설명
Hieff® Blood Advanced Direct PCR Kit는 DNA 정제나 샘플 전처리 없이 전혈 샘플을 직접 증폭할 수 있는 키트로, 신선 혈액, 냉장(냉동) 혈액 및 EDTA, 헤파린, 시트르산 등과 같은 기존 항응고제가 포함된 시판 건조 혈액 얼룩과 호환됩니다. 이 키트는 높은 정확도와 PCR 억제제에 대한 내성을 가진 유전자 조작 DNA 중합효소 조합, 강력한 연장 인자, 증폭 향상 인자를 가진 2× Hieff® Blood Advanced PCR 완충액, 빠른 연장 조건에서 8kb의 게놈 단편을 효율적으로 증폭하고, 2kb 미만의 단편에 대해 3-5초/kb 연장 시간을 설정하여 혈액 샘플 식별 및 검사 시간을 크게 단축하는 최적화된 완충액 시스템을 포함합니다.
명세서
| 충실도(vs. Taq) | 1 × |
| 핫 스타트 | 예 |
| 위에 걸리다 | 3'-A |
| 중합효소 | Taq DNA 중합효소(Cat: 10726) |
구성 요소
|
아니요. |
이름 |
10188ES20 |
10188ES60 |
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10188-A |
2× Hieff ® 혈액 고급 PCR 버퍼 |
500 μL |
2.5mL |
|
10188-B |
Hieff ® 고급 고충실도 DNA 중합효소 혼합물 |
20 μL |
100 μL |
|
10188-C |
양성 대조 프라이머 혼합물(각 10 μM) |
100 μL |
200 μL |
|
10188-D |
10× DNA 로딩 버퍼 |
1mL |
1mL |
지침
추천되는 PCR 반응 시스템.
|
구성 요소 |
용량(μL) |
|
ddH2O |
최대 50 μL |
|
2× Hieff ® 혈액 고급 PCR 버퍼 |
25 μL |
|
포워드 프라이머(10 μM) |
2 μL |
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역방향 프라이머(10 μM) |
2 μL |
|
Hieff ® 고급 고충실도 DNA 중합효소 혼합물 |
1 μL |
|
혈액 샘플 |
엑스 |
2. 프라이머 당 0.4 μM의 최종 농도가 권장되며, 너무 높으면 비특이적 증폭이 발생합니다.
3. 최적의 전혈 주형 농도는 0.5%에서 20% 사이이며, 초기 시험 조건으로 10%를 사용하는 것이 권장됩니다. 즉, 50 μL 반응 시스템에 5 μL의 전혈을 주형으로 첨가하되 혈전이 흡인되지 않도록 주의합니다. Whatman® 필터 카드에 저장된 건조 혈액 얼룩의 경우, 혈액 얼룩이 있는 약 1 mm² 크기의 둥근 종이 조각을 채취하여 전처리 없이 PCR 반응에 직접 증폭시킬 수 있습니다.
반응 프로그램
|
사이클 단계 |
온도 |
시간 |
사이클 |
|
초기 변성 |
95℃ |
5분 |
1 |
|
변성 |
95℃ |
15초 |
30-35 |
|
가열 냉각 |
60℃ |
15초 |
|
|
확대 |
72도 |
3-10초/kb |
|
|
최종 연장 |
72도 |
5분 |
1 |
어닐링 온도는 일반적인 Tm 값, 즉 프라이머 Tm 값보다 1~2°C 낮습니다. 증폭 산물의 특이성이 낮을 경우, 최적의 어닐링 조건을 찾기 위해 어닐링 온도 구배를 설정할 수 있습니다.
10초/kb의 연장 시간은 8kb 미만의 대부분의 표적 단편을 증폭시킬 수 있으며, 3-5초/kb의 연장 시간은 2kb 미만의 대부분의 단편을 증폭시킬 수 있습니다. 증폭 효율이 낮으면 20-30초/kb까지 적절히 연장할 수 있으며, 60초/kb를 초과해서는 안 됩니다.
배송 및 보관
제품은 -15℃ ~ -25℃에서 1년간 보관하시기 바랍니다.
수치
노트
1. 혈액 템플릿은 전체 반응 용량의 10%로 사용하는 것이 좋습니다. 즉, 50 μL 반응 시스템에 5 μL의 전혈을 템플릿으로 첨가하고 혈전이 흡입되지 않도록 주의합니다.
2. 10초/kb의 연장 시간은 8KB 미만의 대부분의 표적 단편을 증폭시킬 수 있으며, 3-5초/kb의 연장 시간은 2KB 미만의 대부분의 단편을 증폭시킬 수 있습니다. 증폭 효율이 낮으면 30초/kb까지 연장할 수 있습니다.
3. PCR 반응 후, 반응 생성물을 4000 rpm(1000× g)에서 1~3분간 원심분리하여 혈액 세포 조각을 침전시키고, 상층액을 후속 분석을 위해 취하는 것이 좋습니다.
4. 본 제품은 의학적 진단에 직접 사용할 수 없습니다.
5. 안전과 건강을 위해 실험실 가운을 착용하고 일회용 장갑을 착용해 주세요.
결제 및 보안
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문의
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자주 묻는 질문
이 제품은 연구 목적으로만 사용되며 인간이나 동물의 치료 또는 진단용으로 의도되지 않았습니다. 제품과 콘텐츠는
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