일반적인 문제

가능한 원인

솔루션

양성 대조군과 검사 대상 샘플에는 밴드가 없었습니다.

PCR 반응 시스템이나 반응 조건이 적합하지 않았습니다.

그래디언트 PCR을 사용하여 PCR에 대한 최적의 반응 조건을 탐색합니다.

PCR 시약을 부적절하게 보관하면 시약이 비활성화됩니다.

2×PCR Mix는 -20°C에 보관해야 하며, 사용 시 반복적인 동결 및 해동은 피하십시오. 자주 사용하는 경우, 단기간 4°C에 보관할 수 있습니다.

프라이머 설계 문제.

프라이머를 재설계하여 확인해 보세요.

양성 대조군에는 관심대상 밴드가 나타나는 반면, 검사 대상 샘플에는 밴드가 없거나 약한 밴드가 나타납니다.

용해 완충액과 중화 완충액의 비율이 부적절하며, 용해 혼합물이 PCR 시스템의 pH 값에 영향을 미칩니다.

정상적인 조건에서 중화된 용해 혼합물의 pH는 7-8 정도여야 합니다(용해 생성물과 완충액 P2는 5:1의 비율에 따라 엄격히 중화되어야 합니다).

샘플 용해 혼합물이 부적절하게 보관되었거나 너무 오랫동안 보관되어 DNA 게놈이 분해되었습니다.

용해물 혼합물은 4°C에서 5일 동안 보관할 수 있습니다. PCR에는 신선하게 준비한 용해물 혼합물을 사용해 보세요.

추가된 템플릿의 양이 적합하지 않습니다.

반응계의 <5% 범위 내에서 템플릿의 첨가량을 최적화합니다.

PCR 사이클 횟수가 부족합니다.

PCR 사이클 수를 적절히 늘리십시오. 바람직하게는 35~40 사이클입니다. 템플릿의 복잡성으로 인해 일반적으로 정제된 DNA 템플릿을 사용하는 것보다 PCR 반응 사이클을 5~10 사이클 더 늘리는 것이 좋습니다.

비특이적 증폭

PCR 어닐링 온도가 너무 낮거나, 사이클 횟수, 프라이머 농도 또는 템플릿 농도가 너무 높습니다.

PCR 어닐링 온도를 높이고 PCR 사이클 횟수, 프라이머 농도 또는 템플릿 농도를 낮춥니다.

PCR 프라이머 불일치.

PCR 프라이머를 재설계합니다.

PCR 반응 시스템을 제조할 때 온도가 너무 높거나 제조 후 시간이 너무 길었습니다.

PCR 반응 시스템의 준비는 낮은 온도에서 진행되며, 준비가 완료된 후 가능한 한 빨리 PCR 증폭 반응을 실시한다.

음성대조군에 타겟밴드가 나타남

작업 도구나 시약의 오염.

실험에 사용되는 모든 시약이나 장비는 고압증기멸균해야 합니다. 표적 서열이 샘플 건에 빨려 들어가거나 원심분리관 밖으로 흘러나오지 않도록 취급 시 주의하고 부드럽게 다루십시오.

샘플 간 교차 오염.

각 샘플러는 하나의 샘플에만 사용합니다. 또는 샘플 하나를 채취한 후, 샘플러 블레이드를 2% 차아염소산나트륨 용액에 담그고 여러 번 헹군 후 깨끗한 종이 타월로 잔여물을 말립니다.