二本鎖 RNA (dsRNA) は、mRNA の in vitro 転写中に副産物として発生します。この副産物は人体内で免疫原性を持ち、免疫反応を誘発して mRNA レベルを低下させる可能性があります。このため、dsRNA は厄介なプロセス不純物となり、徹底的な除去と残留物の厳格な管理が必要になります。

この懸念に対処するため、二本鎖 RNA (dsRNA) ELISA 検出キットは、残留 dsRNA の定量化に二重抗体サンドイッチ酵素結合免疫測定法 (ELISA) の実験原理を採用しています。このキットは、通常の dsRNA の検出だけでなく、擬似 UTP、N1-Me-擬似 UTP、5-OMe-UTP 修飾 dsRNA の検出にも使用できます。

この手順では、あらかじめ抗 dsRNA 抗体でコーティングした酵素プレート (36717-A と指定) に標準サンプルとテストサンプルの両方を加えます。次に、ビオチン標識 dsRNA 検出抗体 (36717-F) を希釈した状態で加えます。最後に、ストレプトアビジン HRP (SA-HRP) (36717-G) を導入して、抗体、抗原、ビオチン、および SA-HRP を含む複合体を作成します。

プレート洗浄後、TMB 発色溶液 (36717-K) を加えると発色が始まります。HRP 酵素触媒作用により、TMB は無色から青色に変化しますが、その後停止溶液 (36717-L) を加えると変化が止まります。最終的にこの変化によって黄色が生まれ、その強度はサンプルで特定された dsRNA の量と正の相関関係にあります。

このキットは多目的に使用でき、生物学的製品の精製プロセスの最適化、中間段階での不純物制御、最終製品の評価のためのリリーステストを可能にします。

コンポーネント

製品検証レポート​​

感度

配送と保管

キットはアイスパックと一緒に発送され、2℃～8℃で保管できます。未開封の製品は1年間有効です。試薬を開封すると、半年有効です。この製品は絶対に凍らせないでください。

説明書

1. 実験前の準備

1) このキットには含まれていないが、実験に必要な実験材料:

a. RNaseフリーチップ

b. RNaseフリー遠心チューブ

c. 無塵紙

d. RNaseフリーサンプル前処理プレート

e. 脱イオン水または再蒸留水。

2) 必要だが提供されない器具および機器:

a. 多機能マイクロプレートリーダー（450nmと650nmをカバーするデュアル波長検出モードを含む。検出波長として450nm、参照波長として650nmを使用可能）。

b. 全自動プレート洗浄機、ボルテックスミキサー、定温ミキサー、遠心分離機。

c. さまざまな仕様の精密マイクロピペットおよびマルチチャンネルマイクロピペット。

d. タイマー、4℃冷蔵庫。

e. マイクロプレートシェーカー。

2.結果分析

a. 検査対象サンプルの OD 値が標準曲線の最高点の OD 値を超える場合は、サンプルを希釈して再測定する必要があります。

b. 曲線作成手順: 標準濃度を x 軸に、対応する較正済み標準吸光度値を y 軸にプロットして標準曲線を作成します。さまざまな描画および統計ソフトウェア ツールが、標準曲線の作成と未知のサンプル濃度の決定に役立ちます。この実験では、4 パラメーターまたは 5 パラメーターのフィッティング法を使用することをお勧めします。最終的には、標準曲線を参照し、サンプルの希釈係数を考慮して、サンプル内の dsRNA の残留量を計算します。

c. 提供された標準曲線は説明例です（参照目的のみ）。実際のサンプル含有量は、同じ実験標準用に特別に生成された標準曲線を使用して決定する必要があります。

3. 実験フローチャート

図5 実験フローチャート

4.製品のパフォーマンス

このキットの性能は十分に評価されています。詳細については、技術担当者に問い合わせて、対応する性能検証レポートを入手してください。

5.注意事項

1. このキットを使用する前に、この取扱説明書をよくお読みください。
2. この製品は有効期間内に使用してください。異なるバッチの関連試薬を混合することは禁止されています。
3. すべての試薬は使用前に室温に戻す必要があります。
4. 安全と健康のため、白衣と使い捨て手袋を着用してください。
5. この製品は科学研究目的のみに使用されます。
   
   

   
   

   
   

   ドキュメント:

   
   

   安全データシート

   
   

   マニュアル