลำเอียง และยังสามารถผสมไพรเมอร์ไว้ล่วงหน้าได้ด้วย Yeasen เทคโนโลยีชีวภาพได้พัฒนาดีเอ็นเอโพลีเมอเรสที่มีความแม่นยำสูงด้วยการออกแบบที่เป็นเอกลักษณ์และพรีมิกซ์ PCR สตาร์ทแบบฮอตสตาร์ทที่เหมาะสมที่สุด ได้รับการออกแบบมาโดยเฉพาะเพื่อการขยายไลบรารี NGS ที่มีประสิทธิภาพ ความเที่ยงตรงสูง และอคติต่ำ โดยแก้ไขปัญหาของการขยายไลบรารี NGS ที่ซับซ้อน

รูปที่ 5 การวิเคราะห์อัตราความผิดพลาดในการขยายและความเสถียรของ 12980ES

นอกเหนือจากผลิตภัณฑ์โมดูลการสร้างห้องสมุด NGS ซีรีส์ข้างต้นแล้ว เรายังมีผลิตภัณฑ์เอนไซม์ดิบแบบครบวงจรอีกด้วย เพื่อตอบสนองความต้องการผสมผสานของลูกค้าที่แตกต่างกัน Yeasenผลิตภัณฑ์วัตถุดิบการก่อสร้างห้องสมุด NGS ของเราต้องผ่านมาตรฐานการควบคุมคุณภาพจากโรงงานที่เข้มงวด ประสิทธิภาพการผลิตแบบแบตช์ที่เข้มงวด และการควบคุมคุณภาพความเสถียร เพื่อให้คุณสร้างห้องสมุดได้โดยไม่ต้องกังวล

หมวดหมู่สินค้า	ชื่อสินค้า	เลขที่แมว	หมายเหตุ
การสังเคราะห์ cDNA ที่มีประสิทธิภาพ	ไฮแฟร์™ อุลตรารีเวิร์สทรานสคริปเทส (200 U/μL)	14604ES	เอนไซม์ถอดรหัสย้อนกลับ
	ไฮเอฟเอ็นจีเอส™ ชุดสังเคราะห์ ds-cDNA	13488ES	โมดูลการสังเคราะห์ cDNA
ดีเอ็นเอ การแตกกระจาย & การซ่อมแซมปลาย & การแยกส่วน	ไฮฟ์™ สเมอเรส	12907ES	ดีเอ็นเอแฟรกเมนเทส
	โมดูลการแยกส่วน DNA OnePot Pro ของ Hieff NGS™ (การซ่อมแซมปลายสายและการแยกส่วน dA เพิ่มเติม)	12619ES	ดีเอ็นเอ โมดูลการแยกส่วนและการซ่อมแซมปลายและการแยกส่วนท้าย
ซ่อมแซมและบำรุงรักษา	โมดูลการซ่อมแซมปลายท่อ/การต่อ dA แบบรวดเร็ว Hieff NGS®	12608ES	โมดูลการซ่อมแซมปลายสายและส่วนต่อท้าย
การผูกอะแดปเตอร์	ดีเอ็นเอไลเกส Hieff® Fast T4 (400 U/µL)	10299ES	เอนไซม์ไลเกสดีเอ็นเอ T4
การขยายเสียงห้องสมุด	มิกซ์ขยายเสียง Ultima HF 2×	13344ES	เอนไซม์ความเที่ยงตรงสูง