Dit product is een bacteriofaag T7 RNA-polymerase afgeleid van recombinante proteïne-expressie in Escherichia coli. Het katalyseert de 5'→3'-synthese van RNA op dubbelstrengs DNA van zijn T7-promotorsequentie (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') en gebruikt NTP's als substraten. Het DNA met dubbelstrengs lineaire stompe uiteinden of 5' uitstekende uiteinden kan worden gebruikt als templates voor T7 RNA-polymerase, dus gelineariseerde plasmiden en PCR-producten kunnen worden gebruikt als templates voor in vitro synthese van RNA.
Let op: G* is de eerste base van het RNA-transcript.
Dit product wordt geproduceerd volgens de GMP-regelgeving en wordt in vloeibare vorm geleverd.
Functie
- Synthetiseert lange en korte transcripten, RNA kan worden geproduceerd in 100-200 μg met 1 μg DNA-sjabloon
- Hogere opbrengst en eenvoudig te bedienen
- Lagere endotoxinen
- Getest op de afwezigheid van endonucleasen, exonucleasen, RNasen
Sollicitatie
- Voorbereiding van radiogelabelde RNA-sonde
- RNA-generatie voor onderzoek naar RNA-structuur, -verwerking en -katalyse
- Expressiecontrole via anti-sense RNA
- mRNA, sgRNA-synthese
Specificatie
| Bron | Uitgedrukt in E. coli met een recombinant T7 RNA Polymerase gen |
| Optimale temperatuur | 37℃ |
| Opslagbuffer | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1% Triton X-100, 50% (v/v) glycerine, pH7,9 bij 25℃ |
| Eenheid Definitie | De hoeveelheid enzym die nodig is om 1 nmol [3H] GMP in het zuur-onoplosbare neerslag op te nemen binnen 1 uur bij 37°C en pH 8,0 wordt gedefinieerd als 1 eenheid. |
Kwaliteit
| COA-artikelen | Standaard |
| Activiteit | 250-300 eenheden/μL |
| Eiwit concentratie | ≥0,5 mg/ml |
| Zuiverheid | ≥95% |
| Endotoxine | <20 EU/mg |
| Resterende protease | Negatief |
| Resterende exonuclease | Negatief |
| Resterende Nickase | Negatief |
| Resterende RNase | Negatief |
| E. coli gastheerproteïne | <50ppm |
| E. coli gastheer DNA | <10 fg/U |
| Mycoplasma DNA | Negatief |
Componenten
| Componenten nr. | Naam | 10625ES10 (10KU) | 10625ES60 (100KU) | 10625ES86 (2.500 KU) | 10625ES99 (100 miljoen) |
| 10625 | T7 RNA Polymerase GMP-kwaliteit (250 U/μL) | 40 μL | 400 μL | 10 ml | 400 ml |
Verzending en opslag
T7 RNA Polymerase GMP-producten worden verzonden met droogijs en kunnen een jaar lang worden bewaard bij -15℃ ~ -25℃.
Cijfers
Figuur 1. Standaard-RNA werd in vitro gesynthetiseerd met behulp van de T7 RNA-synthesekit.
De reactie werd geïncubeerd in een PCR-instrument bij 37℃ gedurende 2 uur en vervolgens gezuiverd door magnetische kralen (Cat#12602). Het opbrengstresultaat werd geanalyseerd door een NanoDrop-spectrofotometer zoals weergegeven in Figuur 1.
Figuur 2. De transcriptiedemonstratie van RNA van verschillende lengtes door de T7-kit respectievelijk in het elektroforetogram (Figuur 2A), het capillaire elektroforesediagram (Figuur 2B) en het chromatogram (Figuur 2C)
Figuur 3. Synthese van gecapte RNA in vitro.
De reactie werd geïncubeerd in een PCR-instrument bij 37℃ gedurende 2 uur en vervolgens gezuiverd door magnetische kralen (Cat#12602). Het opbrengstresultaat werd bepaald door een NanoDrop-spectrofotometer zoals weergegeven in Figuur 3A. Het integriteitsresultaat werd geanalyseerd door capillaire elektroforese zoals weergegeven in Figuur 3B.
10625_Handleiding_HB221111_NL.pdf
Citaten en referenties:
Storage
FAQ
1)ptimizing the sequence immediately upstream of the template's 3' end;
2)Controlling the IVT yield, as excessively high transcription levels tend to increase the frequency of self-extension events.
Citations
Documents
Misschien vind je het ook leuk
Navraag
FAQ
Het product is alleen bedoeld voor onderzoeksdoeleinden en is niet bedoeld voor therapeutisch of diagnostisch gebruik bij mensen of dieren. Producten en inhoud worden beschermd door patenten, handelsmerken en auteursrechten die eigendom zijn van
Voor bepaalde toepassingen zijn mogelijk aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden vereist.