Этот продукт представляет собой РНК-полимеразу бактериофага T7, полученную путем экспрессии рекомбинантного белка в Escherichia coli. Он катализирует 5'→3' синтез РНК на двухцепочечной ДНК из ее промотора T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') и использует NTP в качестве субстратов. ДНК с двухцепочечными линейными тупыми концами или 5'-выступающими концами может использоваться в качестве шаблонов для РНК-полимеразы T7, поэтому линеаризованные плазмиды и продукты ПЦР могут использоваться в качестве шаблонов для in vitro синтез РНК.
Примечание: G* — первое основание транскрипта РНК.
Данный продукт производится в соответствии с правилами GMP и поставляется в жидкой форме.
Особенность
- Синтезировать длинные и короткие транскрипты, РНК может быть получена в количестве 100-200 мкг с 1 мкг ДНК-матрицы
- Более высокая урожайность и простота эксплуатации
- Снижение уровня эндотоксинов
- Проверено на отсутствие эндонуклеаз, экзонуклеаз, РНКаз
Приложение
- Приготовление радиоактивно меченого РНК-зонда
- Генерация РНК для изучения структуры РНК, процессинга и катализа
- Контроль экспрессии с помощью антисмысловой РНК
- синтез мРНК, sgRNA
Спецификация
| Источник | Выражено в кишечная палочка с рекомбинантным геном РНК-полимеразы Т7 |
| Оптимальная температура | 37℃ |
| Буфер хранения | 50 мМ Трис-HCl, 1 мМ ЭДТА, 10 мМ ДТТ, 100 мМ NaCl, 0,1% Тритон X-100, 50% (об./об.) глицерин, pH 7,9 при 25℃ |
| Определение единицы измерения | Количество фермента, необходимое для включения 1 нмоль [3H] GMP в кислотонерастворимый осадок в течение 1 часа при 37°C и pH 8,0 определяется как 1 единица. |
Качество
| Пункты COA | Стандарт |
| Активность | 250-300 ЕД/мкл |
| Белок концентрация | ≥0,5 мг/мл |
| Чистота | ≥95% |
| Эндотоксин | <20 ЕЭ/мг |
| Остаточная протеаза | Отрицательно |
| Остаточная экзонуклеаза | Отрицательно |
| Остаточная никаза | Отрицательно |
| Остаточная РНКаза | Отрицательно |
| Э. белок хозяина кишечной палочки | <50 частей на миллион |
| хозяин E.coli ДНК | <10 фг/ед. |
| Микоплазма ДНК | Отрицательно |
Компоненты
| Номер компонента | Имя | 10625ES10 (10 КУ) | 10625ES60 (100 КУ) | 10625ES86 (2500 KU) | 10625ES99 (100 МЕ) |
| 10625 | T7 РНК-полимераза GMP-класса (250 ед./мкл) | 40 мкл | 400 мкл | 10 мл | 400 мл |
Доставка и хранение
Продукция РНК-полимеразы Т7, соответствующая требованиям GMP, поставляется с сухим льдом и может храниться при температуре от -15℃ до -25℃ в течение одного года.
Цифры
Рисунок 1. Стандартная РНК была синтезирована in vitro с использованием набора для синтеза РНК Т7.
Реакция инкубировалась в ПЦР-приборе при 37℃ в течение 2 часов, а затем очищалась магнитными шариками (Cat#12602). Результат выхода анализировался спектрофотометром NanoDrop, как показано на рисунке 1.
Рисунки 2. Демонстрация транскрипции РНК различной длины с помощью набора T7 соответственно на электрофоретограмме (рисунки 2A), диаграмме капиллярного электрофореза (рисунки 2B) и хроматограмме (рисунки 2C)
Рисунок 3. Синтез кэпированной РНК in vitro.
Реакция инкубировалась в ПЦР-приборе при 37℃ в течение 2 часов, а затем очищалась магнитными шариками (Cat#12602). Результат выхода анализировался спектрофотометром NanoDrop, как показано на рисунке 3A. Результат целостности анализировался капиллярным электрофорезом, как показано на рисунке 3B.
10625_Руководство_HB221111_EN.pdf
Цитаты и ссылки:
Storage
FAQ
1)ptimizing the sequence immediately upstream of the template's 3' end;
2)Controlling the IVT yield, as excessively high transcription levels tend to increase the frequency of self-extension events.
Citations
Documents
Вам также может понравиться
Расследование
Часто задаваемые вопросы
Продукт предназначен только для исследовательских целей и не предназначен для терапевтического или диагностического использования на людях или животных. Продукты и содержимое защищены патентами, товарными знаками и авторскими правами, принадлежащими Yeasen Biotechnology. Символы товарных знаков указывают на страну происхождения, а не обязательно на регистрацию во всех регионах.
Для некоторых приложений могут потребоваться дополнительные права интеллектуальной собственности третьих лиц.
Йесен привержен этической науке, полагая, что наши исследования должны затрагивать важнейшие вопросы, обеспечивая при этом безопасность и соблюдение этических стандартов.