Hieff NGS ™ DNA -selectie Beads Superior Ampure XP Alternatief _ 12601ES

YeasenSKU: 12601ES03

Maat: 1mL
Prijs:
Verkoopprijs$35.00
Voorraad:
Op voorraad

Hieff NGS™ DNA Selection Beads worden bereid op basis van het SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization) principe en zijn toepasbaar voor DNA-zuivering en grootteselectie tijdens de voorbereiding van next generation sequencing (NGS) bibliotheken. Hieff NGS™ DNA Selection Beads zijn compatibel met verschillende DNA- en RNA-bibliotheekvoorbereidingskits en vormen een goed alternatief voor AMPure kralen.

Componenten

Componenten nr. Naam 12601ES08 12601ES56 12601ES75
12601 Hieff NGS™ DNA-selectiekralen 5 ml 60 ml 450 ml

Specificaties

Productlijn DNA-schoonmaak en selectie kralen
Uitgangsmateriaal DNA
Verenigbaarheid DNA
Isolatietechnologie Magnetische kraal
Eindproducttype DNA
Voor gebruik met (toepassing) DNA cel omhoog, DNA grootte selectie

Verzending en opslag

De kralen worden geleverd met koelelementen en kunnen een jaar lang bewaard worden bij een temperatuur van 2°C-8°C.

Instructies

  • 1. Voorbereiding

Laat de geselecteerde kralen minimaal 30 minuten op kamertemperatuur komen voordat u ze gebruikt.

  • 2. DNA-grootteselectie

De operationele stroom van de grootteselectie wordt weergegeven in Figuur 1 en het protocol is als volgt.

Figuur 1. Het stroomdiagram van DNA-grootteselectie

2.1 Meng de kralen grondig door ze voor gebruik te vortexen of op en neer te pipetteren.
2.2 Voeg de eerste ronde selectieparels toe aan het monster (zie Tabel 1). Meng grondig door te vortexen of door minstens 10 keer op en neer te pipetteren.
2.3 Laat 5 min. bij kamertemperatuur incuberen.
2.4 Draai de buis kort en plaats deze op een magnetische standaard. Wanneer de oplossing helder is (ongeveer 5 min), breng de supernatant over naar een nieuwe PCR-buis.
2.5 Voeg de tweede ronde selectieparels toe aan het monster uit stap 2.4 volgens Tabel 1. Meng grondig door te vortexen of door minstens 10 keer op en neer te pipetteren.
2.6 Laat 5 min. bij kamertemperatuur incuberen.
2.7 Draai de buis kort en plaats deze op een magnetische standaard. Wanneer de oplossing helder is (ongeveer 5 min), zuig de supernatant op en gooi deze weg.
2.8 Houd de buis in de magnetische standaard en voeg 200 μL vers bereide 80% ethanol toe zonder de kralen te verstoren, incubeer bij kamertemperatuur gedurende 30 sec. Zuig de ethanol op en gooi deze weg.
2.9 Herhaal stap 2.8 eenmaal voor in totaal twee wasbeurten.
2.10 Verwijder restanten ethanol met 10 µL pipetpunten. Houd de buis in de magnetische standaard, laat de selectiekralen aan de lucht drogen met het deksel open totdat er net barsten verschijnen (ongeveer 5 min).
Let op: Droog de selectiekralen niet te lang. Dit kan resulteren in een lager DNA-doelwit.
2.11 Haal de buis uit de magnetische standaard. Voeg een geschikte hoeveelheid ddH2O (≥20 µL) toe en meng grondig door te vortexen of door minstens 10 keer op en neer te pipetteren.
2.12 Laat 5 min. bij kamertemperatuur incuberen.
Draai de buis even omlaag en plaats deze op de magnetische standaard. Wanneer de oplossing helder is (ongeveer 5 minuten), breng dan 20 μL van de supernatant over naar een nieuwe buis.

  • 3. Aanbevolen omstandigheden voor DNA-grootteselectie

Het kalfsthymus-DNA werd gefragmenteerd door middel van sonificatie om een ​​fragment van 100-1.000 bp te bereiden, en er werden twee ronden van grootteselectie uitgevoerd volgens Tabel 1. De resultaten werden geanalyseerd met behulp van Agilent 2100 Bioanalyzer (Figuur 2).

Tabel 1. Aanbevolen conditie voor DNA-grootteselectie

Lengte van DNA-fragment 250-350 basispunten 320-420 basispunten 450-550 jaar geleden 550-700 basispunten 700-900 basispunten 800-1.000 basispunten
Verhouding kralen: DNA voor de 1e ronde 0,80× 0,70× 0,60× 0,55× 0,50× 0,45×
Verhouding kralen: DNA voor de 2e Ronde 0,20× 0,20× 0,20× 0,15× 0,15× 0,15×

Opmerking: "×" in de tabel geeft het volume van het DNA-monster aan. Als de insertlengte van de bibliotheek bijvoorbeeld 250 bp is en het DNA-monstervolume 100 μL, is het volume van de magnetische kralen die in de eerste sorteerronde worden gebruikt 0,80 × 100 μL = 80 μL; het volume van de magnetische kralen die in de tweede sorteerronde worden gebruikt, is 0,20 × 100 μL = 20 μL.

Figuur 2. Agilent 2100 DNA-chip-elektroferogram met hoge gevoeligheid

Opmerkingen:
1. Voor uw eigen veiligheid en gezondheid verzoeken wij u om tijdens de operatie een labjas en wegwerphandschoenen te dragen.

Geciteerd uit "Sequentiespecifieke integratie door de familie 1 casposase van Candidatus Nitrosopumilus koreensis AR1. Nucleïnezuren Res. 2021;49(17):9938-9952. doi:10.1093/nar/gkab725"

Geciteerd uit "Recente infectie door Wolbachia verandert microbiële gemeenschappen in wilde Laodelphax striatellus-populaties. Microbiome. 2020;8(1):104. Gepubliceerd 2020 Jul 2. doi:10.1186/s40168-020-00878-x"

Citaten en referenties:

[1] Wang X, Yuan Q, Zhang W, et al. Sequentiespecifieke integratie door de familie 1 casposase van Candidatus Nitrosopumilus koreensis AR1. Nucleïnezuren Res. 2021;49(17):9938-9952. doi:10.1093/nar/gkab725(IF:16.971)

[2] Duan XZ, Sun JT, Wang LT, et al. Recente infectie door Wolbachia verandert microbiële gemeenschappen in wilde Laodelphax striatellus-populaties. Microbiome. 2020;8(1):104. Gepubliceerd 2020 jul. 2. doi:10.1186/s40168-020-00878-x(IF:11.607)

[3] Lied B, Almatrafi E, Sang F, et al.Beheer van Fenton-behandeld sediment met biochar en schapenmestcompost: effecten op de evolutionaire kenmerken van de bacteriële gemeenschap. J Environ Manage. 2022;316:115218. doi:10.1016/j.jenvman.2022.115218(IF:6.789)

[4] Huang C, Mei Q, Lou L, et al. Colitis ulcerosa als reactie op fecale microbiotatransplantatie via modulatie van darmmicrobiota en Th17/Treg-celbalans. Cells. 2022;11(11):1851. Gepubliceerd op 5 juni 2022. doi:10.3390/cells11111851(IF:6.600)

[5] Ghosh S, Yang X, Wang L, Zhang C, Zhao L. Actieve fase prebiotische voeding verandert darmflora, induceert gewichtsonafhankelijke verlichting van leververvetting en serumcholesterol bij muizen die een vetrijk dieet kregen. Comput Struct Biotechnol J. 2020;19:448-458. Gepubliceerd 2020 Dec 24. doi:10.1016/j.csbj.2020.12.011(IF:6.018)

[6] Gao X, Yu B, Yu J, et al. Ontwikkelingsprofiel van de vertering van koolhydraten in het dieet bij biggen. Front Microbiol. 2022;13:896660. Gepubliceerd op 29 april 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.896660(IF:5.640)

[7] Li P, Zhang Y, Yan F, Zhou X. Kenmerken van een bacteriofaag, vB_Kox_ZX8, geïsoleerd uit klinische Klebsiella oxytoca en het therapeutische effect ervan op muizenbacteriëmie. Front Microbiol. 2021;12:763136. Gepubliceerd 3 dec. 2021. doi:10.3389/fmicb.2021.763136(IF:5.640)

[8] Lin Z, Luo P, Huang D, Wu Y, Li F, Liu H. Multi-omics-gebaseerde strategie voor toxiciteitsanalyse van acrylamide in het Saccharomyces cerevisiae-model. Chem Biol Interact. 2021;349:109682. doi:10.1016/j.cbi.2021.109682(IF:5.194)

[9] Zon X, Lv W, Wang Y, et al. Het Mrgprb2-gen speelt een rol bij de anafylactoïde reacties veroorzaakt door injectie met Houttuynia cordata. J Ethnopharmacol. 2022;289:115053. doi:10.1016/j.jep.2022.115053(IF:4.360)

[10] Ma H, Lai B, Zan C, Di X, Zhu X, Wang K. GLO1 draagt ​​bij aan de medicijnresistentie van Escherichia coli door het induceren van PER-type van Extended-Spectrum β-Lactamases. Infect Drug Resist. 2022;15:1573-1586. Gepubliceerd 2022 Apr 5. doi:10.2147/IDR.S358578(IF:4.003)

[11] Zhong Y, Zhao W, Tang Z, et al. Vergelijkende transcriptoomanalyse van de verschillende ontwikkelingsstadia van de eierstokken bij de rode moeraskreeft Procambarus clarkii. BMC Genomics. 2021;22(1):199. Gepubliceerd op 21 maart 2021. doi:10.1186/s12864-021-07537-x(IF:3.969)

[12] Lian C, Yang H, Lan J, et al. Vergelijkende analyse van chloroplastgenomen onthult fylogenetische relaties en intraspecifieke variatie in de medicinale plant Isodon rubescens. PLoS One. 2022;17(4):e0266546. Gepubliceerd op 6 april 2022. doi:10.1371/journal.pone.0266546(IF:3.240)

[13] Diao G, Huang J, Zheng X, et al. Prostaglandine E2 vervult een dubbele rol bij het reguleren van de migratie van dendritische cellen. Int J Mol Med. 2021;47(1):207-218. doi:10.3892/ijmm.2020.4801(IF:3.098)

[14] Bing XL, Zhao DS, Peng CW, Huang HJ, Hong XY. Overeenkomsten en ruimtelijke variaties van bacteriële en schimmelgemeenschappen in populaties van veldrijstplanthoppers (Hemiptera: Delphacidae). Insect Sci. 2020;27(5):947-963. doi:10.1111/1744-7917.12782(IF:2.791)

[15] Li X, Zhou S, Zhang J, Zhou Z, Xiong Q. Directionele veranderingen in de intestinale bacteriële gemeenschap in larven van de zwarte soldatenvlieg (Hermetia illucens). Animals (Basel). 2021;11(12):3475. Gepubliceerd op 6 december 2021. doi:10.3390/ani11123475(IF:2.752)

[16] Yang J, Peng Y, Kong W. Identificatie en volledige genoomsequentie van moerbeicryptisch virus 1. Arch Virol. 2022;167(2):687-690. doi:10.1007/s00705-021-05350-1(IF:2.574)

[17] Chang Y, Xia X, Sui L, et al. Endofytische kolonisatie van entomopathogene schimmels verhoogt de resistentie tegen plantenziekten door de endofytische bacteriële gemeenschap te veranderen. J Basic Microbiol. 2021;61(12):1098-1112. doi:10.1002/taakm.202100494(IF:2.281)

[18] Ding CY, Ma YM, Li B, et al. Identificatie en functionele analyse van differentieel tot expressie gebrachte genen in Myzus persicae (Hemiptera: Aphididae) als reactie op trans-anethol. J Insect Sci. 2022;22(1):3. doi:10.1093/jisesa/ieab094(IF:1.857)

Storage

This product should be stored at 2~8℃ for 18 months.

FAQ

It can purify DNA fragments of 150bp or longer. If the purified DNA contains a large amount of fragments shorter than 150bp, please use product number 12600, which can purify DNA fragments of 50bp or longer.
You need to figure out the system on your own. The currently selected system for the selected fragments is the one described in the manual. For other fragment selections, you can refer to the selection system in the manual for adjustment.
It is not recommended to freeze for a long time, as the low temperature will damage the structure of the magnetic beads. Freezing and thawing once for NGS library sorting and purification does not significantly affect the performance for a short period of time. However, the actual result should be based on specific test results.
Keeping the magnetic beads at room temperature may have some impact on their recovery performance. It is not recommended to leave them at room temperature for too long. After use, it is advisable to store them at 4℃. The separation effect of PEG is easily affected by factors such as pH and temperature.
The DNA sorting and purification magnetic beads are based on a technology called Solid Phase Reversible Immobilization (SPRI). The buffer of the magnetic beads generally contains: magnetic beads, DNA, PEG, salt ions (mainly Na+), etc. Under the action of PEG and NaCl, the DNA molecules will undergo dehydration condensation, resulting in a change in DNA conformation and aggregation precipitation. The negatively charged ones can be eluted from the bound DNA molecules when using buffer solutions without enzymes or TE (low salt and low PEG content).
Under different PEG and salt ion concentrations, the conformations of different lengths of DNA are different. Moreover, longer DNA fragments carry more negative charges, so magnetic beads generally preferentially adsorb long DNA fragments. Sorting usually requires two rounds of magnetic bead separation. In the first round, magnetic beads bind to the DNA of larger molecular weight, and this part of the product is removed by discarding the magnetic beads. At this time, the target-sized DNA is in the supernatant; in the second round, magnetic beads bind to the larger molecular weight DNA in the remaining products, and the smaller molecular weight DNA is removed by discarding the supernatant. At this point, the target-sized DNA is on the magnetic beads, and through two rounds of magnetic bead separation, the sorting goal is achieved.
It is not recommended to use 12601. Instead, 12600 should be used. The minimum fragment that can be recovered is about 100bp. The recovery rate of 50bp or above may be affected.
 Magnetic beads can adsorb both double-stranded DNA and single-stranded DNA, but they cannot distinguish between single-stranded or double-stranded DNA. The number of times single-stranded DNA can be purified by the magnetic beads can be referred to in the manual for double-stranded DNA.
12601ES is a non-specific adsorption magnetic bead that can also bind to RNA. If you want to remove RNA, you need to treat it with RNase A.
It is not recommended to use it. Although magnetic beads can also adsorb RNA fragments, the magnetic bead buffer is designed based on DNA characteristics and is not conducive to the stability of RNA structure. For RNA purification, it is recommended to use RNA purification magnetic beads (item number 12602ES).
1) The magnetic beads and DNA were not thoroughly mixed, resulting in insufficient adsorption. It is recommended to ensure thorough mixing of the reaction system.
2) The proportion of magnetic beads is incorrect. It is recommended to select the appropriate proportion according to the instructions.
3) The incubation time is insufficient. Ensure that the incubation time is at least 5 minutes.
4) During magnetic bead separation, when the two wheels perform magnetic bead adsorption, the magnetic beads are collected. A 10 μL pipette can be connected in series before the 200 μL pipette for liquid transfer, which can prevent the collection of magnetic beads.
5) During the magnetic bead washing process, the ethanol solution was not prepared freshly, resulting in an insufficiently high ethanol concentration. It is recommended that the ethanol concentration be no less than 70%, and for small fragments, it should be no less than 80%.
6) Excessive drying: If the magnetic beads are dried for too long, the surface will crack, making it difficult to elute the DNA and resulting in a decrease in yield. It is recommended that the drying time should not be too long; the moment the surface begins to crack, drying should be stopped.
7) Insufficient volume of elution solution: The final elution solution should completely cover the magnetic beads within the tube.
8) Sample reasons: The sample purity is low and contains impurities. When there are a large amount of impurities in the sample, it may cause the magnetic beads to aggregate and harden, resulting in insufficient elution. Using a pipette, try to blow the magnetic beads apart as much as possible, extend the elution time, and increase the product recovery rate. If there are many large fragments in the sample, the large fragments will cause the magnetic beads to aggregate. During elution, you can prolong the time or, if necessary, incubate at 37 degrees to improve the yield.

Citations

Applications

Misschien vind je het ook leuk

Navraag

FAQ

Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van Yeasen Biotechnologie. Handelsmerksymbolen geven het land van herkomst aan, niet noodzakelijkerwijs registratie in alle regio's.

Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.

Yeasen is toegewijd aan ethische wetenschap en is van mening dat ons onderzoek kritische vragen moet beantwoorden en tegelijkertijd de veiligheid en ethische normen moet waarborgen.