D-ルシフェリン、カリウム塩 -40902ES

YeasenSKU: 40902ES01

サイズ: 100mg
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D-ルシフェリンはルシフェラーゼの一般的な基質であり、バイオテクノロジー、特に生体内イメージング技術で広く使用されています。その作用機序は、ルシフェリン(基質)がATPとルシフェラーゼの存在下で酸化されて光を発することです。フルオレセインが過剰の場合、生成される光の量子数はルシフェラーゼ濃度に等しく、正の相関関係があります(下の図を参照)。ルシフェラーゼをコードする遺伝子(Luc)を持つプラスミドが細胞にトランスフェクトされ、ラットやマウスなどの研究動物に導入されました。

D-ルシフェリンは、ルシフェラーゼおよびATPレベル分析、レポーター遺伝子分析、ハイスループットシーケンシング、およびさまざまな汚染テストを含むin vitro研究でもよく使用されます。製品形態は、D-ルシフェリン(遊離酸)、D-ルシフェリン塩(ナトリウム塩およびカリウム塩)の3つです。主な違いは溶解性にあります。前者は水溶性で、後者は緩衝液系の溶解性です。低濃度のNaOHおよびKOH溶液などの弱塩基を除いて、これらは弱く溶けます。メタノールおよびDMSOに溶けます。後者は水または緩衝液に簡単に溶け、使いやすいです。

特徴

  • 放射線は出ないので、生体にほとんど無害です。
  • 生物発光、励起光源なし。
  • 非常に感度が高いため、数百個の細胞でも検出できます。
  • 浸透性は良好で、3〜4cmの組織深度も検出可能です。
  • 高い信号対雑音比、強い蛍光信号、優れた耐干渉性。

アプリケーション

  • ヌードマウスの腫瘍形成実験では、腫瘍剥離測定を行わず、浸潤なくリアルタイムで腫瘍の成長を観察しました。
  • 腫瘍の成長や転移に対する投与の効果を試験するために、フルオレセイン基質は薬物実験に干渉することなく 3 時間以内に完全に除去できます。
  • 動物における外来細胞の局在と分布が検出されました。
  • 標的遺伝子または標的遺伝子のプロモーターをルシフェラーゼ遺伝子に融合して、薬物治療中または疾患進行中の遺伝子発現の変化を検出します。
  • 幹細胞移植、生存、増殖を監視し、生体内での幹細胞の分布と移動を追跡します。

仕様

英語の同義語 (S)-4,5-ジヒドロ-2-(6-ヒドロキシ-2-ベンゾチアゾリル)-4-チアゾールカルボン酸カリウム塩; D-ルシフェリンホタル、カリウム塩
CAS番号 115144-35-9
式 C11H7N2O3S2K
分子量 318.42グラム/モル
外観 淡黄色の粉末
溶解度 水に溶ける(60 mg/mL)

コンポーネント

コンポーネント番号 名前 40902ES01 40902ES02 40902ES03 40902ES08
40902 D-ルシフェリン、カリウム塩 100mg 500mg 1グラム 5g


数字

「ホスホグリセリン酸ムターゼ1の新規アロステリック阻害剤が非小細胞肺癌の増殖と転移を抑制する」Cell Metab. 2019;30(6):1107-1119より引用

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ドキュメント:

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マニュアル

40902_マニュアル_HB221103_EN.pdf


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Storage

The product is shipped with dry ice and can be stored at -15℃ ~ -25℃ for 1 year.

FAQ

There is no difference. The three are merely variations in naming by different companies, and they are all compounds (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2 -thiazoline-4-carboxylic acid
Besides being used for in vivo imaging, fluorescent dye products are also employed in other applications involving luciferase, such as in vitro reporter gene assays, microbial/viral monitoring, pyrosequencing, etc.
Sodium fluorescein: It can be used for cell permeability testing. The permeability of the pigment can be determined by measuring the absorbance value at OD490. D-fluorescein sodium salt: Used for in vivo imaging and reporter gene systems. It is detected through a cold luminescence module and does not require excitation light stimulation.
The main differences among the three are as follows:
1) Solubility: The salt form is easily soluble in water. The solubility of potassium salt is 60mg/ml, and that of sodium salt is 100mg/ml. Free acid is not easily soluble in water. It can be dissolved by a weak alkaline solution of sodium bicarbonate, and its solubility in methanol is 10mg/ml, and in DMSO is 50mg/ml.
2) Toxicity: The salt form is more convenient to use during the process, especially in in vivo imaging experiments, as it can dissolve in water and the reaction toxicity will be smaller (Fluorescein is a low-molecular-weight organic compound composed of phenylthiazole and thiazole carboxyl group, with low toxicity).
3) Usage effect: There is no significant difference. In in vivo experimental studies, the usage rate of potassium salt is higher.
It has an impact. The purity is above 99%, with a good level of 99%. For 99% pure fluorescein, there is 1% solid impurity. If this 1 gram of impurity is dissolved in 25 ml of buffer solution (this dilution ratio is the standard dilution method for in vivo imaging experiments), the concentration of the impurity at this time is 0.4 g/L. Assuming the molecular weight of the impurity is 1000 g/mol, then the molar concentration of the impurity is 400 μM. This concentration may inhibit the action of certain enzymes in the cells and may reduce the experimental effect or cause harm to the animals.
The powder should be stored in a dark place at -20 or -70 degrees Celsius. Its validity period is at least one year.
D-fluorescein (D-Luciferin) is a commonly used substrate for luciferase. Its mechanism of action is that under the action of ATP and luciferase, the fluorescent substance (the substrate) can be oxidized and emit light. When there is an excess of fluorescent substance, the number of photons produced is positively correlated with the concentration of luciferase.
2. Native coelenterazine is an action substrate for various luciferases such as sea kidney luciferase (Rluc) and Gaussia luciferase (Gluc).
Fluorescein is a small molecule with excellent water solubility and lipid solubility. It can easily penetrate the cell membrane and the blood-brain barrier.
Either one is fine. Intraperitoneal injection has a slower diffusion rate and the light emission lasts longer; intravenous injection has a faster diffusion rate, but the light emission lasts for a very short period of time.
Intraperitoneal injection (i.p.), with a fluorescein concentration of 150 mg/kg per kg of body weight. Taking a 20g C57 mouse as an example, the dosage for each mouse for one test: 150 mg/kg × 20g = 3mg, 100mg ÷ 3mg = 33 mice. This is for reference only. The specific dosage should be based on the reagent and without any loss.
Generally speaking, potassium d-fluorescein does not cause any toxic effects on animals.
There is no such information.
Chemiluminescence, no excitation wavelength required. The detection wavelength for firefly luciferin is 560 nm. The detection wavelength for sea kidney luciferin is 465 nm.
It can pass through the blood-brain barrier, the placental barrier and the blood test barrier, and also enter living cells.
The recommended concentrations are derived from the literature:
1) Injection method: It can be done through intraperitoneal injection or tail vein injection.
2) Injection volume: The scientific approach is to evaluate the injection dose based on the kinetic curve. The initial attempted injection dose is: 150mg substrate/kg of mouse body weight. Therefore, the purchase quantity can be calculated according to the above method: If there are 10 mice, 22 - 25g, then 33 - 37.5mg of substrate is required.
Approximately 3 minutes after intraperitoneal injection of fluorescein into mice, cells expressing luciferase began to emit light. The intensity reached a stable peak after 10 minutes, and this peak lasted for about 10 - 15 minutes before gradually diminishing. Detection can be conducted within 10 - 15 minutes after the injection. This is for reference only. It is recommended to conduct a preliminary experiment to establish the kinetics curve of luciferase, thereby determining the optimal time for signal detection and the signal plateau period.
To successfully conduct the in vivo imaging experiment, the following conditions are required: The target tissue or cells must express the luciferase gene; the injection of the luciferin substrate must be successful; and the thickness of the tissue at the luminescent site is also a factor. If the experiment fails, the reasons can be investigated from these aspects: whether the luciferase gene is expressed, whether the luciferin substrate was injected correctly, and whether the luminescent site is deep.

Citations

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