아가로스는 한천 또는 한천을 함유하는 해조류에서 추출한 정제된 선형 갈락탄 친수성 콜로이드입니다. 구조적으로 β-D-갈락토피라노실(1-4)이 3,6-안하이드로-α-L-갈락토피라노실 잔기에 결합된 선형 중합체입니다. 겔 시약으로서, 겔 전기영동이나 블로팅(예: 노던 또는 서던)을 통한 일상적인 핵산 분석에 일반적으로 사용되며, 방사성 면역확산(RID) 실험과 같은 단백질 분석에도 적합합니다.
아가로스 겔 전기영동은 아가로스를 지지매질로 사용하는 전기영동법으로, 겔 준비, 시료 로딩, 그리고 전기영동을 포함합니다. 다른 지지매질 전기영동과 분석 원리의 주요 차이점은 "분자체"와 "전기영동"의 이중 역할을 한다는 것입니다. 겔을 전기장에 놓으면, 하전된 핵산이 겔 기공을 통해 양극으로 이동합니다. 다양한 조건에서 적절한 시간 동안 전기영동을 수행하면, 크기와 형태가 다른 핵산 단편들이 겔 내 다른 위치에 위치하게 되어 분리가 이루어집니다.

그림 1 핵산 전기영동 실험 작업 단계

그림 2 전기영동 이동 방향 다이어그램

올바른 아가로스를 선택하는 방법은?

아가로스의 기본 매개변수를 기준으로 판단합니다.

  • 황산염 함량 - 순도의 지표
  • 겔 강도 - 겔을 분해하는 데 필요한 외부 힘
  • 겔화점 - 수용성 아가로스 용액이 냉각되어 겔을 형성하는 온도.
  • 전기삼투(EEO)는 액체가 겔 내부로 침투하는 일종의 동전기 운동입니다. 아가로스 겔 내부의 음이온 그룹은 기질에 흡착되어 이동하지 않지만, 해리된 양이온은 음극으로 이동하여 전기삼투를 발생시킵니다. 전기영동에 의한 시료의 이동은 일반적으로 양극으로 이동하기 때문에, EEO로 인한 내부 대류는 분리 효율을 저해할 수 있습니다. 아가로스의 기본 특성에 따라, 고품질 아가로스 겔은 기공이 투명하고, 깨지기 쉬우며, 높은 순도(낮은 황산염 함량), 높은 겔 강도, 비교적 높은 겔점(실온에서 빠른 응고), 낮은 EEO와 같은 특성을 가져야 합니다.

아가로스의 분리 범위를 기준으로 판단:

아가로스 겔은 넓은 분리 범위를 가지며, DNA 겔 회수, DNA 분리, 그리고 DNA 재조합 여부와 플라스미드 등의 절단 여부를 확인하는 데 널리 사용됩니다. 표적 단편의 크기에 따라 아가로스 농도도 달라집니다. 고농도의 아가로스 겔은 작은 단편을 분리하는 데 적합하다는 원리에 따라, 아래 표를 참조하여 필요에 맞는 최적의 겔 농도를 찾을 수 있습니다.

아가로스 농도 ( % )

≥3

2-3

1-2

0.7-1

≤0.7

DNA 단편 크기(bp)

≤200

200-700

700-1500

1500-5000

≥5000

YEASEN 고품질 아가로스 - 귀하의 요구 사항을 충족하는 다양한 응용 시나리오를 포괄합니다.

제품명

제품 번호

제품 사양

응용 프로그램 시나리오

아가로스

10208ES60/76

100g / 500g

일상적인 핵산 전기영동

제품의 장점

낮은 전기침투(EEO ≤ 0.13)로 인해 밴드 분리가 우수하고 구별이 명확하며 이동이 빠릅니다.

그림 3 농도별 젤의 전기영동 다이어그램
참고: 1kb 래더(ladder)를 로딩한 0.75% 아가로스 겔; 100bp 래더, 1kb 래더, 2000 DNA 마커, 5000 DNA 마커를 로딩한 1% 아가로스 겔; 100bp 래더, 2000 DNA 마커, 5000 DNA 마커를 로딩한 2% 아가로스 겔. 시료량: 마커 원액 2 μL를 5배 희석하여 10 μL로 로딩. 0.75%, 1%, 2% 아가로스 겔의 전기영동 프로그램은 다음과 같습니다: 115V에서 45분, 130V에서 40분, 130V에서 50분.

젤 모공은 투명하고 곧으며, 젤 강도가 높고 깨질 가능성이 적습니다.

참고: 이 그림은 YEASEN Agarose(Cat#10208ES60)의 제품을 전시한 것입니다.

아가로스 사용 방법

아가로스 겔의 농도는 일반적으로 0.7%에서 2% 사이로 선택합니다. 농도가 높을수록 겔의 분자 기공 크기가 작아지고 DNA 이동 속도가 느려지며 분리능이 높아집니다. 반대로 농도가 낮을수록 DNA 이동 속도가 빨라지고 분리능이 낮아집니다. 다양한 실험 목적에 따라 적절한 겔 농도와 호환되는 전기영동 완충액을 선택하십시오.

아가로스 농도

효과적인 분리 범위(bp)

권장 버퍼

0.5%

2,000~50,000

1×태이

0.8%

800-10,000

1×태이

1.0%

400-8,000

1×태이

1.2%

300-7,000

1×태이

1.5%

200~3,000

1×TAE/0.5×TBE

2.0%

100~2,000

1×TAE/0.5×TBE

3.0%

25-1,000

0.5×TBE

TAE 완충액: TAE 완충액은 아세트산, EDTA, 트리스(Tris)를 함유하고 있어 빠른 전기영동 및 큰 DNA 단편의 분리에 적합합니다. 아세트산의 존재는 겔의 pH를 낮춰 전기영동 속도를 높이는 데 도움이 됩니다.
TBE 완충액: TBE 완충액은 붕산, EDTA, 그리고 높은 이온 강도를 가진 트리스 이온을 함유하고 있어 작은 DNA 단편의 고분해능 분리에 적합합니다. 붕산 이온의 존재는 겔의 안정성을 향상시켜 분리 효율을 향상시킵니다. 따라서 겔 농도가 높은 경우, 밴드 분리를 용이하게 하기 위해 TBE 완충액을 사용해야 합니다.

출판된 문헌(일부)

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  • Wang M, Zhang S, Zheng G 외. Card14의 기능 획득 돌연변이는 IL-17A에 대한 각질형성세포 반응 증가를 통해 자발적인 건선 유사 피부 염증을 유발한다. Immunity. 2018;49(1):66-79.e5. doi : 10.1016/j.immuni.2018.05.012. IF =19.734
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관련 제품 선택 가이드

제품 포지셔닝

제품명

제품 번호

제품 사양

응용 프로그램 시나리오

핵산 염색

YeaRed 핵산 겔 염색(물에서 10,000배)

10202ES76

500 μL

수용성이며 EB와 동일한 분광 특성을 가지고 있으며 300nm UV 광 여기에서 검출됩니다.

DNA 마커

골드밴드 DL2000 DNA 마커

10501ES60/80

100톤/10×100톤

100~2000bp

골드밴드 DL5000 DNA 마커

10504ES60/80

100톤/10×100톤

100-5000bp

골드밴드 100bp DNA 래더

10507ES60/80

100톤/10×100톤

100~1,500bp

골드밴드 1kb DNA 래더

10510ES60/80

100톤/10×100톤

250-12,000bp

확장된 독서

YEASEN Rapid PCR Mix: 3kb 콜로니 PCR은 1초/kb의 빠른 속도와 최대 100%의 검출률을 자랑합니다!

PCR, 핵산 전기영동, 실험실 기술 핸드북

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