特徴

1.非常に高い増幅特異性 - 二重シール抗体はポリメラーゼとエキソヌクレアーゼの両方の活性を同時にシールできるため、非特異的増幅を効果的に回避し、特異性を高めます。

2.優れた検出感度 - ホットスタート方式により、低存在量の遺伝子を効果的に検出し、より高い感度を実現します。

3.優れた製品安定性 - 37°C に 5 日間、または 4°C に 10 日間置いても性能が安定します。

4.ベースラインの安定性と優れた直線性 - ベースラインドリフトの問題に対処し、優れた直線性を実現します。

5.酵素活性の急速な放出 - 95°C で 20 秒間加熱することで、95% 以上の酵素活性を放出できます。

6.酵素の幅広い適用性 - 野生型と変異型の両方の Taq 酵素に適しており、抗体 1 mg あたり 4 ～ 10 KU の Taq 酵素を封入できます。

1 Taq DNAポリメラーゼエキソヌクレアーゼ活性の阻害

合成プライマープローブを、シールされていないTaq DNAポリメラーゼと、二重封鎖抗体でシールされたTaq DNAポリメラーゼの反応混合物にそれぞれ導入し、40℃で反応を行った。両方の抗体の蛍光シグナルが検出され、二重封鎖抗体がTaq DNAポリメラーゼのエキソヌクレアーゼ活性を効果的にシールできることがわかった。

 図 1. 二重シール抗体エンドヌクレアーゼ活性のシール効率の検出。

02 検出感度検証

Yeasenの二重密封抗体とT社の抗体をそれぞれ使用してTaq酵素を密封し、ARMS-PCR技術で陽性サンプルを検出したところ、Yeasenの二重密封抗体で密封されたTaq酵素は、ARMS-PCR増幅においてより高感度で正確であることがわかりました。

図2. ARMS-PCRの増幅曲線。

赤:YEASEN 抗体 + Taq、青:サプライヤー A 抗体 + Taq。

03 安定性検証（4℃で10日間、37℃で5日間）。

Taq DNAポリメラーゼをそれぞれ阻害する従来のクローズド抗体とダブルクローズド抗体を用いて、ポリメラーゼをプライマーとプローブを含む完全なプレミックス溶液に調製した。この溶液を4℃で10日間、または37℃で1、3、5日間放置した後、ASFプラスミド10,000コピーを増幅した。増幅曲線とCt値に有意な変化は見られなかった。

 図 3. Taq ポリメラーゼを従来のブロッキング抗体 (A) と二重ブロック抗体 (B) でブロックした後、qPCR システムで増幅した 10,000 コピーの ASF プラスミドの増幅曲線。 

04 ベースライン検出

特定のプライマーを特定のバッファーおよび機器と組み合わせて使用​​する特定の条件下では、ベースラインドリフトと呼ばれる現象が発生する可能性があります。しかし、ダブルクローズド抗体を使用することで、ベースラインドリフトの問題を効果的に解決し、より安定したベースラインを得ることができます。

図4. qPCR分析におけるSARS-CoV-2 N遺伝子（A）とACT遺伝子（B）の増幅曲線。

05 直線性検証

二重閉鎖抗体で密封した反応混合物を用いて、ASFV/ACTデュアルプラスミドを100,000、10,000、1,000、100コピー増幅し、標準曲線を作成しました。図7に示すように、いずれも良好な直線性を示しています。

図 5. 二重ブロック反応混合物を使用して生成された ASFV 遺伝子と ACT 遺伝子の標準曲線グラフ。

06 酵素活性放出アッセイ

Yeasen社の二重閉鎖抗体（カタログ番号31303）を用いてTaq酵素を封入し、95℃で20秒間の熱ショックを与えて酵素活性を検出しました。95℃で20秒間の熱ショック後、31303は酵素活性の95%以上を放出することが観察され、これはT社の抗体と同等です。

表 1. 酵素の 95°C で 20 秒間の熱ショック。

07 マルチプレックスTaqポリメラーゼ検出

Yeasen社の二重閉鎖抗体（カタログ番号31303）を用いて、3種類のTaqポリメラーゼ（野生型および2種類の変異型）を1μg/5Uの比率で封入し、蛍光値と封入効率を測定した。その結果、様々な種類のTaqポリメラーゼにおいて、Yeasen社の二重閉鎖抗体（カタログ番号31303）は良好な封入効果を示すことがわかった。

表 2. さまざまなタイプの Taq ポリメラーゼの阻害効率。