역전사는 역전사효소에 의해 RNA를 상보적 DNA(cDNA)로 전환하는 과정입니다. 어닐링 프라이머가 있는 경우, 역전사효소는 먼저 RNA 주형에 결합합니다. 역전사효소의 RNA 의존성 DNA 중합효소 활성은 반응 혼합물에서 dNTP를 결합하여 cDNA를 합성합니다. 이 과정을 통해 cDNA:RNA 하이브리드 가닥이 형성되며, 이를 첫 번째 가닥 cDNA 합성이라고 합니다.
몰로니 쥐 백혈병 바이러스(M-MLV) 역전사효소는 분자생물학 실험실에서 흔히 사용되는 역전사효소 중 하나입니다. 더 높은 역전사 효율, 더 나은 열 안정성, 그리고 cDNA 합성 속도 증가를 달성하기 위해 원래 역전사효소는 종종 유전자 변형됩니다. 현재 시중에 판매되는 역전사 시약은 일반적으로 15분에서 30분 정도의 반응 시간을 필요로 하는데, 이는 비교적 긴 편입니다. 반응 샘플 수가 많을 경우 전체 소요 시간이 크게 증가할 수 있습니다. 예센(YESSEN)의 기존 5분 역전사 시리즈 제품은 단 5분 만에 역전사 과정을 완료하여 시간을 절약하고 높은 효율을 제공합니다.
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제품 포지셔닝 |
제품명 |
고양이# |
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빠르고 효율적이며 고수율의 역전사 프리믹스 |
qPCR을 위한 Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 합성 SuperMix |
11156ES |
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빠르고 효율적이며 고수율의 역전사 프리믹스(gDNA 제거 포함) |
qPCR을 위한 Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix(DNA digester plus) |
11155ES |
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gDNA 제거 및 역전사 프리믹스의 신속한 1단계 완료 |
11151ES |
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유연한 프라이머 선택 신속 역전사 키트(gDNA 제거 포함) |
11150ES |
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유연한 프라이머 선택 신속 역전사 키트(gDNA 제거 및 추적 염료 포함) |
Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA 합성 키트 |
11149ES |
1. 빠르고 효율적이며 고수율의 역전사 프리믹스(gDNA 제거 기능 포함)(Cat #11155ES)
다양한 템플릿에서 높은 역전사 수율
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견본 |
293T 세포 |
아라비돕시스 탈리아나 |
생쥐 |
생선 간 |
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11155ES |
23.4↓ |
19.6↓ |
24.9↓ |
21.1↓ |
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브랜드 A |
24.9 |
21.3 |
27.5 |
21.3 |
|
브랜드 B |
26.1 |
20.5 |
27.1 |
23.1 |
|
브랜드 C |
25.7 |
19.8 |
27.3 |
21.9 |
|
브랜드 D |
24.3 |
21.3 |
28.1 |
24.5 |
그림. 역전사는 인간 293T 세포, 애기장대, 마우스 간, 어류 간의 RNA 주형을 사용하여 수행되었습니다. 브랜드 A, B, C, D는 모두 2단계 소화 역전사 시약으로, 역전사 시간은 15분에서 20분까지 다양합니다. 시험 결과, Hifair 11155ES 5분 역전사 키트는 다른 브랜드보다 수율이 높고 Ct 값은 더 낮습니다.
2. 5분 1단계 소화 및 역전사 프리믹스(Cat #11151ES)
높은 역전사 수율
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인간 293T 세포 유래 RNA—세 가지 다른 유전자의 평균 Ct 값 |
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RNA 입력 |
11151ES |
브랜드 A |
브랜드 B |
브랜드 C |
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1000ng |
22.4↓ |
21.5↓ |
20.3↓ |
27.5 |
25.5 |
23.7 |
23.4 |
25.4 |
25.5 |
30.6 |
29.9 |
30.9 |
|
10ng |
28↓ |
27.1↓ |
25.3↓ |
29.8 |
28.9 |
27.6 |
30 |
29.6 |
29.2 |
32.8 |
32.4 |
31.6 |
그림. 인간 293T 세포 RNA를 주형으로 사용하여 각각 세 가지 유전자를 시험했습니다. A, B, C 브랜드는 모두 1단계 gDNA 제거 및 역전사 시약입니다. 시험 결과, 1μg과 10ng의 총 RNA를 투입했을 때 11151ES 키트의 역전사 수율이 다른 브랜드보다 우수했으며, Ct 값은 더 낮았습니다.
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아라비도프시스 탈리아나 유래 RNA——평균 Ct 값 |
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RNA 입력 |
11151ES |
브랜드 A |
브랜드 B |
브랜드 C |
|
1000ng |
23.3↓ |
31.5 |
25.2 |
35.2 |
|
10ng |
29.3↓ |
31.1 |
32.6 |
36.1 |
그림. 애기장대 RNA를 주형으로 사용하는 브랜드 A, B, C는 모두 1단계 gDNA 제거 및 역전사 시약입니다. 시험 결과, 1μg의 총 RNA와 10ng의 총 RNA를 투입했을 때 11151ES 키트의 역전사 수율이 다른 브랜드보다 우수했으며, Ct 값도 더 낮았습니다.
뛰어난 감도
그림. 인간 293T 세포 RNA를 주형으로 사용하여 30% GC, 50% GC, 60% GC, 70% GC 함량의 유전자를 증폭시켰다. 총 RNA 입력량 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng, 1 μg을 역전사 분석에 사용한 후 형광 정량 분석을 수행하였다. 결과는 11151ES가 100 pg에서 1 μg까지의 RNA 입력량에 대한 역전사 분석을 수행할 수 있음을 보여준다.
3. 5분 급속 역전사 키트( Cat #11149/11150ES )
최소 검출 한계가 10 pg까지 높은 감도
그림. 293T 세포의 총 RNA를 주형으로 사용하여 11149ES를 이용하여 역전사를 수행하였고, 생성된 cDNA를 qPCR 정량 분석에 적용했습니다. 결과는 11149ES가 10 pg에서 1 μg까지의 RNA 입력을 성공적으로 역전사하여 정확한 정량 결과를 보장함을 보여줍니다.
14kb 단편의 가장 긴 증폭으로 좋은 증폭 성능을 보입니다.
그림. 293T 세포의 총 RNA를 주형으로 사용하여 11149ES를 이용하여 역전사를 수행한 후, 생성된 cDNA를 PCR로 검출했습니다. 결과는 11149ES가 1kb에서 14kb 길이의 cDNA 단편을 합성할 수 있으며, 이후 PCR에 특정 시나리오를 적용할 수 있음을 시사합니다. 10kb 이상의 단편에 대한 직접 역전사가 필요한 경우, 최종 단편을 확보하기 위해 역전사 시간을 20~30분으로 연장하는 것이 좋습니다.
역전사 효율 비교
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RNA 입력량 |
CT 값 |
|
|
11149ES |
브랜드 A |
|
|
1μg |
15.2 |
15.5 |
|
100ng |
18.0 |
18.5 |
|
10ng |
21 |
21.7 |
|
1ng |
24.5 |
25.1 |
|
100피그 |
29.1 |
29.7 |
|
10페이지 |
32.7 |
34.3 |
그림. 293T 세포의 총 RNA를 주형으로 사용하여 11149ES와 브랜드 A를 사용하여 역전사 반응을 수행했습니다. 11149ES는 gDNA 제거 단계를 거치지 않았습니다. 생성된 cDNA를 qPCR 정량 분석에 사용했습니다. 분석 결과, 브랜드 A의 역전사 시간은 13분이었고, 11149ES는 5분이었습니다. 다양한 제품의 정량 분석 결과, 11149ES의 Ct 값은 경쟁 브랜드보다 작거나 유사했으며, 이는 11149ES의 5분 역전사 효율이 브랜드 A보다 우수하거나 거의 동일함을 나타냅니다.
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RNA 입력량 |
CT 값 |
|
|
11149ES |
브랜드 B |
|
|
1μg |
16.2 |
17.4 |
|
100ng |
19.0 |
20.5 |
|
10ng |
22 |
23.8 |
|
1ng |
26 |
27.9 |
|
100피그 |
31.4 |
33.2 |
|
10페이지 |
32.9 |
35.6 |
그림. 293T 세포의 총 RNA를 주형으로 사용하여 11149ES와 Brand B를 이용하여 역전사를 수행했습니다. 11149ES는 gDNA 제거 단계를 거치지 않았습니다. 생성된 cDNA를 qPCR 정량 분석에 사용했습니다. 그 결과, Brand B의 역전사 시간은 20분이었고, 11149ES는 5분이었습니다. 다양한 기질 양에 대한 정량 분석 결과, 11149ES의 Ct 값이 Brand B보다 작거나 유사하여 11149ES의 5분 역전사 효율이 Brand B보다 우수하거나 거의 동일함을 알 수 있습니다.
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방법 |
제품 포지셔닝 |
제품명 |
고양이# |
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염료 기반 qPCR |
고감도 범용 정량 프리믹스(염료 기반) |
11184ES |
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역전사 |
5분 1단계 소화 및 역전사 프리믹스(qPCR용) |
11151ES |
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최대 14kb cDNA 합성 및 gDNA 제거가 가능한 5분 고속 역전사(PCR/qPCR용) |
11150ES |
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gDNA 제거 기능이 있는 고품질 1차 가닥 cDNA 합성 프리믹스(qPCR용) |
qPCR용 Hifair™ III 1st Strand cDNA 합성 SuperMix(gDNA digester plus) |
11141ES |
확장된 독서
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