RIPA溶解バッファー（ラジオイムノプレシピテーションアッセイバッファー）は、細胞や組織の迅速な破砕に広く使用されている伝統的な溶解液です。動物細胞から膜分画、細胞質分画、核分画などの細胞成分を効果的に溶解します。溶解バッファーの濃度に応じて、RIPAバッファーは一般的に強、中、弱に分類されます。

本製品は、オルトバナジン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、EDTA、ロイペプチンなどの複数の阻害剤を含む強力なRIPA溶解バッファーであり、タンパク質の分解を効果的に防ぎます。本溶解バッファーを用いて得られたタンパク質サンプルは、ウェスタンブロッティングや免疫沈降（IP）などの日常的なアプリケーションに適しています。

ストレージ

湿った氷と一緒に発送してください。この製品は-20℃で保管してください。 1年間。凍結融解の繰り返しは避けてください。長期保存には小分け保存をお勧めします。

注記

1. PMSF はユーザーが提供する必要があります。

2.サンプル溶解を含むすべての手順は、氷上または 4°C で実行する必要があります。

3.このRIPAバッファーで溶解したサンプルのタンパク質濃度は、BCAタンパク質アッセイキット（カタログ番号20201ES76）を用いて測定できます。このバッファーには高濃度の界面活性剤が含まれているため、ブラッドフォード法は、この溶解バッファーで調製したサンプルのタンパク質定量には適していません。

4. 安全と衛生のため、試薬を扱うときは白衣と使い捨て手袋を着用してください。

5.この製品は研究目的のみに使用されます。

説明書

I. 培養細胞サンプル

1. RIPA溶解バッファーを解凍し、よく混合します。使用直前（数分以内）に適切な量の溶解バッファーにPMSFを添加し、最終PMSF濃度が1 mMになるようにします。

2. 接着細胞の場合：培養液を取り除き、PBS、生理食塩水、または無血清培地で細胞を1回洗浄します（血清タンパク質が影響しない場合は洗浄は任意です）。6ウェルプレートの各ウェルに溶解バッファー150～250μLを加えます。溶解バッファーと細胞が完全に接触するように、ピペッティングで数回上下に動かします。完全に溶解すると、目に見える細胞ペレットは残っていません。

浮遊細胞の場合：遠心分離により細胞をペレット化し、チューブを指で強く叩いてペレットを再懸濁します。細胞6ウェル相当量あたり150～250μLの溶解バッファーを加えます。チューブを軽く叩いて細胞を完全に溶解します。完全に溶解した後、目に見える細胞ペレットは残っていないはずです。細胞数が多い場合は、溶解前にチューブ1本あたり0.5～1×10⁶細胞ずつサンプルを小分けしてください。

3. 完全に溶解した後、10,000～14,000 gで3～5分間遠心分離します。上清を回収し、PAGE、ウェスタンブロッティング、免疫沈降などの後続のアプリケーションに使用します。

溶解バッファー量に関する注意：通常、6ウェルプレートのウェルあたり150μLの溶解バッファーで十分です。ただし、細胞密度が非常に高い場合は、必要に応じて200μLまたは250μLまで増やすことができます。

II. 組織サンプル

1.組織を細かく切ります。

2. RIPA溶解バッファーを解凍し、よく混合します。使用直前にPMSFを添加し、最終濃度を1 mMにします。

3. 組織20 mgあたり150～250 μLの割合で溶解バッファーを加えます。（溶解が不十分な場合は、溶解バッファーを追加してください。より高いタンパク質濃度が必要な場合は、溶解バッファーの量を減らしてください。）

4.ガラスホモジナイザーを使用して、完全な溶解が達成されるまでサンプルを均質化します。

5.完全に溶解した後、10,000～14,000 gで3～5分間遠心分離します。上清を回収し、PAGE、ウェスタンブロッティング、免疫沈降などの後続のアプリケーションに使用します。

6. 組織サンプルが既に非常に小さい場合は、細かく切り刻み、溶解バッファーを加えて激しくボルテックスすることで直接溶解することができます。完全に溶解したら、遠心分離して上清を回収し、その後の実験に使用します。直接溶解の利点は、簡便でホモジナイザーが不要なことです。欠点は、ホモジナイザーを使用する場合に比べて溶解の完全性が低い可能性があることです。

[注記] ： RIPAバッファー使用時、溶解液中に少量の透明なゲル状物質が観察されることがあります。これは正常な現象であり、ゲノムDNAを含む複合体から構成されています。ゲノムDNAに強く結合するタンパク質を解析していない場合は、上清を遠心分離により直接回収し、下流のアプリケーションに使用することができます。DNAに強く結合するタンパク質を解析する場合は、超音波処理によりゲル状物質を分解・分散させた後、遠心分離により上清を回収することができます。NF-κBやp53などの一般的な転写因子の検出では、通常、検出可能な結果を​​得るために超音波処理は必要ありません。

文書:

安全データシート

20101_MSDS_HB250820_EN.PDF

マニュアル

20101_マニュアル_Ver.EN20250820.pdf