Beschrijving
Hifair™ Super Reverse Transcriptase is een reverse transcriptase van de volgende generatie, welke was ikNgemanipuleerd van M-MLV. Dit enzym mist RNase H-activiteit en vertoont een aanzienlijk verbeterde thermische stabiliteit, waarbij reactietemperaturen tot 70°C worden getolereerd. Het is zeer geschikt voor efficiënte reverse transcriptie van RNA-templates met complexe secundaire structuren.
Toepassingen
Dit product is geschikt voor RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, RNA-seq en cDNA-synthese-experimenten. De temperatuur van de reverse transcriptiereactie kan oplopen tot 70°C.
Eenheid Definitie
Eén eenheid (E) enzymactiviteit wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die nodig is om 1 nmol dTTP binnen 10 minuten bij 37°C in zuur-onoplosbaar materiaal op te nemen, waarbij Poly(A).Oligo(dT) als template-primer wordt gebruikt.
Onderdeel
| Onderdeel | Naam | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ Superreverse transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
Opslagcondities
Bewaren bij -25˚C tot -15˚C gedurende maximaal 18 maanden.
Gebruiksaanwijzing
Eerste-streng cDNA-syntheseprocedure
1. RNA-denaturatie (optionele stap)
1. RNA-denaturatie helpt secundaire structuren te openen, waardoor de opbrengst van de eerste-streng cDNA aanzienlijk wordt verbeterd.
| Onderdeel | Volume |
| RNase-vrije ddH2O | tot 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) of willekeurige primers (50 μM) of genspecifieke primers (2 μM) | 1 μL |
| Sjabloon-RNA | Totaal RNA: 10 pg - 5 μg of mRNA: 10 pg - 500 ng |
· Verwarm het mengsel gedurende 5 minuten op 65°C en laat het vervolgens 2 minuten afkoelen op ijs.
· Centrifugeer kort om de reactievloeistof te verzamelen en voeg het omgekeerde transcriptiereactiemengsel toe zoals hieronder weergegeven.
2. Opzet van de omgekeerde transcriptiereactie (20 μL-systeem)
| Onderdeel | Volume |
| Reactiemengsel uit de vorige stap | 13 μL |
| 5× Reactiebuffer | 4 μL |
| dNTP-mix (10 mM) | 1 μL |
| Hifair® Super Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
| RNase-remmer (40 U/μL) | 1 μL |
3. Instellingen voor het reverse transcriptieprogramma
| Temperatuur | Tijd |
| 25°C* | 5 minuten |
| 50-70°C | 15-30 minuten |
| 85°C** | 5 minuten |
*Bij gebruik van Random Primers, incubeer bij 25°C gedurende 5 minuten. Bij gebruik van Oligo(dT)18 of Gene-Specific Primers kan deze stap worden overgeslagen.
Verhitting tot 85°C gedurende 5 minuten inactiveert de reverse transcriptase. Dit kan indien nodig worden aangepast.
Het reverse transcriptieproduct kan direct worden gebruikt voor daaropvolgende PCR- of qPCR-reacties, kortdurend worden bewaard bij -20°C of langdurig worden bewaard bij -80°C na aliquotering om vries-dooicycli te vermijden.
Voorzorgsmaatregelen
1. Zorg voor een schone laboratoriumomgeving; draag schone handschoenen en maskers. Zorg ervoor dat alle experimentele verbruiksartikelen RNase-vrij zijn om besmetting te voorkomen.
2. Voer alle handelingen op ijs uit om RNA-afbraak te voorkomen.
3. Gebruik RNA-monsters van hoge kwaliteit om een efficiënte reverse transcriptie te garanderen.
4. Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden.
5. Draag voor uw veiligheid en gezondheid een laboratoriumjas en wegwerphandschoenen wanneer u het product hanteert.
Documenten:
Betaling en beveiliging
Uw betalingsinformatie wordt veilig verwerkt. We slaan geen creditcardgegevens op en hebben geen toegang tot uw creditcardinformatie.
Navraag
Misschien vind je het ook leuk
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.