Описание
Tth ДНК-полимераза — термостойкая ДНК-полимераза, обнаруженная у термофильной бактерии. Термус термофильный HB8. В присутствии Mg²⁺ этот фермент проявляет 5′-3′ ДНК-полимеразную активность и 5′-3′ экзонуклеазную активность, но не обладает 3′-5′ экзонуклеазной активностью, что делает его широко применимым для реакций ПЦР-амплификации. В присутствии Mn²⁺ фермент демонстрирует сильную активность обратной транскриптазы при температурах 55-70°C, что делает его пригодным для одностадийных реакций ОТ-ПЦР.
Спецификация
Определение единицы: Одна единица активности (Е) определяется как количество фермента, которое включает 10 нмоль от общего числа нуклеотидов в кислотонерастворимый продукт в течение 30 минут при температуре 74°C, используя активированную ДНК спермы лосося в качестве матрицы/праймера.
Компонент
Нет. | Имя | Размер | |
14607ES72 (250 ЕД) | 14607ES80 (1250 У) | ||
14607-А | Tth ДНК-полимераза (5 ед./мкл) | 50 мкл | 250 мкл |
14607-Б | 5×Tth ОТ-ПЦР Буфер | 1 мл | 4×1,25 мл |
14607-С | 10×Tth ПЦР Буфер (с Mg2+) | 500 мкл | 2×1,25 мл |
14607-Д | 50 мМ Mg(OAc)2 | 250 мкл | 1.25 мл |
14607-Е | Смесь dNTP (по 10 мМ каждого) | 150 мкл | 750 мкл |
Перевозки и хранение
Перевозкис сухим льдом. Хранить в -20°C, срок годности 2 года.
Меры предосторожности
1) Если в буфере при размораживании появляется небольшое количество осадка, это нормальное явление. Перед использованием переверните и тщательно перемешайте.
2) В целях вашей безопасности и здоровья во время работы надевайте лабораторный халат и одноразовые перчатки.
3) Этот продукт предназначен только для исследовательских целей!
Инструкции
Рекомендуемая процедура реакции ПЦР:
1.Подготовка реакционной системы
Имя | Объем (мкл) |
10×Tth ПЦР Буфер (с Mg2+) | 5 |
Tth ДНК-полимераза (5 ед./мкл) | 0,5 |
Смесь dNTP (по 10 мМ каждого) | 1 |
Вверх по течению Праймер 10мкМ | 2 |
Вниз по течению Праймер 10мкМ | 2 |
ДНК-матрица | 50 pg- 1мкг |
ддх2О | к 50 |
[Примечание]: Количество ДНК-полимеразы Tth, восходящих и нисходящих праймеров и смеси dNTP можно регулировать в соответствии с конкретными экспериментальными потребностями.
2. Настройка цикла
Шаги | Темп(ºС) | Время | Циклы |
Предварительная денатурация | 94 | 30 сек-5 мин | 1 |
Денатурация | 94 | 30 сек. |
35
|
Отжиг | 50-70 | 30 сек. | |
Расширение | 72 | 60 сек/кб | |
Окончательное расширение | 72 | 10 мин. | 1 |
[Примечание]: Условия реакции можно корректировать в соответствии с конкретными экспериментальными требованиями.
Рекомендуемая процедура реакции ОТ-ПЦР:
1. Подготовка реакционной системы
Имя | Объем (мкл) |
5×Tth ОТ-ПЦР Буфер | 10 |
Tth ДНК-полимераза (5 ед./мкл) | 1.5 |
50 мМ Mg(OAc)2 | 2.5 |
Смесь dNTP (по 10 мМ каждого) | 1.5 |
Вверх по течению Праймер 10мкМ | 2 |
Вниз по течению Праймер 10мкМ | 2 |
Шаблон РНК | 50 pg- 1мкг |
ддH2O | к 50 |
[Примечание]: Количество ДНК-полимеразы Tth, восходящих и нисходящих праймеров и смеси dNTP можно регулировать в соответствии с конкретными экспериментальными потребностями.
2.Настройка цикла
Шаги | Темп (ºС) | Время | Циклы |
Обратная транскрипция | 55-70 | 30 мин. | 1 |
Предварительноденатурация | 94 | 30 сек-5 мин | 1 |
Денатурация | 94 | 30 сек. |
35
|
Отжиг | 50-70 | 30 сек. | |
Расширение | 72 | 60 сек/кб | |
Окончательное расширение | 72 | 10 мин. | 1 |
[Примечание]: Условия реакции можно корректировать в соответствии с конкретными экспериментальными требованиями.
Оплата и безопасность
Ваша платежная информация обрабатывается надежно. Мы не храним данные кредитной карты и не имеем доступа к информации вашей кредитной карты.
Расследование
Вам также может понравиться
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.