D-ルシフェリン、ナトリウム塩 D -40901ES

YeasenSKU: 40901ES01

サイズ: 100mg
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D-ルシフェリンはルシフェラーゼの一般的な基質であり、バイオテクノロジー、特に生体内イメージング技術全体で広く使用されています。その作用機序は、ルシフェリン(基質)がATPとルシフェラーゼに反応して酸化され、光を発することです(下図参照)。これは、ルシフェリンが多すぎる場合に生成されます。光量子数は、ルシフェラーゼの濃度と正の相関関係がありました。ルシフェラーゼをコードする遺伝子(Luc)を運ぶプラスミドを細胞に導入し、ラットやマウスなどの研究動物に導入しました。次に、生体内でフルオレセインを注入し、生物発光イメージング(BLI)を使用して光強度の変化を検出し、病気の進行や薬の有効性をリアルタイムで監視します。ATPの反応システムへの影響は、生物発光強度の変化に応じてエネルギーやバイタルサインを示すためにも使用できます。

D-ルシフェリンは、ルシフェラーゼおよびATPレベル分析、レポーター遺伝子分析、ハイスループットシーケンシング、およびさまざまな汚染テストを含むin vitro研究でもよく使用されます。現在、D-ルシフェリン(遊離酸)、D-ルシフェリン塩(ナトリウム塩およびカリウム塩)の3つの製品形態があります。主な違いは溶解性にあります。前者は水溶性で、緩衝液システムの溶解性は弱いですが、低濃度NaOHおよびKOH溶液などの弱塩基に溶解し、メタノールおよびDMSOに溶解します。後者は水または緩衝液に溶けやすく、使いやすく、溶媒に無毒で、特にin vivo実験に適しています。ソリューションとして、ほとんどの用途で3つの製品の間に実質的な違いはありません。

特徴

  • 放射線は出ないので、生体にほとんど無害です。
  • 生物発光、励起光源なし。
  • 非常に感度が高いので、数百個の細胞でも検出できます。
  • 浸透性は良好で、3〜4cmの組織深度も検出可能です。
  • 高い信号対雑音比、強い蛍光信号、優れた耐干渉性。

応用

  • ヌードマウスの腫瘍形成実験では、腫瘍剥離測定を行わず、浸潤なくリアルタイムで腫瘍の成長を観察しました。
  • 腫瘍の成長や転移に対する投与の効果を試験するために、フルオレセイン基質は薬物実験に干渉することなく 3 時間以内に完全に除去することができます。
  • 動物における外来細胞の局在と分布が検出されました。
  • 標的遺伝子または標的遺伝子のプロモーターをルシフェラーゼ遺伝子に融合して、薬物治療中または疾患進行中の遺伝子発現の変化を検出します。
  • 幹細胞移植、生存、増殖を監視し、生体内での幹細胞の分布と移動を追跡します。

仕様

英語の同義語 (S)-4,5-ジヒドロ-2-(6-ヒドロキシ-2-ベンゾチアゾリル)-4-チアゾールカルボン酸ナトリウム塩; D-ルシフェリンホタル、ナトリウム塩一水和物;
CAS番号 103404-75-7
式 ナトリウムC11H7N2O3S2·H2O
分子量 320.32グラム/モル
外観 淡黄色の粉末
溶解度 水に溶ける(100 mg/mL)
純度(HPLC) ≥95%

コンポーネント

コンポーネント番号 名前 40901ES01 40901ES02 40901ES03 40901ES08 40901ES10
40901 D-ルシフェリン、ナトリウム塩 100mg 500mg 1グラム 5g 10グラム

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ドキュメント:

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マニュアル

40901_マニュアル_HB221103_EN.pdf


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Storage

The product should be stored at -15℃ ~ -25℃ for 1 year.

FAQ

There is no difference. The three are merely variations in naming by different companies, and they are all compounds (S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl)-2
- Thiazoline-4-carboxylic acid.
Besides being used for in vivo imaging, fluorescent dye products are also employed in other applications involving luciferase, such as in vitro reporter gene assays, microbial/viral monitoring, pyrosequencing, etc.
Sodium fluorescein: It can be used for cell permeability testing. The permeability of the pigment can be determined by measuring the absorbance value at OD490. D-Fluorescein sodium salt: Used in in vivo imaging and reporter gene systems. It is detected through a cold luminescence module and does not require excitation light stimulation.
The main differences among the three are as follows:
1) Solubility: The salt form is easily soluble in water. The solubility of potassium salt is 60mg/ml, and that of sodium salt is 100mg/ml. Free acid is not easily soluble in water. It can be dissolved by a weak alkaline solution of sodium bicarbonate, and its solubility in methanol is 10mg/ml, and in DMSO is 50mg/ml.
2) Toxicity: The salt form is more convenient to use during the process, especially in in vivo imaging experiments, as it can dissolve in water and thus has less reaction toxicity (Fluorescein is a low-molecular-weight organic compound composed of phenylthiazole and thiazole carboxylic acid groups, which has low toxicity). 3) Usage effect: There is no significant difference. In in vivo experimental studies, the usage rate of potassium salt is higher.
 It has an impact. The purity is above 99%, with a good level of 99%. For 99% pure fluorescein, there is 1% of solid impurities. If these 1 grams of impurities are dissolved in 25 ml of buffer solution (this dilution ratio is the standard dilution method for in vivo imaging experiments), the concentration of the impurities at this time is 0.4 g/L. Assuming the molecular weight of the impurities is 1000 g/mol, then the molar concentration of the impurities is 400 μM. This concentration may inhibit the action of certain enzymes in the cells and may reduce the experimental effect or cause harm to the animals.
The powder should be stored in a dark place at -20 or -70 degrees Celsius. Its validity period is at least one year.
D-fluorescein (D-Luciferin) is a commonly used substrate for luciferase. Its mechanism of action is that under the action of ATP and luciferase, the fluorescent substance (the substrate) can be oxidized and emit light. When there is an excess of fluorescent substance, the number of photons produced is positively correlated with the concentration of luciferase. 2. Native ctenoidin (Coelenterazine native) is an acting substrate for various luciferases such as sea kidney luciferase (Rluc) and Gaussia luciferase (Gluc).
Chemiluminescence, no excitation wavelength required. The emission wavelength of firefly luciferin is 560 nm. The emission wavelength of sea kidney luciferin is 465 nm.
It can pass through the blood-brain barrier, the placental barrier and the blood test barrier, and also enter living cells.
The recommended concentrations are derived from the literature:
1) Injection method: It can be done through intraperitoneal injection or tail vein injection.
2) Injection volume: The scientific approach is to evaluate the injection dose based on the kinetic curve. The initial attempted injection dose was set at 150mg substrate/kg of mouse body weight. Therefore, the purchase quantity can be calculated according to the above method: If there are 10 mice, 22 - 25g, then 33 - 37.5mg of substrate is required.
Approximately 3 minutes after intraperitoneal injection of fluorescein into mice, cells expressing luciferase began to emit light. The intensity reached a stable peak after 10 minutes, and this peak lasted for about 10 - 15 minutes before gradually diminishing. Detection can be conducted within 10 - 15 minutes after the injection. This is for reference only. It is recommended to conduct a preliminary experiment to establish the kinetics curve of luciferase, thereby determining the optimal time for signal detection and the signal plateau period.
To successfully conduct the in vivo imaging experiment, the following conditions are required: The target tissue or cells must express the luciferase gene; the injection of the luciferin substrate must be successful; and the thickness of the tissue at the luminescent site is also a factor. If the experiment fails, the reasons can be investigated from these aspects: whether the luciferase gene is expressed, whether the luciferin substrate was injected correctly, and whether the luminescent site is deep.

Citations

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