PCR 기반 유전자형 분석 및 기타 실험은 종종 샘플에서 게놈 DNA를 정제해야 합니다. 검사할 샘플이 많을 경우, 게놈 DNA 정제 과정은 시간이 많이 걸리고 반복적이며 비용도 많이 듭니다. YEASEN Biology는 Taq DNA 중합효소를 변형하고 PCR 반응 시스템을 최적화하여 게놈 정제가 필요 없는 Direct PCR Kit 시리즈를 개발했습니다.
Clever PCR: 직접 PCR
YEASEN의 직접 PCR 키트는 최소한의 원시료(그림 1-A) 또는 그 용해물(그림 1-B)을 게놈 정제 없이 PCR 기반 유전자형 분석(그림 1)의 주형으로 사용하여 시료에서 바로 시작합니다. 기존 PCR 기반 유전자형 분석과 비교하여 직접 PCR 키트는 시료 사용량이 적고, 조작이 간편하며, 실험 비용이 저렴하고, 고처리량 시료 검출이 가능합니다.
그림 1 직접 PCR 증폭 워크플로
A. 직접 방법: 소량의 샘플을 채취하여 PCR 마스터 믹스에 직접 첨가하여 PCR을 식별합니다.기술적 이점
직접: 시간이 많이 걸리고 비용이 많이 드는 DNA 정제가 필요 없습니다.
빠름: 템플릿 준비가 10분 안에 완료되고, PCR 반응은 단 30분 만에 완료됩니다.
간단합니다. 샘플을 절단하거나 갈아낼 필요 없이 분해할 수 있으며, PCR 혼합물은 미리 혼합된 형태로 되어 있어 피펫팅 단계가 줄어듭니다.
절약: 사용되는 재료의 양이 적습니다.
높은 처리량: 용해 반응은 96웰 플레이트에서 완료될 수 있습니다.
저해 저항성: 다양한 동물 및 식물 샘플에 대한 내성이 있습니다.
직접 PCR 키트 실험 과정
이 제품 시리즈는 독특한 프로테아제 분해 시스템을 사용하여 샘플을 분해합니다. 분해 용액은 주형으로 직접 사용할 수 있으며, 키트에 포함된 PCR 마스터 믹스와 함께 사용하여 유전자 증폭을 수행할 수 있습니다.
그림 2 마우스 조직의 직접 PCR 실험 과정
그림 3 식물조직에 대한 직접 PCR 실험 과정
직접 PCR 제품 선택 표
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제품 시리즈 |
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제품 번호 |
10185ES |
10188ES |
10187ES |
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명세서 |
50톤/200톤 |
20T/50T/200T/500T |
50톤/200톤 |
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특징 |
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앰플리콘 길이 |
≤1kb |
≤8kb |
≤1kb |
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확장 시간(s/kb) |
30초 |
≤2kb: 3-5초 ≤8kb: 10초 |
60초 |
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적용 가능한 생물체 |
쥐, 래트 |
인간, 쥐, 염소, 닭, 돼지 등 |
쌀, 옥수수, 담배, 유채, 밀, 대두 등 |
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적용 가능한 조직/재료 유형 |
쥐의 꼬리, 쥐의 귀, 발가락(근육 포함), 기타 기관 |
EDTA, 헤파린, 시트르산과 같은 일반적인 항응고제를 함유한 신선한 혈액, 냉장(냉동) 혈액 및 Whatman903® 및 FTA® 와 같은 상업용 건조 혈액 반점 |
부드러운 잎, 오래된 잎, 묘목, 부드러운 줄기 |
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샘플 사용 |
조직: 5-10mg 마우스 꼬리: 1-5mm |
전혈: 0.5%-20% Whatman® 건조 혈액 반점: 1 mm2 |
잎: 1-10mm 씨앗: 1-3mm |
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게놈 방출 시간 |
15분 |
0-3분 |
0-10분 |
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제품 최종 구조 |
끝이 뭉툭하다 |
끝이 뭉툭하다 |
끝이 뭉툭하다 |
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어닐링 온도 |
온도-(2~5)℃ |
온도-(1~2)℃ |
온도-(2~5)℃ |
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GC 클리핑 범위 |
30-70% |
30-75% |
40-65% |
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5'-3' 엑소뉴클레아제 활성 |
예 |
예 |
예 |
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응용 프로그램 |
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유전자형 분석 |
예 |
예 |
예 |
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멀티플렉스 PCR |
최대 3-4배 |
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직접 샘플 증폭 |
예 |
예 |
예 |
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기타 기능 |
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전기영동 지시약 |
파란색 |
무색 |
파란색 |
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핫 스타트 |
예 |
예 |
예 |
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프리믹스/키트 |
키트(믹스 포함) |
키트(믹스+버퍼 포함) |
키트(믹스 포함) |
제품 성능
변형된 Taq DNA 중합효소는 직접 PCR을 보장합니다. 억제제에 대한 내성이 매우 뛰어납니다.
정제되지 않은 샘플을 주형으로 사용하면 PCR 반응을 저해하는 여러 성분이 유입됩니다. 일반적인 PCR 반응 시스템과 Taq DNA 중합효소를 사용하면 이상적인 결과를 얻기 어렵거나 PCR 증폭을 수행하는 것이 불가능합니다. 이 키트 시리즈의 PCR Mix는 변형된 Taq DNA 중합효소를 사용하여 주형 DNA와의 결합력을 높이고 일반적인 PCR 저해제에 대한 내성을 높여 주형 적응성을 더욱 높인 최적의 프리믹스입니다.
그림 4. 직접 PCR 키트의 PCR 믹스는 불순물에 대한 내성이 더 높습니다. 동일한 양의 주형을 사용하여 다양한 PCR 믹스를 PCR에 사용하고, 다양한 농도의 PCR 반응 억제제를 시스템에 첨가합니다. 다양한 조건에서 PCR 산물의 양을 비교합니다.
Y EASEN은 다양한 샘플에 맞춰 일련의 제품을 개발했습니다.
I. 설치류 특이적 유형: 마우스 조직 직접 PCR 키트 플러스(10189ES)
적용 가능한 샘플: 마우스 조직(예: 마우스 꼬리, 마우스 귀, 마우스 발가락 등)
- 높은 증폭 효율(길이, 속도, GC 호환성)
그림 5. 마우스 조직 직접 PCR 키트 플러스는 다양한 조직의 용해물을 증폭합니다. 1: 플라스미드; 2: 마우스 귀; 3: 마우스 꼬리; 4: 간. 용해 조건: 70°C에서 10분 동안 용해, 95°C에서 5분 동안 불활성화. 표적 단편은 1 kb, 2 kb, 3 kb, 6 kb이며, 연장 시간은 각각 3, 5, 10, 20초/kb로 설정했습니다. M: 10510ES60 (YEASEN).
- 광범위한 템플릿 호환성
그림 6. Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus를 사용하여 사람 293 세포(1), 타액(2), 두피 조직(3)을 직접 용해(70°C, 10분)하고 증폭시켰습니다. 모든 샘플에서 명확한 표적 밴드(M: 10510ES60 (YEASEN))가 나타났습니다.
II. 다종혈액 범용형: 혈액 Advanced Direct PCR 키트(10188ES)
- 최대 8kb의 증폭 길이
그림 7. 다양한 길이의 DNA 단편을 Blood Advanced Direct PCR 키트를 사용하여 인간 전혈에서 직접 증폭시켰다. 혈액 샘플은 항응고제인 EDTA와 함께 -20°C에 보관하였다. 혈액 주형 농도는 10%였고, 연장 시간은 10초/kb로 설정하였다. M: 10510ES60 (YEASEN).
- 높은 내성
그림 8 A: Blood Advanced Direct PCR 키트를 사용하여 인간 EDTA 항응고제 처리된 전혈에서 GC 함량이 71%인 2kb DNA 단편을 직접 증폭했습니다. 혈액 주형 농도는 0.5~50%의 농도 구배로 설정했으며, 연장 시간은 10초/kb로 설정했습니다. B: Blood Advanced Direct PCR 키트를 사용하여 마우스 EDTA 항응고제 처리된 전혈에서 GC 함량이 67%인 2.2kb DNA 단편을 직접 증폭했습니다. 혈액 주형 농도는 0.5~50%의 농도로 설정했으며, 연장 시간은 10초/kb로 설정했습니다. M: 10510ES60 (YEASEN).
III. 식물 특이적 유형: 식물 조직 직접 PCR 키트(10187ES)
- 다양한 종류의 식물 샘플을 통해 검증됨
그림 9. 다양한 식물의 잎 조직에서 얻은 직접 증폭 결과. M: 100 bp DNA 사다리. C: 해당 식물에서 정제한 유전체 DNA를 주형으로 사용. 1-2: 잎 조직 용해물을 주형으로 사용. 사이클 횟수: 30회.
고객 사례
- I. 마우스 유전자형 식별
광저우의 생물학 회사:
그림 10. 마우스 직접 PCR 키트(10189ES)를 이용한 마우스 꼬리 증폭. 표적 유전자: 500 bp; 용해 시간: 10분; PCR 반응 시스템: 25 μL, 연장 시간: 5초/kb.
- II. 벼 유전자 직접 증폭
XX 대학교
그림 11 Plant Direct PCR Kit(10187ES)는 벼 관련 유전자를 증폭하는 데 사용됩니다.
주문 정보
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제품명 |
제품 번호 |
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Hieff™ 마우스 조직 직접 PCR 키트 II(염료 포함) |
10189ES |
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10185ES |
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10188ES |
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10187ES |
관련 제품
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제품 포지셔닝 |
제품명 |
제품 번호 |
제품 사양 |
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고품질 아가로스 |
10208ES60/76 |
100g/500g |
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핵산 염색(자외선 조사) |
10202ES76 |
500 μL |
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빠른 PCR 업그레이드, 콜로니 PCR이 가능하며 복잡한 템플릿 증폭에 적합 |
10167ES03/08 |
1mL/5×1mL |
확장된 독서
YEASEN Rapid PCR Mix: 3kb 콜로니 PCR은 1초/kb의 빠른 속도와 최대 100%의 검출률을 자랑합니다!